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實(shí)驗(yàn)二蛋白質(zhì)的沉淀與透析生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)之－－山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

1.學(xué)習(xí)蛋白質(zhì)沉淀和透析的基本原理2.掌握蛋白質(zhì)可逆沉淀、透析的基本操作方法

【實(shí)驗(yàn)原理】某些試劑（如硫酸銨、氯化鈉）與蛋白質(zhì)作用，可使蛋白質(zhì)沉淀；但當(dāng)除去使蛋白質(zhì)沉淀的因素后，蛋白質(zhì)又可再次溶于原來(lái)的溶劑中，這種沉淀作用稱為可逆的沉淀作用。一些物理因素（如劇烈震蕩、攪拌等）或化學(xué)因素（如重金屬離子、有機(jī)酸等），會(huì)破壞蛋白質(zhì)的穩(wěn)定的構(gòu)象，引起蛋白質(zhì)變性。即使除去了使蛋白質(zhì)沉淀的因素，蛋白質(zhì)也不能再溶于原來(lái)的溶劑中,即為不可逆沉淀作用。

在實(shí)驗(yàn)室分離純化蛋白質(zhì)的過(guò)程中，常利用透析的方法除去蛋白質(zhì)溶液中的小分子物質(zhì)（無(wú)機(jī)鹽、單糖等）。利用透析膜的半透膜作用，小分子物質(zhì)可以自由通過(guò)與周圍的緩沖溶液進(jìn)行物質(zhì)交換，大分子物質(zhì)（蛋白質(zhì)）保留在透析袋中而彼此分離。【實(shí)驗(yàn)步驟】1.蛋白質(zhì)的檢查取卵清蛋白/NaCl溶液2ml和10%NaOH溶液1ml，搖勻，加1%CuSO4溶液1~2滴，邊加邊搖。2）清蛋白沉淀過(guò)濾，除去鹽析出的蛋白質(zhì)。向?yàn)V液中加入硫酸銨粉末至飽和。

3.蛋白質(zhì)的透析（1）裝樣：取一段透析袋，將一端夾住，由開口端加入含有硫酸銨的清蛋白沉淀（不可裝太滿，并適當(dāng)排出空氣），夾住袋口。（2）透析：取10倍以上蛋白質(zhì)體積的去離子水，將裝好樣品的透析袋懸于大燒杯中部。在燒杯底部放一個(gè)磁子，緩慢攪拌以促進(jìn)溶液交換。更換洗脫溶液數(shù)次（約30min一次），至達(dá)到透析平衡為止。4.蛋白質(zhì)透析效果檢查1）Cl-的檢查：取洗出液約2ml，加10%HNO3溶液1~2滴至酸性，加1%AgNO32~3滴，觀察有無(wú)白色沉淀。

2）NH4+的檢查：

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