病毒與細胞的相互作用

病毒與細胞的相互作用第1頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月Needforviruscultivation病毒培養(yǎng)的必要性?分離鑒定Isolationandidentification?診斷Scientificanddiagnosticpurposes?疫苗生產(chǎn)Vaccineproduction第2頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)病毒的細胞培養(yǎng)病毒是嚴格的細胞內(nèi)寄生微生物，培養(yǎng)病毒必須使用細胞。根據(jù)病毒的不同選用敏感動物（動物接種）、雞胚（雞胚接種）或離體細胞進行分離培養(yǎng)（細胞培養(yǎng)）。第3頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月Culturesystemsofviruses不同病毒（宿主）培養(yǎng)系統(tǒng)不同*Bacteriophages(virusesthatinfectbacteria)——噬菌體*Plantvirus*Animalvirus第4頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月動物接種：接種后通常以動物發(fā)病、死亡作為感染的指標。按病毒侵襲部位不同選擇適當?shù)慕臃N途徑。嗜神經(jīng)病毒接種在小鼠的腦內(nèi)。痘苗病毒和單純皰疹病毒接種于家兔角膜。實驗動物的個體差異，動物保護問題。第5頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月Sucklingmice第6頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月guineapig第7頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月第8頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月第9頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月第10頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月NonhumanPrimates第11頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月雞胚接種：一種比較經(jīng)濟簡便的方法。第12頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月第13頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月第14頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月第15頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月EggCandling第16頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月第17頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月可采用絨毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔接種。第18頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月人或動物細胞在一定條件下可在實驗室的培養(yǎng)瓶內(nèi)生長。

優(yōu)點：每個細胞生理特性基本一致，對病毒易感性相等無個體差異，準確性和重復(fù)性好可嚴格執(zhí)行無菌操作，標準化。細胞培養(yǎng)本身就能顯示病毒的生長特征應(yīng)用空斑技術(shù)可進行病毒的克隆化組織培養(yǎng)（tissueculture）＝細胞培養(yǎng)（cellculture）第19頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月根據(jù)細胞的來源、染色體特征及傳代次數(shù)，可分為三種類型：原代細胞（primarycell）

：動物組織經(jīng)胰蛋白酶消化處理，使細胞分散而得到的細胞。二倍體細胞（diploidcellstrain）

：將長成單層的原代細胞消化分散成單個細胞，繼續(xù)培養(yǎng)傳代，其染色體數(shù)與原代細胞一樣，保持其二倍染色體數(shù)目的細胞，稱為二倍體細胞。傳代細胞（establishedcellline）

：能在體外持續(xù)增殖傳代的細胞，大多數(shù)由癌細胞或二倍體細胞突變而成。HeLa（人子宮癌細胞）、Vero（非洲綠猴腎細胞）、BHK-21（乳倉鼠腎細胞）、PK-15（豬腎細胞）等

（一）細胞的類型第20頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月第21頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）細胞培養(yǎng)的方法靜置培養(yǎng)：實驗室常用。細胞懸液裝瓶，5%CO2溫箱靜置培養(yǎng)，細胞沉降并貼附在玻面上生長分裂，最后長成單層。旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)：大規(guī)模生產(chǎn)疫苗。細胞在玻瓶內(nèi)生長時，玻瓶不斷緩慢旋轉(zhuǎn)，細胞帖附于玻瓶四周，長成單層。第22頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)病毒與細胞的相互作用殺細胞感染非殺細胞感染引致持續(xù)感染，對細胞代謝無影響。轉(zhuǎn)化

產(chǎn)生干擾素

第23頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月感染的類型對細胞的影響是否產(chǎn)生感染性病毒顆粒例證殺細胞細胞病變（CPE），細胞蛋白質(zhì)、RNA、DNA合成被抑制。細胞死亡是甲型皰疹病毒、腸病毒、呼腸孤病毒持續(xù)性、生產(chǎn)性無CPE，細胞代謝無甚妨礙，細胞繼續(xù)分裂，某些分化的細胞可失去某些功能是瘟病毒、砂粒病毒、狂犬病毒、大多數(shù)反錄病毒持續(xù)性、非生產(chǎn)性通常無影響否，但可通過共培養(yǎng)等誘導(dǎo)腦組織的犬瘟熱病毒轉(zhuǎn)化細胞形態(tài)改變，細胞可無限制傳代移植至實驗動物可產(chǎn)生腫瘤否，致腫瘤DNA病毒是，致腫瘤反錄病毒多瘤病毒、腺病毒鼠、禽白血病病毒病毒與細胞的相互作用

第24頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月

一、病毒引致的殺細胞變化

細胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)：由病毒感染導(dǎo)致的細胞損傷。CPE能在光學(xué)顯微鏡下觀察。常見的細胞形態(tài)學(xué)變化為細胞變圓、壞死、溶解、脫落或形成合胞體。有些病毒能形成包涵體。第25頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月tissueculturecellsepithelialepithelioidfibroblastic第26頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月epithelialcellsuninfectedearlyinfectionlateinfectionslidesfromCDC第27頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月fibroblasticcellsuninfectedearlyinfectionlateinfectionslidesfromCDC第28頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月CPEcytopathiceffects(CPE)第29頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月multinucleatedcells第30頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月Formationofmultinucleatedcells.第31頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月能夠使半數(shù)組織細胞在一定條件下發(fā)生細胞病變的病毒量。用于判定病毒的毒力。50%組織細胞感染量（TCID50）第32頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月在病毒感染過程中，宿主產(chǎn)生的抗體與病毒結(jié)合，非但未能阻斷病毒吸附宿主細胞，反而增強了病毒對細胞的感染，提高了病毒的滴度?？贵w依賴病毒感染的增強作用（Antibody-dependentenhancementofviralinfection,ADE）第33頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）空斑試驗將適當濃度的病毒懸液加入單層細胞培養(yǎng)中，當病毒吸附細胞后，再覆蓋一層融化的瓊脂。病毒在細胞內(nèi)復(fù)制后產(chǎn)生局限性病灶，病灶逐漸擴大，肉眼也能看見，此即空斑(plaque)。第34頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月第35頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月第36頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月空斑試驗的用途：1.測定病毒數(shù)量——PFU/mL2.純化病毒

單個空斑作懸液，梯度稀釋后再作空斑，可獲得病毒克隆。3.鑒定病毒

不同病毒的空斑具有不同的特征。第37頁，課件共40頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）包涵體（inclusionbody)定義：是某些病毒感染細胞產(chǎn)生的特征性的形態(tài)變化，在普通光學(xué)顯微鏡下可見胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)的呈嗜酸性或嗜堿性染色、大小數(shù)量不等的圓形或不規(guī)則形的團塊狀結(jié)構(gòu)，稱為包涵體。第3