藥物的含量測(cè)定方法

藥物的含量測(cè)定方法第1頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

化學(xué)分析法

重量分析容量分析含量測(cè)定儀器分析法效價(jià)測(cè)定（生物學(xué)法）可見紫外分光高效液相色譜法氣相色譜法第2頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月藥物的含量測(cè)定容量分析法三種分析方法光譜分析法色譜分析法特點(diǎn)操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確，耐用性高，但專屬性差特點(diǎn)特點(diǎn)簡(jiǎn)便快速、靈敏度高，有一定的準(zhǔn)確度，但專屬性稍差靈敏度與專屬性都高，有一定的準(zhǔn)確度，但結(jié)果需要對(duì)照品適用于準(zhǔn)確度與精確度要求較高的樣品測(cè)定適用于靈敏度要求較高，樣本量較大的分析項(xiàng)目適用于專屬性和靈敏度要求較高的復(fù)雜樣品第3頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)容量分析法定義將已知濃度的滴定液，由滴定管滴加到被測(cè)藥物的溶液中，直至滴定液與被測(cè)藥物反應(yīng)完全，然后根據(jù)滴定液消耗的濃度和被消耗的體積，按化學(xué)計(jì)量關(guān)系式計(jì)算出被測(cè)藥物的含量。亦稱滴定法第4頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月特點(diǎn)1.方法簡(jiǎn)便易行：儀器價(jià)廉易得，操作簡(jiǎn)便快速2.方法耐用性高：影響測(cè)定的試驗(yàn)條件與環(huán)境因素少3.測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確：誤差低于0.2%4.方法專屬性差：對(duì)相近雜質(zhì)干擾缺少選擇，適用于主成分含量較高的樣品(如原料藥)分析第5頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)定量分析方法容量分析法有關(guān)計(jì)算例:用碘量法測(cè)定維生素C的含量時(shí)，《中國(guó)藥典》規(guī)定：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于8.806mg的維生素C（C2H8O6）T(滴定度):1ml滴定液(mmol/L)相當(dāng)于被測(cè)藥物的毫克數(shù)第6頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月被測(cè)藥物滴定液藥物分子量滴定液濃度滴定度的計(jì)算第7頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月示例一計(jì)算VitC的滴定度T碘量法測(cè)定VitC含量M(C6H6O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/Lm=0.05mol/L11M=176.13第8頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月示例二異煙肼的滴定度溴酸鉀法測(cè)定異煙肼含量[M(C6H7N3O)=137.14]，C溴酸鉀=0.01667mol/Lab第9頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月滴定含量計(jì)算W測(cè)=NFTV取用倍數(shù)濃度校正因數(shù)滴定度消耗體積例:VitC的含量測(cè)定:精密稱取本品0.1332g,置錐形瓶中,加稀醋酸與新沸過的冷蒸餾水的混合液(1:10)110ml,加淀粉批示液1ml,用碘滴定液(0.05014mol/L)滴定至藍(lán)色,用去15.02ml,每1ml的碘液(0.05mol/L)相當(dāng)于8.806mgC6H8O6，計(jì)算本品是否符合藥典規(guī)定的含量限度。藥典規(guī)定含C6H8O6

不得低于99.0%。濃度校正因數(shù)滴定度消耗體積F=實(shí)際C規(guī)定C第10頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月計(jì)算步驟W測(cè)=NFTV×———0.050140.05×8.806×10-3×15.02=0.13263(g)VitC的百分含量(%)VitC%=W測(cè)

W樣0.132630.1332==99.57%=10.1332樣品中VitC含量(W測(cè))第11頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月又例非那西丁含量測(cè)定

精密稱取本品0.3630g加稀鹽酸回流1小時(shí)后，放冷，用亞硝酸鈉滴定液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00ml。每1ml亞硝酸鈉液（0.1mol/L）相當(dāng)于17.92mg的C10H13O2N，請(qǐng)計(jì)算非那西丁的含量。第12頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月需做空白試驗(yàn)的計(jì)算公式W測(cè)=NFT（V-V0）例:萘普生的含量測(cè)定：精密稱取本品0.4960g，加甲醇45ml溶解后，再加水15ml與酚酞指示劑3滴，用NaOH滴定液（0.1078mol/L）滴定，同時(shí)用空白試驗(yàn)校正，求萘普生百分含量。《中國(guó)藥典》規(guī)定每1mlNaOH滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于23.03mgC14H14O3。按干燥品計(jì)算，含C14H14O3不得少于98.5%。滴結(jié)果如下：V=19.85ml，V0=0.10ml，干燥失重=0.40%。第13頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月光譜分析法藥典收載紫外可見分光度法原子吸收分光光度法紅外分光度法熒光分析法火焰光度法二、光譜分析法

