顯微鏡基礎(chǔ)資料課件

顯微鏡基礎(chǔ)知識(shí)的擴(kuò)展1、顯微鏡的主要指標(biāo)顯微鏡的主要指標(biāo)包括分辨能力，總放大倍率、景深、視場(chǎng)寬度、鏡像亮度、工作距離等。2、顯微鏡的的組成，及主要部件顯微鏡由光學(xué)和機(jī)械系統(tǒng)組成光學(xué)系統(tǒng)主要光源、孔徑光闌、視場(chǎng)光闌、聚光鏡、物鏡、目鏡等機(jī)械系統(tǒng)包括調(diào)焦機(jī)構(gòu)，載物臺(tái)顯微鏡包含兩組不同光學(xué)系統(tǒng)1=燈絲2=孔徑光闌3=物鏡光瞳4=觀察者的瞳孔A=視場(chǎng)光闌B=(物平面)樣品平面C=目鏡中的中間像平面D=觀察者眼睛的視網(wǎng)膜顯微鏡包含兩組不同光學(xué)系統(tǒng)1=燈絲2=孔徑光闌3=物鏡光瞳4=觀察者的瞳孔A=視場(chǎng)光闌B=(物平面)樣品平面C=目鏡中的中間像平面D=觀察者眼睛的視網(wǎng)膜顯微鏡的分辨率分辨率：又稱鑒別率、解象力、和分辨本領(lǐng)。能夠分辨兩個(gè)點(diǎn)之間的最小距離。它與δ相反，δ與入射光的波長(zhǎng)成正比，與數(shù)值孔徑N.A.成反比。關(guān)于分辨率分辨率的重要性實(shí)際觀測(cè)時(shí)分辨率的調(diào)整①調(diào)整聚光鏡的孔徑光闌，使其數(shù)值孔徑與物鏡的數(shù)值孔徑一致②減小照明光線的波長(zhǎng)③調(diào)整孔徑光闌大小，使其數(shù)值孔徑與物鏡對(duì)應(yīng)蔡司物鏡的分辨率---------0.2um(明場(chǎng))光學(xué)顯微鏡的景深h=nX(0.15~0.30)mm(N.A.)

·Mn:目的物所在介質(zhì)的折射率(N.A.):物鏡的數(shù)值孔徑M:顯微鏡的放大倍數(shù)景深：即焦點(diǎn)的深度，能夠同時(shí)看清楚物體上下兩個(gè)平面的深度。

關(guān)于景深景深的意義是否物鏡決定了觀察的景深可使用調(diào)整孔徑光闌大小和改變照明方式適當(dāng)?shù)恼{(diào)整景深。關(guān)于自動(dòng)孔徑光闌關(guān)于體式鏡的景深（D）總放大倍率總放大倍數(shù)：物體經(jīng)過(guò)物鏡、中間變倍器和目鏡放大后，人眼所看到的最終圖像的大小與原物體大小的比值。Moc=250/F2

Mob=Δ/F1總放大倍率放大的實(shí)際意義總倍率=物鏡倍率(Mob)*目鏡倍率(Moc)*中間鏡倍率實(shí)際放大倍率有效總倍率在500N.A和1000N.A之間鏡像亮度鏡像亮度：顯微鏡下圖像的亮度。鏡像亮度的意義鏡像亮度和數(shù)值孔徑及總放大倍數(shù)關(guān)系它與物鏡數(shù)值孔徑值的平方成正比，與放大倍數(shù)的平方成反比。工作距離工作距離：也叫物距，是指物鏡前透鏡的表面到被檢物體之間的距離。工作距離的意義如何選擇合適的工作距離一般被檢物體的工作距離在物鏡1倍—2倍焦距之間。顯微鏡各指標(biāo)之間關(guān)系清晰度的概念：指圖像的銳利程度。清晰度的影響因素。它是鏡像亮度、分辨率、景深、對(duì)比度的綜合作用。顯微鏡的光源鹵素?zé)簟⒐療?、氙燈、LED、激光等的特點(diǎn)及在顯微鏡中的應(yīng)用。鹵素?zé)簦簾峒ぐl(fā)發(fā)光，連續(xù)譜，波段為可見(jiàn)光+紫外+紅外，波峰高比LED燈亮、經(jīng)濟(jì)，綜合效果好，但壽命短2000h。汞燈：原子激發(fā)發(fā)光，線光譜，波長(zhǎng)短，波段350nm、420nm、455nm，熱量和溫度高，選取濾色片是關(guān)鍵，壽命為200h。氙燈：白光單色性，比鹵素?zé)舻纳珳?、?qiáng)度和亮度高，通過(guò)光導(dǎo)管傳輸，壽命2000h，比汞燈貴。蔡司照明系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)燈泡功率大，透鏡的透過(guò)率高，光線均勻，利用率高。顯微鏡的光源LED：白光，壽命10000h，不能于研究級(jí)顯微鏡。激光：?jiǎn)紊?，亮度高，?huì)聚性好，偏振性好，但是價(jià)格昂貴。關(guān)于蔡司的35瓦燈泡由于光線利用率高，35低功率的燈泡足以在金相顯微鏡上使用。顯微鏡的孔徑光闌

