生科第二章核酸化學(xué)

生科第二章核酸化學(xué)第1頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月核酸的概念和重要性1869年Miescher從細(xì)胞核中分離出核素（nuclein）。1889年，Altman制備了核酸（nucleicacid）。1930~40年，Kossel&Levene等確定核酸的的組分：核酸脫氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid，DNA）核糖核酸（ribonucleicacid，RNA）“四核苷酸假說”：核酸由四種核苷酸組成的單體構(gòu)成的，缺乏結(jié)構(gòu)方面的多樣性。第2頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月1944年，Avery等通過細(xì)菌轉(zhuǎn)化試驗證明DNA是遺傳物質(zhì)，核酸的重要性的得到了公認(rèn)。1953年，Watson和Crick提出了DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型，推動了分子生物學(xué)的迅猛發(fā)展。

第3頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月(DNA)(RNA)脫氧核糖核酸

核糖核酸95%分布于細(xì)胞核，其余分布于核外如線粒體，葉綠體，質(zhì)粒等。90%分布于細(xì)胞質(zhì)，其余分布于細(xì)胞核。攜帶遺傳信息（以基因的形式），決定細(xì)胞和個體的基因型(genotype)，最終決定個體不同的形態(tài)結(jié)構(gòu)。從DNA轉(zhuǎn)錄遺傳信息，并指導(dǎo)蛋白質(zhì)的生物合成。一些小分子RNA有重要的調(diào)節(jié)功能和催化功能。核酸的分布與功能第4頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月第5頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月第6頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月3.1核酸的組成成分核酸nucleicacid核苷酸nucleotide核苷nucleoside磷酸phosphate嘌呤堿purinebase或嘧啶堿pyrimidinebase（堿基base）核糖ribose或脫氧核糖deoxyribose

（戊糖amylsugar）主要元素組成：C、H、O、N、P(9~11%)。與蛋白質(zhì)比較，核酸一般不含S，而P的含量較為穩(wěn)定。

第7頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）戊糖：核糖和脫氧核糖β-D-核糖β-D-2-脫氧核糖第8頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）含氮堿：嘌呤堿和嘧啶堿NNNNHHHHNNNNHHHH123456789嘌呤（purine）NH2腺嘌呤adenine（A）NNNNHHHHOH2N鳥嘌呤guanine（G）第9頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月NNHHHH嘧啶（pyrimidine）123456NNHHHHNH2OH胞嘧啶cytosine（C）NNHHHHOOHH尿嘧啶uracil（U）NNHHHHOOHHCH3胸腺嘧啶thymine（T）第10頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月NNOOHHH酮式HNNOOHHH酮式HHH烯醇式在核酸中存在少量經(jīng)過化學(xué)修飾的堿基，由于含量很少，稱為微量堿基或稀有堿基。第11頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月第12頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月OHOH2COHOHOH1′2′3′4′5′核糖NNNNHHHH9腺嘌呤核苷（三）核苷（nucleoside）第13頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月OHOH2COHOHOH1′2′3′4′5′核糖OHOH2COHOH1′2′3′4′5′核糖NNOOHHH尿嘧啶H1尿苷NCOONHHH51OH假尿苷（ψ）第14頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月核苷nucleoside糖與堿基之間的C-N鍵，稱為C-N糖苷鍵。AdenosineGuanosineCytidineUridine第15頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月取代核苷的表示方式取代基團用英文小寫字母表示，堿基取代基團的符號寫在核苷單字符的左下角，核糖取代基團的符號寫在核苷單字符的右下角，取代基團的位置寫在取代基團符號的右上角，數(shù)字寫在右下角。7-甲基鳥苷m7G5-甲基脫氧胞苷m5dC核苷的表示方法

核糖核苷：A,G,U,C

脫氧核苷：dA,dG,dT,dC修飾核苷的表示符號假尿苷（ψ）次黃苷（肌苷）I

黃嘌呤核苷X

二氫尿嘧啶核苷D第16頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）核苷酸（nucleotide）

