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文檔簡介
質(zhì)粒DNA的制備
限制性內(nèi)切酶切割重組質(zhì)粒朱文博中山醫(yī)學(xué)院基因克隆定義:經(jīng)無性繁殖獲得基因許多相同拷貝的過程。通常是將單個(gè)基因?qū)胨拗骷?xì)胞中復(fù)制而成。
基因工程定義:實(shí)現(xiàn)基因克隆所采用的方法及相關(guān)的工作統(tǒng)稱為基因工程,又稱重組DNA技術(shù)?;岩蚝憧藥r隆糞示強(qiáng)意鄭圖分旺、狐切接轉(zhuǎn)篩基貼因瓜載喪體基魯因蠅工鍵程糕中翻常然用疲的破載柔體立(v肉e悔c帶t址o級r妄)主朝要留包孕括質(zhì)邁粒(p鍵l訓(xùn)a振s正m皮i照d賴)、噬宴菌仰體(p彎h呼a哈g萌e挑)和病爐毒(v久i等r納u俱s僑)柯宋斯偶質(zhì)魄粒。致這廁些這載浮體寧均茂需沖經(jīng)此人惱工網(wǎng)構(gòu)辦建棋,場除爺去踢致廚病蒙基盟因膛,影并桑賦潮予虎一稍些耍新市的茄功義能姿,馬如然有混利去于陜進(jìn)幫行煌篩勒選敬的降標(biāo)浸志娘基籠因速、眠單杏一歉的黑限妻制占酶牙切再點(diǎn)皮等慮。實(shí)丸驗(yàn)芽內(nèi)協(xié)容2香.限窄制忍性講內(nèi)依切酸酶絨的窗酶文切蓄鑒伍定(感P心8架2漿)3附.定抹性寸鑒罵定:待D沈N衫A的義瓊繳脂劑糖煙凝訓(xùn)膠繭電傻泳4車.定申量虹檢純測獵:D柱N政A的神紫緩?fù)獍し謾压獗馐叶雀椒ㄈy麻定(蠻P郵3墓9栗)1焦.質(zhì)友粒D凳N籃A的傳提嗚取撕與愿純罩化(悼P敘7援0堿霉法)實(shí)形驗(yàn)說目夾的掌霸握觀堿價(jià)裂飾解陸法桑抽某提占質(zhì)倉粒葡的板原前理撓、長步吹驟盜及貝各婆試汽劑陰的騾作傾用;掌彼握核亡酸淋內(nèi)鴿切衰酶總切講割質(zhì)絨粒霜的鄭原慨理股并學(xué)危會蛾運(yùn)鵲用床內(nèi)薪切燙酶一.質(zhì)躺粒D史N潔A的名提茄取1關(guān)鴨于改質(zhì)息粒銀的挪概艙念a煙.什釣么憐是哄質(zhì)待粒瞇(p噸l扁a掠s報(bào)m警i桑d)考?b蹲.質(zhì)翁粒謀的塔本宇質(zhì)自是俊什奇么愚?c舍.質(zhì)砌粒標(biāo)有雜哪絮些窗構(gòu)敲型俯?c賴.質(zhì)炭粒鍬有好哪遍些盈特旅點(diǎn)光?d籍.質(zhì)辛粒滋的溜用屈途暑有濁哪造些頑?81歌.渡1質(zhì)摟??鹊牡蕉〝_義質(zhì)束粒送是動細(xì)弊菌利細(xì)沸胞盤內(nèi)后一癥種之自化我及復(fù)憤制鑰的環(huán)印狀秒雙帆鏈D謙N泄A分菜子,顫能鋤穩(wěn)欄定煉地裳獨(dú)助立梳存淋在瓣于帳染亦色蜓體谷外級,怒并際傳翻遞題到損子為代過,母一昏般存不奸整有合渡到射宿偷主還染悶色珠體留上屋。在懂細(xì)奮胞籠內(nèi)筐它邊們康常付以垮共且價(jià)骨閉益環(huán)鏡的侄超城螺志旋啦形她式育存你在過。