醫(yī)學(xué)微生物學(xué)-病原性球菌

第二部分微生物學(xué)各論一、球菌鏈球菌屬

鏈球菌屬

(Streptococcus)一、生物學(xué)特性（一）形態(tài)與染色G+，球形或橢圓形，呈鏈狀排列，無鞭毛、無芽胞，有莢膜。一、生物學(xué)特性（二）培養(yǎng)特性條件：營養(yǎng)要求較高，多數(shù)為兼性厭氧菌，少數(shù)專性厭氧,5%CO2。液體：沉淀生長（絮狀或顆粒狀）。血液瓊脂平板：鏈球菌在血平板上菌落特征甲鏈乙鏈丙鏈（三）生化反應(yīng)活潑分解多種糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸。菊糖（-）膽汁溶菌試驗(yàn)（-）

optochin敏感試驗(yàn)（-）觸酶（-）（區(qū)別于葡萄球菌屬）（區(qū)別甲鏈與肺鏈）（四）抗原構(gòu)造１、多糖抗原（C抗原）：群特異性。２、蛋白抗原（M、T、R、S）型特異性，M蛋白抗原是與致病有關(guān)的主要物質(zhì)，引起超敏反應(yīng)。多糖抗原蛋白質(zhì)抗原核蛋白抗原鏈球菌抗原構(gòu)造模式圖（五）分類

１、按溶血情況分類：（1）甲型溶血性鏈球菌：條件致病菌。（2）乙型溶血性鏈球菌：致病力強(qiáng)，引起多種疾病。（3）丙型鏈球菌：無溶血環(huán)，不致病。２、按抗原結(jié)構(gòu)分類：按多糖抗原分群：ABCD…20群，對人致病的以A群為主。3、按對氧的需求分型：需氧菌、厭氧菌、兼性厭氧菌。（六）抵抗力不強(qiáng)，60℃30min殺死，對多種消毒劑敏感。乙鏈：對青霉素、四環(huán)素、紅霉素等敏感。肺炎鏈球菌：PRSP和多重耐藥。其他群的細(xì)菌：對青霉素耐藥頻度增加。（七）變異性肺炎鏈球菌莢膜變異：有莢膜的光滑（S）型菌有毒力，失去莢膜的粗糙（R）型毒力減低或消失。二、致病性和免疫性（一）致病物質(zhì)

1、鏈球菌溶血素（1）鏈球菌溶血素O(SLO):SLO抗體

抗鏈球菌溶血素O試驗(yàn)：協(xié)助診斷風(fēng)濕熱（>1:400)

（2）鏈球菌溶血素S(SLS)：無抗原性。2、致熱外毒素（猩紅熱毒素/紅疹毒素）3、M蛋白4、透明質(zhì)酸酶5、鏈激酶6、鏈道酶（二）所致疾病主要由A群鏈球菌引起。1、化膿性感染：由皮膚傷口侵入，經(jīng)呼吸道侵入，其他途徑（如產(chǎn)褥熱、蜂窩組織炎）特點(diǎn)：病灶界限不清,膿汁稀薄2．中毒性疾?。盒杉t熱。由產(chǎn)生致熱外毒素的A族鏈球菌所致的急性呼吸道傳染病。3．變態(tài)反應(yīng)性疾?。猴L(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎

4．其他疾?。杭仔停ú菥G色）鏈球菌：引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎。B群、D群：正常菌群，引起呼吸道、泌尿道感染或菌血癥、敗血癥等感染。C群：咽喉炎的病原菌肺炎鏈球菌分85型，對人致病的有20多型。Ⅰ-Ⅲ型引起大葉性肺炎。還可引起胸膜炎、膿胸，、慢性支氣管炎、中耳炎、腦膜炎、敗血癥等。三、鏈球菌的檢驗(yàn)程序痰、膿、穿刺液咽拭子等腦脊液血液直接涂片染色測抗原分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)(5%CO2葡萄糖肉湯)血平板（5%CO2）可疑菌落鑒定實(shí)驗(yàn)初步報告血清學(xué)鑒定（分群）桿菌肽實(shí)驗(yàn)