核苷酸=核苷+磷酸

=戊糖+堿基+磷酸核苷酸的表示方法:AMP、GMP、dCMP、dTMPpA、Cp第17頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月第18頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月各種核苷三磷酸和脫氧核苷三磷酸是體內(nèi)合成RNA和DNA合成的直接原料。在體內(nèi)能量代謝中的作用：ATP——能量“貨幣”，生物系統(tǒng)化學(xué)能的儲藏和利用。UTP——參加糖的互相轉(zhuǎn)化與合成。CTP——參加磷脂的合成。GTP——參加蛋白質(zhì)和嘌呤的合成。AMP是一些輔酶的結(jié)構(gòu)成分，如NAD+、NADP+

、FAD激素的第二信使——cAMP第19頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月cAMPcAMP(3’,5’-環(huán)化腺苷酸)的主要功能是作為細(xì)胞的第二信使。cAMP的環(huán)狀磷酯鍵是一個高能鍵。在pH7.4，cAMP和cGMP的水解能約為43.9KJ/mol，比ATP水解能高得多。第20頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月3.2核酸的一級結(jié)構(gòu)（primarystructure）堿基序列（basesequence)即為DNA的一級結(jié)構(gòu)。通常堿基序列由DNA鏈的5

→3方向?qū)憽個核苷酸組成的DNA鏈中可能有的不同序列總數(shù)為4n。一級結(jié)構(gòu)-----核酸分子中核苷酸的排列順序及連接方式。核苷酸的排列順序代表了遺傳信息。第21頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月2、核苷酸的連接方式：3,5磷酸二酯鍵1、核酸的基本結(jié)構(gòu)單位：核苷酸末端：5

端（常用5

-P）、3端（3

-OH）多核苷酸鏈具有方向性：5端→3端(由左至右)3、表示方法：結(jié)構(gòu)式、線條式、文字縮寫核苷酸的連接方式

多核苷酸長鏈：一個核苷酸的3

-OH

與另一分子核苷酸的5

-磷酸基形成3,5

-磷酸二酯鍵相連而成的鏈狀聚合物。第22頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月pGpCp↓CpApGpC↓pCpA第23頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月3.3DNA的二級結(jié)構(gòu)（doublehelixmodel）第24頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月1.雙螺旋結(jié)構(gòu)模型的實驗依據(jù)（1）X射線衍射數(shù)據(jù)不同來源的DNA纖維具有相似的X射線衍射圖譜。（2）關(guān)于堿基成對的證據(jù)堿基組成規(guī)則（Chargaff規(guī)則）

[A]=[T]，[G]=[C]；[A]+[G]=[T]+[C][A]=

[T]；[G]

[C]（3）電位滴定行為電位滴定證明，嘌呤與嘧啶的可解離基團由氫鍵連接。

第25頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月2.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型要點1.兩條多核苷酸鏈反向平行，兩條糖-磷酸主鏈圍繞同一中心軸成右手螺旋。螺旋表面形成大溝(majorgroove)與小溝(minorgroove)。2.堿基處于螺旋的內(nèi)側(cè)，遵循堿基互補原則：[A]=

[T]；[G]

[C]。?=2nm。3.成對堿基大致處于同一平面，與螺旋軸垂直；糖環(huán)平面與螺旋軸平行，磷酸基位于糖環(huán)的外側(cè)；螺距：10bp(basepair)—3.4nm—0.34nm（堿基堆積力）。4.多數(shù)DNA屬雙鏈結(jié)構(gòu)DNA（dsDNA），某些病毒的DNA是單鏈DNA（ssDNA）。5.主鏈化學(xué)鍵受堿基配對因素的影響旋轉(zhuǎn)受到限制，呈較伸展的結(jié)構(gòu)，但也有一定柔韌性，形成不同的構(gòu)象類型。第26頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月第27頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月3.DNA二級結(jié)構(gòu)的其他類型B-DNA：92%相對濕度，接近細(xì)胞內(nèi)的DNA構(gòu)象，與Watson和Crick提出的模型相似。A-DNA：75%相對濕度，與溶液中DNA-RNA雜交分子的構(gòu)象相似，推測轉(zhuǎn)錄時發(fā)生B→A。其堿基平面傾斜20°，螺距與每一轉(zhuǎn)堿基對數(shù)目都有變化。Z-DNA：主鏈呈鋸齒型左向盤繞，直徑約1.8nm，螺距4.5nm，每一轉(zhuǎn)含12個bp，只有小溝。B-DNA與Z-DNA的相互轉(zhuǎn)換可能和基因的調(diào)控有關(guān)。C-DNA：44~46%相對濕度，螺距3.09nm，每轉(zhuǎn)螺旋9.33個堿基對，堿基對傾斜6°。可能是特定條件下B-DNA和A-DNA的轉(zhuǎn)化中間物。D-DNA：60%相對濕度，DNA中A、T序列交替的區(qū)域。每個螺旋含8個bp，螺距2.43nm，堿基平面傾斜16°。第28頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月DNAdoublehelix類型