9(砍1挑)超奪螺用旋D唯N秧A顫(僻s略u勸p福e押r嬌c脹o忠i跌l喇e信d站D犯N像A矮,追S仙C澆D稻N躲A紫)1顆.極2質(zhì)晶粒么的鋼三梅種咬構(gòu)良型1浙0(扛2夜)開低環(huán)D安N斜A裙(鳴o憤p本e扮n皺c督i餡r麥c鑼u面l似a乖r正D拋N撿A壺,仗O鄉(xiāng)豐C予D蘿N躁A降)如食果賭兩揭條朵鏈刊中則有縱一剃條計(jì)的虛一構(gòu)處亦或椅多鬼處煉斷碧裂徑,樣分短子亂就礦能雕發(fā)拋生娃旋飾轉(zhuǎn)影而淘消偵除早鏈貧的枝張籍力仇,信形栽成噸松泡弛削型怖的館環(huán)經(jīng)狀姨分尾子壟。1脆1(遇3族)線忘狀D耗N職A迫(腹l徐i驢n均e碑a(chǎn)慚r攔D倦N勾A數(shù),惹L率D漢N及A諸)兇:如挑果穿兩圣條懶鏈廉均俗斷辣開伍,瘦即尸為島線戚狀D楊N芳A。電心泳死時(shí)剩,潑三蟲者鏟泳盒動燃速雙度汗大赴小擔(dān)關(guān)擁系睛(建?咬?拖?漫)1雹2最森快中最伸慢1荒.俯3質(zhì)射粒D妄N阿A的寇基汽本竟特械征歸:(闊1能)自失主積復(fù)騙制封性:院能對獨(dú)斗立屯于排染良色答體D滲N釋A外咽自贈主籮復(fù)同制夜;(轎2難)可氣擴(kuò)挽增念性:戀嚴(yán)他緊牙型餐復(fù)宣制-復(fù)誰制1僵-睜5個(gè)益拷冊貝松既弛董型筑復(fù)敬制-復(fù)幫制黨數(shù)刃十陪個(gè)晌拷沈貝物;(州3潑)可欲轉(zhuǎn)漏移梅性:首通怕過滿細(xì)頓菌廣結(jié)擱合岡作側(cè)用俱從怒一肅個(gè)愁宿慨主鼻細(xì)窗胞纖轉(zhuǎn)努移解到菜另隆一團(tuán)個(gè)鋼宿票主冤細(xì)動胞掠;(杜4蝦)不菜相插容戲性:限具男有借相返似話復(fù)尸制序子吹結(jié)踐構(gòu)丑特冶征丑的物兩推種慘不丈同亂質(zhì)研粒喇不泰能靈穩(wěn)兔定根地藏存浪在弟于蛋同步一薯受痕體壓細(xì)碑胞寶內(nèi)倆。1山41斗.半4理稼想攻的估克瘡隆咸載慈體近:(皮1彩)分燈子囑質(zhì)督量賤小恥、雹多拜拷仗貝搞、廟松把弛永控氣制揪型;(思2喇)具瞞有看多制種脈常豪用丟的懸限斯制慢酶啟的不單押切營點(diǎn);(已3寧)能汪插椒入卵較隱大伍的魯外肢源D黨N喪A片洗段;(紛4普)具萍有匙容擁易滿操邁作催的耍檢推測難表拉型。1戀51炎51陽.麗4提派取缸質(zhì)答粒D浮N工A的佳目記的具與唯意挖義威:基悼因?qū)O載筐體/基雖因當(dāng)克雄隆/基澇因涼工檢程2鍵.瞇1提刺取廢質(zhì)陳粒D考N團(tuán)A的點(diǎn)??p規(guī)醋方渣法(鹿1脊)禿S喪D沖S堿衰裂勝解缺法(利2男)煮窄沸碌法(英3耕)指h弟i塑g麗h熄p柿u形r剩e零p擔(dān)l耍a弦s腔m箱i罵d爭i英s膏o茂l指a沾t采i袖o芝n爐k潔i舌t等增。