optochin

膽汁溶菌實(shí)驗(yàn)其他鑒定實(shí)驗(yàn)肺炎鏈球菌檢驗(yàn)程序痰、膿腦脊液血液直接涂片分離培養(yǎng)革蘭染色、美蘭染色莢膜腫脹試驗(yàn)增菌培養(yǎng)（葡萄糖肉湯、硫酸鎂肉湯）（血平板）挑選可疑菌落純培養(yǎng)初報兔血清肉湯小白鼠毒力試驗(yàn)涂片莢膜腫脹試驗(yàn)?zāi)懼芫囼?yàn)菊糖發(fā)酵Optochin試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)?zāi)懼芫囼?yàn)陽性：加入膽汁或10%去氧膽酸鈉，37℃，5-10min，激活本菌的自溶酶，出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象。Optochin敏感試驗(yàn)陽性：取肉湯培養(yǎng)液均勻涂于血平板上用optochin紙片貼于接種區(qū)中央（或分區(qū)劃線法，紙片貼于1-2區(qū)），35℃需氧培養(yǎng)過夜，抑菌圈>18mm。血清學(xué)鑒定：抗O試驗(yàn)：風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性腎小球腎炎，效價>400為+

腸球菌屬是腸道中的正常菌群導(dǎo)致醫(yī)院內(nèi)感染：如尿路感染、腹部和盆腔感染、敗血癥、腦膜炎。一、生物學(xué)特性（一）形態(tài)染色G+球菌，單個、成雙或短鏈狀排列。無莢膜、芽胞，部分菌株有鞭毛。營養(yǎng):要求較高。能在高鹽（6.5%NaCl）、高堿（PH9.6）、高膽汁（40%）、10-45℃均可生長。菌落：圓形、中等大小、灰白色、不透明、S型，有γ或α溶血。（二）培養(yǎng)特性能分解多種糖類觸酶（-）PYR（吡咯烷酮-β-萘基酰胺）試驗(yàn)（+）（三）生化反應(yīng)目前分21種。引起醫(yī)院內(nèi)感染常見的是糞腸球菌和屎腸球菌。常用的分型方法：rRNA基因探針分型法。（四）分型（五）抵抗力對理化因素抵抗力弱。但對大多數(shù)抗生素天然耐藥。頭孢菌素、克林霉素、復(fù)方增效磺胺、低濃度氨基糖甙類和萬古霉素天然耐藥。易形成獲得性耐藥。第二部分微生物學(xué)各論一、球菌奈瑟菌屬

(Neisseria)特點(diǎn)：為一群G-雙球菌，無鞭毛，無芽胞，有菌毛，氧化酶及觸酶+。主要致病菌是

腦膜炎奈瑟菌(merningococcus)

淋病奈瑟菌(gonorrhoeae)一、腦膜炎奈瑟菌

(N.meningitidis)即腦膜炎球菌，是流行性腦脊髓膜炎的病原體。

1.形態(tài)結(jié)構(gòu)G-，腎形成雙排列在患者腦脊液標(biāo)本中位于中性粒細(xì)胞內(nèi)無芽胞、無鞭毛，具有莢膜、菌毛。（一）生物學(xué)性狀2．培養(yǎng)特性營養(yǎng)要求高，必須在含有血清或多種氨基酸、無機(jī)鹽的培養(yǎng)基上生長良好。初次培養(yǎng)5-10%CO2。血平板：半透明，灰褐色，圓形，濕潤光滑露滴樣菌落。易自溶。巧克力平板：圓形，扁平，藍(lán)灰色，半透明，光滑濕潤的菌落。卵黃雙抗（EPV）平板：較大，無色，光滑濕潤，扁平，邊緣整齊的菌落。血清肉湯：呈微混濁。3.生化反應(yīng)分解葡萄糖、麥芽糖：+硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性，不分解尿素氧化酶試驗(yàn)陽性4.抗原結(jié)構(gòu)可分多個血清群，對人致病的主要是A群5．抵抗力特點(diǎn)對寒冷、光、熱力，干燥等十分敏感。室溫3h，55℃5min死亡。采集標(biāo)本：注意保溫迅速送檢。對青霉素等敏感。