helixtypebp/turnDverticalrise/bpdirectionA112.30.255右

B102.00.34右

Z121.80.37左第29頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月3.4DNA的高級結(jié)構(gòu)（tertiarystructure）一段雙螺旋在螺旋均已形成的情況下，雙鏈環(huán)不發(fā)生進一步扭曲，稱松弛環(huán)形DNA。若將線形DNA的螺旋先擰松兩周再連接成環(huán)時，解鏈部分形成突環(huán)稱解鏈環(huán)型DNA。DNA雙螺旋進一步扭曲成超螺旋構(gòu)成三級結(jié)構(gòu)。1.環(huán)狀DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)第30頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月超螺旋：由于某種原因，雙鏈環(huán)狀DNA（dcDNA）分子中產(chǎn)生了額外的張力，從而進一步扭曲形成雙螺旋的再螺旋。扭曲張力使突環(huán)有形成雙螺旋的趨勢。兩條鏈之間的扭曲引起雙鏈環(huán)向右手方向的扭曲，使之形成右手超螺旋，又稱負(fù)超螺旋(negativesupercoil)。第31頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月螺旋和超螺旋電話線螺旋超螺旋第32頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月L=25,T=25,W=0松弛環(huán)形1152010523L=23,T=23,W=0解鏈環(huán)形15101520231510152025L=23,T=25,W=–2負(fù)超螺旋121482316131510152023右手旋轉(zhuǎn)擰松兩匝后的線形DNADNA超螺旋的形成超螺旋的拓?fù)鋵W(xué)公式：L=T+W第33頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月第34頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月2.真核生物染色體的結(jié)構(gòu)DNA以負(fù)超螺旋纏繞在組蛋白上，形成核粒(核小體)

，核粒由DNA鏈連在一起形成念珠狀結(jié)構(gòu)。組蛋白核心：H2B,H2A,H3,H4。H1組蛋白在核小體之間。第35頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月DNA的存在形式第36頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月染色體包裝------多級螺旋模型壓縮倍數(shù)76405（8400）

DNA→核小體→螺線管→超螺線管→染色單體

2nm10nm30(10)nm400nm2~10μm

一級包裝二級包裝三級包裝四級包裝

第37頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月3.5DNA與基因組DNATranscriptionRNA（mRNA、tRNA、rRNA）TranslationProtein基因基因（gene）：一段有功能的DNA片段，DNA分子中最小的功能單位。結(jié)構(gòu)基因：為RNA或蛋白質(zhì)編碼的基因。調(diào)節(jié)基因：只有調(diào)節(jié)功能，而并不轉(zhuǎn)錄生成RNA的片斷。（一）DNA與基因的概念基因組（genome）：某生物體所含全部遺傳物質(zhì)的總和。第38頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）病毒和細(xì)菌基因組的特點1.DNA大部分為結(jié)構(gòu)基因，每個基因出現(xiàn)頻率低。2.功能相關(guān)基因串聯(lián)在一起，并轉(zhuǎn)錄在同一mRNA中。3.有基因重疊現(xiàn)象。（三）真核生物基因組的特點1.有重復(fù)序列單拷貝序列：在整個DNA中出現(xiàn)頻率低，主要為編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。中度重復(fù)序列：在DNA中可重復(fù)幾十次到幾千次。tRNA、rRNA高度重復(fù)序列：可重復(fù)幾百萬次第39頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月2.有斷裂基因（splitgene）：基因中存在內(nèi)含子。mRNA1872bp內(nèi)含子（intron)：基因中不編碼的序列。ABCDEG7700bpF外顯子（exons）：基因中編碼的序列。。transcription第40頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月RNA是單鏈分子，因此在RNA分子中，嘌呤的總數(shù)不一定等于嘧啶的總數(shù)。RNA分子中，部分區(qū)域也能形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，不能形成雙螺旋的部分，則形成單鏈突環(huán)。3.6RNA的結(jié)構(gòu)與功能RNA分子是含短的不完全的螺旋區(qū)的多核苷酸鏈。mRNA（messengerRNA）:指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成。rRNA（ribosoalRNA）