但支原獅理猾相叉似咐,彼都憤是螺利亞用化宿僚主染漲色跡體D活N鉆A和暖質(zhì)尋粒D臺N剛A的芬差仔異來貫分逆離調(diào)的鉗:★狼宿性主類菌納染穗色歷體D厘N凡A通貧常度比疑質(zhì)搶粒D些N癢A要搞大末得都多★聯(lián)純旁化塔分劃離亭的匹宿瞞主凈菌D繳N冬A多崖為向線銅性堆分仗子啄,顏而布質(zhì)汗粒D歪N她A呈膀閉忠合押環(huán)伏的太形豆式狹。2提仿取幕大幅腸紡桿埋菌扁質(zhì)莫粒D司N擴(kuò)A的刊方旬法厚和摟原悼則2漸.串2分恐離貨純名化棟質(zhì)跪粒D晝N攤A的鑄主來要貴步勢驟(板1腿)培蠻養(yǎng)船細(xì)騰菌熊使誘質(zhì)葵粒梳擴(kuò)常增渠(D詞N勉A的橋擴(kuò)陶增沸與寇選細(xì)擇喘)(伙2制)細(xì)玻菌木的游收冒集代與詠裂涉解收菌集喝方榮法鄉(xiāng)豐:翻高托速濃離償心母的暢方濕法裂煤解觀細(xì)忙菌吊方劇法準(zhǔn):棗去悔污菠劑粉法何、邊有段機(jī)游溶定劑暗法太、堿偽變?nèi)坌曰旆?、沸鞠水熱么裂蜘法喘、歡溶底菌谷酶濫法吧、逼超晚聲厭處苗理驗(yàn)法老等艇。根殺據(jù)旁質(zhì)嗚粒亭的短大寄小歌、排宿俱主休菌寒菌穴株塵及血裂幟解彼后船的純嬌化叔方便法臘等卷因從素糞綜然合廚后漸加浩以母選墾擇托。(顯3偽)質(zhì)薯粒D振N石A的狼純賄化常才用邊的畝方擾法岔有濃:浩超故速忌離訊心勸、犁層堤析樣法妖、芬聚何乙鬧二鑼醇箱沉育淀扛法光等所疾有隨純宗化降方鋸法薯都獻(xiàn)是本利妻用逐了眉質(zhì)值粒D西N待A相湯對相較小宇及尾共暖價(jià)提閉蜘合版環(huán)雕狀平的爪性倡質(zhì)辰。2既.丈3核暖酸岸分耽離響純屈化將的矛總廊原神則爪:(完1綿)保敞證擋核氣酸墓一論級賓結(jié)盯構(gòu)證完述整(瓣2兵)排躁除謙其趟他炕分昆子悄的叢污憤染尸(躍蛋跟白祥質(zhì)蜘、茶脂被類蛇、糖鐵、有籠機(jī)傾溶童劑五、逢金釋屬店離爺子付、義其夫他D周N戀A、R每N蘇A等以)3自.樸S堡D蜻S口-堿拉裂誘解逮法喜提鞏取P困u荒c睬1栗1饒9扭-部U鴿6重危組個(gè)質(zhì)圍粒D復(fù)N滿A3循.貨1實(shí)據(jù)驗(yàn)用原杏理菊:高白堿細(xì)憤菌糊的洽細(xì)駁胞翅壁風(fēng)破噴裂囑,頌內(nèi)猛容防物題釋神放①草染煌色雅體D土N陳A斷五裂妙成閑不誕同擋長嫩度固的習(xí)線即性會雙貿(mào)鏈D材N擱A;②譽(yù)線鑄性坐雙趨鏈D狼N撥A片緣瑞段唱中銅的堪氫砌鍵嬸斷蚊裂挎,命雙叼鏈永解減離巖變腿性偶。①勇質(zhì)認(rèn)粒D科N顛A不樂發(fā)裹生倆斷哭裂哀,異保歪持發(fā)雙擱鏈提閉波合成環(huán)姥狀涌;②鋼雙辯鏈D釋N我A并督不膀完獅全盒分悅離旁。高酸中和至中性變性的染色體DNA與變性的蛋白質(zhì)以及細(xì)胞碎片凝聚成網(wǎng)絡(luò)狀大分子不溶性沉淀物質(zhì)粒DNA又恢復(fù)天然構(gòu)型,溶解在上清液中純?;疪烤N租A酶敞消衫化壇除罩去R這N援A,濾并怨用墊酚歸抽倉提鉆法律除風(fēng)去欠殘紐奉留栽的羊蛋懼白巧質(zhì)3匪.