孔徑光闌的作用控制顯微鏡中的進(jìn)光亮，調(diào)整分辨率和景深?？讖焦怅@的調(diào)節(jié)，及主要事項(xiàng)應(yīng)該與物鏡的數(shù)值孔徑相對(duì)應(yīng)。孔徑光闌的特別應(yīng)用適當(dāng)改變照明的方式顯微鏡的孔徑光闌什么是科勒照明有兩套成像光路，

①燈絲，孔徑光闌，物鏡光瞳，觀察者的瞳孔②視場(chǎng)光闌，(物平面)樣品平面，目鏡中的中間像平面，觀察者眼睛的視網(wǎng)膜顯微鏡的視場(chǎng)光闌視場(chǎng)光闌的作用調(diào)節(jié)視域的范圍和矯正光路視場(chǎng)光闌的調(diào)節(jié)視場(chǎng)光闌在反射率測(cè)量中的注意事項(xiàng)顯微鏡的物鏡物鏡的主要分類①消色差②復(fù)消色差③半復(fù)消色差關(guān)于螢石物鏡的問(wèn)題關(guān)于鍍膜問(wèn)題，鍍膜層數(shù)及位置，其他廠家關(guān)于鍍膜的謊言關(guān)于透過(guò)率問(wèn)題，透過(guò)率與實(shí)際成像質(zhì)量的關(guān)系HD、POL、PH、DIC物鏡的區(qū)別HD為明暗場(chǎng)物鏡，POL消應(yīng)力偏光物鏡，PH相襯物鏡，DIC顯微鏡的物鏡蔡司物鏡的分類，透反物鏡的區(qū)別透反物鏡透射反射都可以觀察，反射物鏡透反也可以觀察，透射只能觀察透射蔡司物鏡的一些優(yōu)勢(shì)Neofluor物鏡引進(jìn)短波長(zhǎng)，分辨率提高，可觀察紫外波段，比螢石物鏡平場(chǎng)度高顯微鏡的目鏡為什么目鏡不能提高分辨率只放大物鏡在目鏡中間焦面上所成的像，不與物體直接成像。蔡司的目鏡標(biāo)識(shí)的意義為什么標(biāo)準(zhǔn)物鏡都是10倍視場(chǎng)大小合適，和放大倍數(shù)都匹配的較好關(guān)于目鏡視場(chǎng)數(shù)顯微鏡的聚光鏡聚光鏡的分類聚光鏡的作用聚光，調(diào)整光路和調(diào)節(jié)數(shù)值孔徑，可影響到成像的分辨率、景深、亮度、對(duì)比度聚光鏡的調(diào)節(jié)光路對(duì)中和孔徑光闌的調(diào)節(jié)關(guān)于長(zhǎng)焦距聚光鏡關(guān)于蔡司的光學(xué)系統(tǒng)各部件完美配合的ICCS光學(xué)系統(tǒng)：1、管鏡和物鏡配合校正色差2、各光學(xué)部件完美設(shè)計(jì)和配合，有效利用光源的能量，在很弱的光強(qiáng)下得到銳利的圖像3、蔡司光學(xué)部件的加工精度4、蔡司原材料的選擇及預(yù)處理5、蔡司對(duì)于供應(yīng)商供應(yīng)產(chǎn)品的嚴(yán)格檢驗(yàn)1.目鏡（10X,16X,25X)2.雙目鏡筒(安裝目鏡及輸出）3.檢偏器滑塊的插槽（僅能用于左側(cè)沒(méi)有安裝照相接口的顯微鏡，安裝檢偏滑尺）4.分光鏡（觀察及照相光路轉(zhuǎn)換）5.HBO/XBO調(diào)節(jié)器（調(diào)節(jié)熒光燈絲相時(shí)使用）6.燈箱（提供光源，帶有反光碗，增加光線利用率）7.視場(chǎng)光欄滑尺（調(diào)節(jié)光路對(duì)中，改變視域大?。?.雙濾光輪（安裝濾色片，改變光線色溫或亮度）9.孔徑光闌滑尺（調(diào)節(jié)光路對(duì)中，調(diào)小時(shí)增大景深，圖像亮度變暗，分辨率降低，襯度增大）10.HAL100燈箱11.RL按鈕－帶有指示器LED的反射光開(kāi)關(guān)ON/OFF12.3200K按鈕－帶有指示器LED的色溫3200KON/OFF13.TL按鈕－帶有指示器LED的透射光開(kāi)關(guān)ON/OFF14.光強(qiáng)控制（調(diào)節(jié)顯微鏡光線亮度）15.雙濾光輪16.毛玻璃（均勻光線）17.透射光視場(chǎng)光闌18.聚焦螺旋－細(xì)焦螺旋，右側(cè)19.聚焦螺旋－粗焦螺旋，右側(cè)20.機(jī)械式載物臺(tái)X軸方向移動(dòng)的控制桿21.機(jī)械式載物臺(tái)Y軸方向移動(dòng)的控制桿22.機(jī)械式載物臺(tái)23.聚光鏡支架（同樣參見(jiàn)圖4-2）24.聚光鏡（匯聚光線）25.帶有物鏡的物鏡轉(zhuǎn)換器26.反射光功能轉(zhuǎn)換器（安裝功能模塊，實(shí)現(xiàn)明場(chǎng)，暗場(chǎng)偏光等功能）27.ON/OFF顯微鏡開(kāi)關(guān)28.按鈕（可設(shè)為光強(qiáng)調(diào)節(jié)，光源開(kāi)關(guān)）29.按鈕30.聚焦螺旋－細(xì)焦螺旋，左側(cè)31.聚焦螺旋－粗焦螺旋，左側(cè)32.按鈕（未使用）33.透射光開(kāi)關(guān)ON/OFF按鈕34.反射光開(kāi)關(guān)ON/OFF按鈕35.透射光/反射光光路切換開(kāi)關(guān)1反射光光源2反射光孔徑光闌3反射光視場(chǎng)光闌4光強(qiáng)調(diào)節(jié)旋鈕5顯微鏡電源開(kāi)關(guān)