：與蛋白質(zhì)結(jié)合構(gòu)成核糖體（ribosome）。tRNA（transferRNA）

：將AA轉(zhuǎn)運到核糖體的特定部位用于Pro合成。第41頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月第42頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）tRNAtRNA約占RNA總量的15%，由核內(nèi)形成并迅速加工后進入細(xì)胞質(zhì)。功能：轉(zhuǎn)運AA到核糖體mRNA的相應(yīng)位置，用于合成蛋白質(zhì)。1965年Holley測定AlatRNA一級結(jié)構(gòu)，提出tRNA的三葉草二級結(jié)構(gòu)模型。第43頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月氨基酸臂可變環(huán)主要特征：1.由四臂四環(huán)組成；2.氨基酸臂：3′端有CCAOH的共同結(jié)構(gòu)，接受活化的AA；3.D環(huán)和D臂：含有D；4.反密碼子環(huán)和反密碼子臂：反密碼子環(huán)上的反密碼子與mRNA相互作用；5.可變環(huán)上的核苷酸數(shù)目可以變動；6.TψC環(huán)：識別核蛋白體（核糖體）7.含有修飾堿基和不變核苷酸。tRNA的二級結(jié)構(gòu)——三葉草形（cloverleafpattern）第44頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月二氫尿嘧啶(DHU)假尿嘧苷()次黃嘌呤(I)反密碼子（anticodon）：反密碼環(huán)中部的三個堿基可以與mRNA的三聯(lián)體密碼形成堿基互補配對，解讀遺傳密碼，稱為反密碼子。I常出現(xiàn)于反密碼子中。第45頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月tRNA的三級結(jié)構(gòu)——倒“L”型分子的右上端是氨基酸臂，下端是反密碼子環(huán)。D環(huán)和TψC環(huán)的未配對堿基在空間形成新的氫鍵配對關(guān)系，位于L的轉(zhuǎn)角處。氨基酸臂和TψC臂同軸排列，形成連續(xù)雙螺旋；反密碼子臂和D臂沿同軸排列。第46頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）rRNA