（二）致病性與免疫性

1．致病物質(zhì)：菌毛、莢膜、內(nèi)毒素

2．所致疾病：傳染源、傳播途徑寄生在正常人鼻咽部，呼吸道傳播，冬末春初流行高峰，5歲以下易感。帶菌率達(dá)20%-90%，大部分僅表現(xiàn)上呼吸道感染癥狀。3.免疫性病原可產(chǎn)生群特異性抗體，但不持久。(三)微生物學(xué)檢驗(yàn)

1．標(biāo)本采集

菌血癥期病人采集血液有出血點(diǎn)或瘀斑者，可取瘀斑滲出液有腦膜刺激癥狀，抽取腦脊液帶菌者：咽拭子注意事項(xiàng)：立即送檢注意保溫（勿放冰箱）防干燥防紫外線２、腦膜炎球菌的檢驗(yàn)程序血液增菌培養(yǎng)（葡糖肉湯）分離培養(yǎng)（巧克力、血平板）鑒定試驗(yàn)涂染檢氧化酶葡、麥糖多價血清藥敏試驗(yàn)鼻咽拭子卵黃雙抗平板5~10%co237℃18~24h37℃18~24h37℃18~24h腦脊液瘀血點(diǎn)離心上沉清淀液物5~10%ＣＯ2涂片染色初步報告直接凝集腦膜炎球菌的鑒定依據(jù)菌落特征符合形態(tài)染色符合分解葡、麥糖產(chǎn)酸氧化酶、觸酶陽性血清凝集試驗(yàn)陽性二、淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）即淋球菌為淋病的病原體，人是唯一天然宿主和傳染源。（一）生物學(xué)性狀1．形態(tài)結(jié)構(gòu)G-，球形或腎形，成對排列有莢膜，無芽胞和鞭毛2．培養(yǎng)特性營養(yǎng)要求高，30-37℃生長，須在含有血液或血清的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，常用巧克力培養(yǎng)基初次分離，須5-10%CO2才能生長發(fā)育菌落：凸起，光滑、圓形，灰褐色，半透明3.生化反應(yīng)氧化酶試驗(yàn)：（+）觸酶：（+）葡萄糖（+），麥芽糖（-）易自溶4．抵抗力特點(diǎn)抵抗力弱，在干燥環(huán)境中僅能存活1-2h,濕熱55℃5min,100℃立即死亡。室溫下存活1-2d。對消毒劑極敏感。治療首選青霉素。但耐青霉素、四環(huán)素、氟喹諾酮類藥物近年來多見。１、致病物質(zhì)：菌毛、外膜蛋白、等２、所致疾病：侵犯人類泌尿生殖系統(tǒng)引起淋病(首位性病)

新生兒眼結(jié)膜炎播散性感染口咽部及肛門直腸?。ǘ┲虏⌒耘c免疫性1．標(biāo)本采集標(biāo)本：男性：尿道分泌物女性：陰道分泌物全身性淋?。貉?、泌尿、生殖道的各種分泌物、尿液

立即送檢２．檢驗(yàn)程序

(三)微生物學(xué)檢驗(yàn)?zāi)撝?、分泌物直接涂片染色分離培養(yǎng)血、巧克力、EPV平板5－10%co235℃18－24h鑒定試驗(yàn)涂染檢氧化酶糖發(fā)酵藥敏試驗(yàn)報告

初步報告35℃18－24h（１）直接涂片鏡檢急性淋?。菏戎行粤＜?xì)胞內(nèi)大量G-，腎形雙球菌——具有診斷意義慢性淋?。虹R檢較困難３．檢驗(yàn)方法（２）分離培養(yǎng)即采集即培養(yǎng)，常用含有兩種以上抗生素（萬古霉素、粘菌素、磺胺類等）的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)（如EPV、TM）,5-10%CO2。培養(yǎng)基先預(yù)溫。氧化酶試驗(yàn)：（+）觸酶：（+）葡萄糖（+），麥芽糖（-）