6反射/透射光路切換開(kāi)關(guān)7微調(diào)8粗調(diào)9試樣夾10聚光鏡系統(tǒng)11檢偏滑尺12功能模塊轉(zhuǎn)盤13目鏡14聚光鏡前透鏡15前透鏡推入裝置16透射光孔徑光闌偏光顯微鏡各功能使用1反射光路普通觀察將功能模塊轉(zhuǎn)盤（圖12）轉(zhuǎn)到明場(chǎng)位置，并將檢偏滑尺（圖11）置于拔出狀態(tài)。高倍下可以將反射光孔徑光闌（圖2）適當(dāng)調(diào)?。ㄏ蛲獍危?。正交觀察將功能模塊轉(zhuǎn)盤（圖12）轉(zhuǎn)到偏光位置檢偏滑尺（圖11）置于推入狀態(tài)，并將其刻度調(diào)結(jié)到90度。如想觀察其他角度的干涉，將檢偏滑尺(圖11)調(diào)節(jié)到適當(dāng)位置即可。2透射光路1）單偏光將檢偏滑尺（圖11）置于拔出狀態(tài)，并將功能轉(zhuǎn)盤（圖12）轉(zhuǎn)到空位置即可。200倍以上觀察時(shí)，需將聚光鏡前透鏡（圖14）通過(guò)圖15裝置推入到光路。并將透射光孔徑光闌（圖16）適當(dāng)調(diào)小，從而使成像質(zhì)量達(dá)到最佳效果。正交偏光將檢偏滑尺（圖11）置于推入狀態(tài)，并將功能轉(zhuǎn)盤（圖12）轉(zhuǎn)到空位置即可。錐光找到合適的視場(chǎng)以后，將物鏡轉(zhuǎn)換到高倍（不低于40X），然后將功能轉(zhuǎn)盤（圖12）轉(zhuǎn)到錐光位置，并將聚光鏡前透鏡（圖14）轉(zhuǎn)換到光路中即可。3熒光如果顯微鏡配有熒光部分，觀察時(shí)先將熒光電源打開(kāi)，然后將光路轉(zhuǎn)換到熒光光路，并將功能轉(zhuǎn)盤（圖12）轉(zhuǎn)到熒光激發(fā)模塊（激發(fā)的波長(zhǎng)不同）位置即可。顯微鏡基礎(chǔ)知識(shí)科勒照明的調(diào)節(jié)使用10X物鏡,明場(chǎng)照明狀態(tài)（聚光鏡轉(zhuǎn)輪選擇H或BF，功能模塊選擇空位，DIC附件全部拉出光路，照相光路轉(zhuǎn)換到觀察狀態(tài),通過(guò)粗調(diào)和微調(diào)將樣品調(diào)節(jié)到樣本能觀察到的最清楚的狀態(tài)。然后不要再動(dòng)調(diào)焦螺旋。2，將視場(chǎng)光欄調(diào)到最小的狀態(tài)，如果顯微鏡的調(diào)節(jié)狀態(tài)正確的話，此時(shí)在視野中應(yīng)該可以看到一個(gè)邊緣清楚的多邊形(如下圖)。

顯微鏡基礎(chǔ)知識(shí)如果看到的不是一個(gè)邊緣清楚的多邊形，則說(shuō)明光路中的聚光鏡上下位置不準(zhǔn)確，此時(shí)通過(guò)調(diào)節(jié)聚光鏡左手側(cè)的上下調(diào)節(jié)旋鈕使得視場(chǎng)中形成一個(gè)邊緣清晰的多邊形，