占細(xì)胞RNA總量的80%，與蛋白質(zhì)（40%）共同組成核糖體。原核生物

真核生物核糖體rRNA核糖體rRNA70S（30S、50S）16S5S、23S80S（40S、60S）18S5S,5.8S,28S

功能:組成核蛋白體，作為蛋白質(zhì)合成的場所。

結(jié)構(gòu)特點：單鏈，多環(huán)多臂結(jié)構(gòu)，其自身折疊形成的構(gòu)象決定了核糖體亞基的形態(tài)。第47頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）mRNA與hnRNAmRNA約占細(xì)胞RNA總量的3~5%，是蛋白質(zhì)合成的模板。真核生物mRNA的前體在核內(nèi)合成，形成分子大小極不均勻的hnRNA。DNAmRNA蛋白轉(zhuǎn)錄翻譯原核細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核DNA內(nèi)含子外顯子轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄后剪接轉(zhuǎn)運mRNAhnRNA翻譯蛋白真核細(xì)胞第48頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）snRNA（核內(nèi)小RNA）和asRNA（反義RNA）snRNA主要存于細(xì)胞核中，在hnRNA和rRNA的加工、細(xì)胞分裂和分化、協(xié)助細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運輸、構(gòu)成染色質(zhì)等方面有重要作用。asRNA可通過互補序列與特定的mRNA結(jié)合，抑制mRNA的翻譯，還可抑制DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。第49頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月RNA的其它功能1981年，Cech發(fā)現(xiàn)RNA的催化活性，提出核酶（ribozyme）。大部分核酶參加RNA的加工和成熟，也有催化C-N鍵的合成。23SrRNA具肽酰轉(zhuǎn)移酶活性。RNA在DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯中均有一定的調(diào)控作用，與某些物質(zhì)的運輸與定位有關(guān)。第50頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月3.7核酸的性質(zhì)（一）一般理化性質(zhì)（二）紫外吸收性質(zhì)（三）核酸結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性（四）核酸的的變性（五）核酸的復(fù)性（退火）（六）核酸的分子雜交第51頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）一般理化性質(zhì)

為兩性電解質(zhì)，通常表現(xiàn)為酸性。

DNA為白色纖維狀固體，RNA為白色粉末，不溶于有機溶劑。

DNA溶液的粘度極高，DNA>RNA

?？杀凰?、堿或酶不同程度水解，進行分離。RNA能在室溫條件下被稀堿水解而DNA對堿穩(wěn)定。利用核糖和脫氧核糖不同的顯色反應(yīng)鑒定DNA與RNA。核糖+H+糠醛甲基間苯二酚FeCl3綠色產(chǎn)物Δ脫氧核糖+H+

Δω-羥基-γ-酮戊醛二苯胺藍(lán)色產(chǎn)物第52頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月嘌呤堿和嘧啶堿分子中都含有共軛雙鍵體系，在紫外區(qū)有吸收（260nm左右）。（二）核酸的紫外吸收性質(zhì)第53頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月核酸的光吸收值比各核苷酸光吸收值的和少30~40%;核酸變性后，紫外吸收值顯著增加（增色效應(yīng)hyperochromiceffect

）;核酸復(fù)性后，光吸收值又回復(fù)到原有水平（減色效應(yīng)（hypochromiceffect））。2202402602800.10.20.30.4波長（nm）光吸收1231.天然DNA2.變性DNA3.核苷酸總吸收值第54頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（1）堿基對間的氫鍵（較弱）：環(huán)間堿基對形成的氫鍵是穩(wěn)定RNA的三級結(jié)構(gòu)的重要因素。（2）堿基堆積力（basestackingforce)：由芳香族堿基π電子間的相互作用引起的，能形成疏水核心，對維持核酸的空間結(jié)構(gòu)起主要作用；（3）環(huán)境中的正離子（如Na+、K+和Mg2+）

：與磷酸基團結(jié)合，消除雙鏈間的靜電斥力。氫鍵維持雙鏈橫向穩(wěn)定性，堿基堆積力維持雙鏈縱向穩(wěn)定性。（三）核酸結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性第55頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）核酸的的變性（denaturation）定義：指雙螺旋區(qū)氫鍵斷裂，空間結(jié)構(gòu)破壞，形成單鏈無規(guī)線團狀的過程。變性只涉及次級鍵的破壞。第56頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月變性方法：pH（>11.3或<5.0）過量酸，堿，加熱，變性試劑如尿素、酰胺、甲醛以及某些有機溶劑如乙醇、丙酮等；低離子強度。變性后特征：OD260增高；粘度下降；浮力密度升高；生物活性部分或全部喪失。增色效應(yīng)（hyperochromiceffect）：DNA變性時其溶液OD260增高的現(xiàn)象。

第57頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月

當(dāng)DNA的稀鹽溶液加熱到80-100℃時，雙螺旋結(jié)構(gòu)即發(fā)生解體，兩條鏈彼此分開，形成無規(guī)線團。8090100100%50%OD260（254）

Tm

變性溫度范圍①②③℃熱變性和Tm熔解溫度（meltingtemperature,Tm）：DNA熱變性過程中，紫外吸收的增加量達(dá)到最大增量一半時的溫度稱熔解溫度（解鏈溫度、變性溫度）。第58頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月影響Tm的因素：（1）G-C對含量：GC含量越高，Tm越大