第14頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月紫外可見分光度法基于物質(zhì)對(duì)紫外區(qū)(200~400nm)和可見光區(qū)(400~760nm)的單色光輻射建立起來的光譜分析法朗伯-比爾定律基礎(chǔ)第15頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月紫外可見分光度法方法特點(diǎn)與適用范圍1.簡(jiǎn)便易行：本法使用的儀器價(jià)格比較低廉，操作簡(jiǎn)單，易于普及2.靈敏度高：適用于低濃度試樣分析3.準(zhǔn)確度較高：本法誤差在2%~5%之間，適用于對(duì)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度要求較高的樣品4.專屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對(duì)結(jié)構(gòu)相近的有關(guān)物質(zhì)缺乏選擇性。本法比較少應(yīng)用于原料藥的含量測(cè)定，可用于制劑的含量測(cè)定，更多的應(yīng)用于生物制劑的定量檢查本法紫外區(qū)須選用石英比色皿，比色皿一般為1cm，吸光度在0.3~0.7之間為宜，選用最大吸收光波長(zhǎng)。第16頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月紫外可見分光度法含量測(cè)定方法3種方法對(duì)照品比較法吸收系數(shù)法計(jì)算光度法(少用)第17頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月紫外可見分光度法含量測(cè)定方法1.對(duì)照品比較法分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液,所用溶劑量?jī)烧呦嗤?在規(guī)定的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度.按下式計(jì)算結(jié)果第18頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月紫外可見分光度法含量測(cè)定方法2.吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法:引入吸光系數(shù)的含量計(jì)算方法含量%=—————1%1cmE1%1cmE（）供（）標(biāo)藥典記載第19頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月[例]

已知VitB12在361nm處的百分吸收系數(shù)為207，現(xiàn)測(cè)得其水溶液的吸收度為0.414，吸收池厚度為1cm，求其濃度。解：C=AL1%1cmE=————=0.00200()0.414207×1g/100ml單位?第20頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月[例]精密稱取VitB12供試品25.0mg，加水溶解并稀釋制成1000mL，于1cm厚的吸收池中，在361nm處測(cè)得吸收度為0.507，已知其百分吸收系數(shù)為207，求其百分含量。解：C=m/V=25×10-3/1000（g/ml）=（g/100ml）2.5×10-3

1%1cmE()供=A/CLVitB12%=————1%1cmE1%1cmE（）供（）標(biāo)=202.8/207=97.97%=0.507/(2.5×10-3×1)

用A算出（）供，再用其與已知（）標(biāo)比值1%1cmE1%1cmE=202.8第21頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月[例]用UV法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚的含量：精密稱取本品0.0410g，置250ml量瓶中，加0.4%NaOH溶液50ml,溶解后,加水于刻度,搖勻。精密量取5ml,置100ml量瓶中,加0.4%NaOH溶液10ml,溶解后,加水至刻度,搖勻。在257nm處測(cè)得吸收度為0.580，按其百分吸收系數(shù)715計(jì)算，求其百分含量。解：C=m/V=（g/100ml）8.2×10-4

1%1cmE()供=A/CLVitB12%=————1%1cmE1%1cmE（）供（）標(biāo)=707.3/715=98.93%=0.580/8.2×10-4=707.3第22頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月特點(diǎn)：靈敏度高，可達(dá)10-10～10-12g/ml

要求低濃度下測(cè)定須做空白測(cè)定熒光弱的藥物可衍生化后測(cè)定(二)熒光分析法第23頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(三)色譜分析法1.HPLC1.1內(nèi)標(biāo)法

As：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積或者峰高AR:對(duì)照品的峰面積或者峰高Cs:內(nèi)標(biāo)物質(zhì)濃度CR：對(duì)照品濃度兩步:(1)測(cè)f;(2)測(cè)含量(1)測(cè)f(用標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物)第24頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月As’：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積或者峰高Ax:供試品的峰面積或者峰高Cs’:內(nèi)標(biāo)物質(zhì)濃度f：校正因子(2)測(cè)含量(用樣品與內(nèi)標(biāo)物)第25頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月示例一炔諾酮的含量測(cè)定

照高效液相色譜法(附錄ⅤD測(cè)定)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(65:35)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為244nm。理論塔板數(shù)按炔諾酮峰計(jì)算不低于1500，炔諾酮峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度及主成分峰后一雜質(zhì)峰與主成分峰的分離度均應(yīng)符合要求。內(nèi)標(biāo)溶液的制備取黃體酮約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。第26頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月測(cè)定法