亮2主球要捆試授劑稱及炸作略用溶銀液態(tài)Ⅰ忙:售由件葡扇萄丈糖蝦、E黑D怒T到A鋒、者T圖r搞i耗s?歐HC侄l組雁成憤.(保緞護(hù)薦、反緩戶沖)①葡排萄錢糖的理作習(xí)用閥是微增烏加黎溶尺液稠的薦粘府度匆,陣減覽少成抽核提得過銹程顆中漂的者機(jī)教械剪削切聰作皇用患,晝防木止豈破訊壞剩質(zhì)兄???(保射護(hù)嗎作膨用)②E揮D比T奔A的蘭作結(jié)用緞是居絡(luò)籃合檔掉軌鎂盾等充二躺價(jià)薄金急屬遵離狡子母,秀防魯止D拌N縱A酶騙對東質(zhì)笛粒貨分芝子營的滅降石解貍作裝用篇。薦(坊保守護(hù)潤作梢用妥)③T熄r享i它s鞏?睛H臨C緊l能捕使障溶與菌鳥液墊維儀持錘溶舞菌熊作體用災(zāi)的階最湖適P那H范寬圍止(糠緩?fù)粵_涂作掌用酒)2繁1溶倚液I搬I稍:由S鎖D添S縮慧(十守二罩烷盛基云硫慘酸敘鈉蛛)主與N糧a挖O鵝H組軌成(裂將解葬、頂變艇性)①S筑D籍S的枝作訓(xùn)用訴是渠解逼聚像核詞蛋糕白天并帶與泳蛋妹白癢質(zhì)鋪分飼子壟結(jié)般合揉使渣之變殲性公(炊裂電解尋細(xì)農(nóng)胞抵和說蛋桐白四質(zhì)熄變財(cái)性窮作標(biāo)用勵)②N努a前O睛H(P同H評>啞1態(tài)2)把的串作搏用貫是店破風(fēng)壞居氫鞏鍵雖,夠使D勞N痕A分達(dá)子銀變得性河(D次N提A變翻性源作吃用全)2著2溶買液I舒I伯I堤:樸H綁A戒C南(乙舌酸)和K壟A噴C阿(乙交酸禽鉀)組挑成戶的娛高悲鹽設(shè)溶括液(復(fù)騙性辦,家分守離)①H葉A勢C溶吩液能牢中溪和暢溶煙液魄Ⅱ莫的橋堿表性然,革使各染龍色胸體D驢N蒙A變旋性賽而宮發(fā)宿生葛纏照繞稼,權(quán)并越使木質(zhì)跟粒D膽N尺A復(fù)厲性主。②K沈A冰C會艷與S鈴D撤S形齡成婆溶表解玻度蜂很嘴低姐的煩鹽鄙,版并駛與例蛋犯白浴質(zhì)確形尤成沉王淀訪而唇除撤去格;膝溶兆液僚中損的D菠N和A也俱會絹與會蛋鏡白饑質(zhì)-帽S狠D足S復(fù)荷合客物劑纏遼繞凱成筐大麥分壩子謊而授與析小蠻分帝子浪質(zhì)眨粒D天N勵A(yù)分覽離推。3腦.班3實(shí)癢驗(yàn)抽步貴驟加1龜.擴(kuò)4享m盛l培如養(yǎng)畫物噴于E哪P管匙,1欣2肝0妨0諷0慶r遺p望m袋×類1約m柴i鎮(zhèn)n,役去筒上友清孔,再怖加1伸.含4凳m括l培僵養(yǎng)你物昏至捕原溜管丟,1顏2勉0旅0勵0順r嚼p雹m核×醋1趙m券i酒n,牲去扶上害清加令入莫冰活的2黃0淚0獨(dú)μ難l溶情液I,劇怠烈悄振極蕩E弦P管媽,蕩室是溫?fù)?dān)放圣置3床m娘i央n加基入2盯0語0搭μ類l溶賠液I珍I,落快棟速胃顛貴倒讀數(shù)察次絕,珍冰惱浴3盼m妥i打n(芒不烤要蹄振田蕩隊(duì)!相)加晌入1痛5壁0戀μ弟l冰溶業(yè)液I額I鑒I,鞠溫弓和廟振坑蕩1逮0派s,啊冰零浴5脆m渠i蟲n,1矛2蜻0艱0鵲0是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