（G+C）%=（Tm—69.3）×2.44（2）溶液的離子強度低，Tm低。（3）高pH下堿基廣泛去質(zhì)子而喪失形成氫鍵的能力。（4）變性劑如甲酰胺、尿素、甲醛等破壞氫鍵，妨礙堿基堆積，使Tm下降。第59頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（五）核酸的復(fù)性（退火）(renaturation)（1）單鏈片段濃度（2）單鏈片段的大?。?）片段內(nèi)重復(fù)序列的多少（4）溶液離子強度的大小定義:變性核酸的互補鏈在適當(dāng)條件下重新締合成雙螺旋的過程。變性核酸復(fù)性時需緩慢冷卻，故又稱退火(annealing)。影響復(fù)性速度的因素：第60頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（六）分子雜交(hybridization)定義：在退火條件下，不同來源的DNA互補區(qū)形成氫鍵，或DNA單鏈和RNA鏈的互補區(qū)形成DNA-RNA雜合雙鏈的過程。探針：用放射性同位素或熒光標(biāo)記的DNA或RNA片段。原位雜交技術(shù)：直接用探針與菌落或組織細(xì)胞中的核酸雜交。Southern印跡法：將電泳分離后的DNA片段從凝膠轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，再進行雜交。Northern印跡法：將電泳分離后的RNA吸印到纖維素膜上再進行分子雜交。第61頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月核酸探針（nucleicacidprobe）:能特異性的探測帶某一特定序列的DNA或RNA分子的標(biāo)記核酸分子。第62頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月Southern印跡法DNA分子限制片段限制性酶切割瓊脂糖電泳轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上與放射性標(biāo)記DNA探針雜交放射自顯影帶有DNA片段的凝膠凝膠濾膜用緩沖液轉(zhuǎn)移DNA吸附有DNA片段的膜第63頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月第64頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月3.8核酸的序列測定目前多采用Sanger酶法（雙脫氧鏈終止法）和焦磷酸測序技術(shù)。OHOH2CHHOH1′2′3′4′5′核糖NNNNHHHH9腺嘌呤ddATPPPP第65頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月第66頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月（1）核酸的分子組成：嘌呤、嘧啶和核苷酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)與縮寫符號。堿基的配對規(guī)律。（2）核酸的分子結(jié)構(gòu)：戊糖與嘌呤、嘧啶以及磷酸的連接方式；核苷酸鏈的連接方式。一級結(jié)構(gòu)：3,5磷酸二酯鍵；5ˊ端→3ˊ端；RNA類型及結(jié)構(gòu)和功能特點；二級結(jié)構(gòu)特點：DNA雙螺旋；tRNA“三葉草”；三級結(jié)構(gòu)特點：DNA超螺旋結(jié)構(gòu)；tRNA“倒L”結(jié)構(gòu)；（3）比較核酸分子的組成和結(jié)構(gòu)上的特點及其生物功能。（4）核酸的理化性質(zhì)：紫外吸收，DNA變性、復(fù)性，分子雜交。重要名詞：

denaturation；renaturation；meltingtemperature（Tm）；hyperochromiceffect；annealing；hybridization重點第67頁，課件共74頁，創(chuàng)作于2023年2月問答題1、某DNA樣品含腺嘌呤15.1%（按摩爾堿基計），計算其余堿基的百分含量。

2、DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)是什么時候，由誰提出來的？試述其結(jié)構(gòu)模型。3、DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)有些什么基本特點？這些特點能解釋哪些最重要的生命現(xiàn)象？4、tRNA的結(jié)構(gòu)有何特點？有何功能？5、DNA和RNA的結(jié)構(gòu)有何異同？6、簡述核酸研究的進展，在生命科學(xué)中有何重大意義？6、計算（1）分子量為3105的雙股DNA分子的長度；（2）這種DNA一分子占有的體積；（3）這種DNA一分子占有的螺旋圈數(shù)。（一個互補的脫氧核苷酸殘基對的平均分子量為618）