取本品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液2ml與內(nèi)標(biāo)溶液3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜儀，記錄色譜圖；另取炔諾酮對(duì)照品適量，精密稱定，同法測(cè)定。按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。第27頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月例HPLC法測(cè)定磺胺嘧啶的含量對(duì)照品+內(nèi)標(biāo)溶液配制：精密稱取對(duì)照品50.0mg，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度,搖勻。精密量取5ml,置25ml量瓶中,精密加內(nèi)標(biāo)溶液(0.20mg/ml)5ml,加流動(dòng)相至刻度,搖勻。供試品+內(nèi)標(biāo)溶液配制：精密稱取本品50.5mg，照上法配制。取上述兩種溶液各10μl進(jìn)樣，測(cè)得對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)峰分別為1350和1040，供試品峰和內(nèi)標(biāo)峰分別為1313和1013。求SD的含量。解：由于對(duì)照品和供試品稀釋倍數(shù)相同，所以直接按質(zhì)量代替濃度計(jì)算As/CsAr/mr=f=As/CsAx/mx1040/0.201350/50.0=f=1013/0.201313/mx解之,得:mx=49.924(mg)SD%=49.924/50.5=98.86%第28頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.外標(biāo)法第29頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(二)GC內(nèi)標(biāo)法第30頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法不經(jīng)有機(jī)破壞經(jīng)有機(jī)破壞直接測(cè)定配位滴定法氧化還原滴定法水解后測(cè)定酸水解堿水解經(jīng)還原分解后測(cè)定濕法破壞——?jiǎng)P氏定氮法干法破壞高溫灼燒法氧瓶燃燒法第31頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法(一)、直接測(cè)定法

葡萄糖酸鈣EDTA配位滴定富馬酸亞鐵鄰二氮菲-硫酸鈰滴定葡萄酸銻鈉間接碘量法(二)、經(jīng)水解后測(cè)定法適用范圍：金屬原子不直接于碳原子相連或某些C-M鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物。第32頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法1、堿水解法三氯叔丁醇銀量法返滴定2、酸水解法適用范圍：含鹵素有機(jī)藥物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物。EDTA配位滴定第33頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法(三)、經(jīng)還原分解后測(cè)定法適用范圍：碘原子直接與芳環(huán)連接的含碘有機(jī)化合物。泛影酸3NaI第34頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法

含氮、硫、硫柳汞、氯化鈉的生物制品、含氮有機(jī)合成藥物測(cè)定的前處理和生物制品中金屬元素測(cè)定時(shí)生物基質(zhì)的去除。H2SO4-HNO3H2SO4-HClO4H2SO4-H2SO4HNO3-KMnO4分解劑/消化劑輔助分解劑——?jiǎng)P氏定氮法測(cè)定含有氨基和酰胺結(jié)構(gòu)的藥物結(jié)構(gòu)(一)濕法破壞第35頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法原理

將含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子中有機(jī)結(jié)構(gòu)被“消化”成CO2和H2O，有機(jī)結(jié)合的氮轉(zhuǎn)化為無機(jī)氮，與過量的硫酸結(jié)合為硫酸氫銨和硫酸銨，經(jīng)堿化后釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。

常量法——含氮量25～30mg

半微量法——含氮量

1.0～2.0mg第36頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法凱氏燒瓶K2SO4(提高消解溫度)CuSO4(加快消解速度)硫酸堿液硼酸(吸收液)甲基紅-溴甲酚綠指示劑硫酸滴定空白校正先用強(qiáng)酸水解再用含堿硫代硫酸鈉中和最后用堿釋放出氨氣，并蒸餾出之第37頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(二)干法破壞1.高溫灼燒法用于含鹵素、含磷藥物和藥物中砷鹽的檢查。常加入無水碳酸鈉、硝酸鎂、氫氧化鈣、氧化鋅等輔助灰化。2.氧瓶燃燒法第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法

系指將含有待測(cè)元素的有機(jī)藥物置于充滿氧氣的密閉的密閉的燃燒瓶中充分燃燒，使有機(jī)結(jié)構(gòu)部分徹底分解為CO2和H2O，待測(cè)元素根據(jù)電負(fù)性的不同轉(zhuǎn)化為不同價(jià)態(tài)的氧化物，被吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，再根?jù)其性質(zhì)和存在方式選擇方法進(jìn)行分析。第38頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法燃燒時(shí)待測(cè)物轉(zhuǎn)化成不同價(jià)態(tài)的無機(jī)物以供測(cè)定濾紙包裝樣品第39頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)藥品分析方法的驗(yàn)證藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則目的：

證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求效能指標(biāo)：

評(píng)價(jià)分析方法的尺度

效能指標(biāo)包括:

精密度,準(zhǔn)確度,檢測(cè)限,定量限,選擇性,線性與范圍,耐用性第40頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)藥品分析方法的驗(yàn)證一、準(zhǔn)確度（accuracy）

系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度。(一)含量測(cè)定方法回收率(Recovery)回收試驗(yàn)加樣回收試驗(yàn)3×3，至少9個(gè)測(cè)定結(jié)果第41頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)藥品分析方法的驗(yàn)證二、精密度(Precision)

系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之接近的程度。表示：偏差(d)、標(biāo)準(zhǔn)偏差(s),、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)重復(fù)性:

同一實(shí)驗(yàn)室,同一人多次測(cè)定的精密度中間精密度:

同一實(shí)驗(yàn)室，不同人，不同儀器測(cè)定的精密度

重現(xiàn)性:

不同實(shí)驗(yàn)室，不同人測(cè)定的精密度第42頁(yè)，課件共46頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)藥品分析方法的驗(yàn)證三、專屬性(Specificity