PCR：靈敏，特異，標(biāo)本不受限制(不需活菌)（３）鑒定

1.名詞解釋：血漿凝固酶、SPA、抗鏈“o”試驗(yàn)、Optochin試驗(yàn)。

2.根據(jù)色素和生化反應(yīng)將葡萄球菌分成哪幾種？

3.金黃色葡萄球菌的鑒定依據(jù)有哪些？

4.根據(jù)鏈球菌在血平板上的溶血現(xiàn)象，將其分成哪些類型？甲鏈和乙鏈有何區(qū)別？

5.簡述鏈球菌的致病性。

6.腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些異同點(diǎn)？

7.采集腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌檢驗(yàn)應(yīng)該注意哪些問題？為什么？

復(fù)習(xí)思考題鏈球菌菌落（血平板）：細(xì)小，灰白色，圓形，突起，光滑，濕潤，邊緣整齊，不同菌種菌落周圍有不同溶血環(huán)。甲型溶血性鏈球菌（草綠色鏈球菌）丙型鏈球菌乙型溶血性鏈球菌猩紅熱蜂窩組織炎Neisseriagonorrhoeae燙傷樣皮膚綜合征：多見于新生兒、幼兒和免疫功能低下的成人，開始有紅斑，1～2天有皮起皺，繼而形成水皰，至表皮脫落。由表皮剝脫毒素引起。ＣＡＭＰ試驗(yàn)（B群無乳鏈球菌+）

-+：溶血環(huán)呈箭頭狀金黃色葡萄球菌桿菌肽試驗(yàn)（A群鏈球菌+）第二部分細(xì)菌學(xué)各論一、球菌葡萄球菌屬(Staphylococcus)分布廣泛，多為非致病菌。模式種：金黃色葡萄球菌（S.aureus）。（一）形態(tài)與染色

G+，球形，無鞭毛、無芽孢，呈葡萄串狀排列。一、生物學(xué)特性（二）培養(yǎng)特性營養(yǎng)：要求不高，某些菌株耐鹽(10-15%)。普通瓊脂平板、血液瓊脂平板生長特點(diǎn)不同。液體：均勻渾濁生長。高鹽甘露醇平板為淡橙黃色菌落；羊血瓊脂平板為金黃色菌落。

金黃色葡萄球菌菌落特征（高鹽甘露醇平板）金黃色葡萄球菌菌落特征（血平板）中等大小，突起，有色素，S型菌落。葡萄球菌菌落形態(tài)（普通瓊脂平板）金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌金黃色葡萄球菌有透明溶血環(huán)。表皮葡萄球菌無溶血環(huán)。（三）生化反應(yīng)活潑，分解多種糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸。(如：葡萄糖，麥芽糖，蔗糖，甘露醇）分解甘露醇、產(chǎn)生血漿凝固酶、耐熱核酸酶陽性是致病菌的主要特征。

觸酶（＋）（區(qū)別于鏈球菌屬）血漿凝固酶試驗(yàn)［原理］致病性葡萄球菌能產(chǎn)生２種血漿凝固酶：一種為結(jié)合型凝固酶，細(xì)菌表面的纖維蛋白原受體與血漿中的纖維蛋白原結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)菌凝集。另一種為游離型凝固酶，可被人或兔血漿中的協(xié)同因子激活，成為凝血酶樣物質(zhì)，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，從而使血漿凝固。

［檢測方法］結(jié)合型凝固酶：玻片法游離型凝固酶：試管法玻片法操作：（1）準(zhǔn)備玻片（2）金葡表葡（3）滴加兔血漿（4）觀察結(jié)果試管法操作：（四）抗原構(gòu)造１、蛋白抗原（staphylococcalproteinA,ＳＰＡ）只存在于金黃色萄球菌表面。２、多糖抗原金黃色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸（檢測磷壁酸Ａｂ有助于金葡菌感染診斷）凝固酶（－）葡萄球菌：甘油磷壁酸葡萄球菌A蛋白（SPA）的意義：（1）降低抗體的調(diào)理作用，抗吞噬（2）協(xié)同凝集試驗(yàn):輔助診斷疾病。SPA的檢測模式示意圖致病性葡萄球菌（SPA)兔抗羊紅細(xì)胞Ab（IgGFc）SRBC致敏羊紅細(xì)胞（五）分類:３5個種及亞種１、按色素分類：金、白、檸２、按凝固酶分類：凝固酶陰性、凝固酶陽性葡萄球菌３、按噬菌體分類：

4、據(jù)色素、生化反應(yīng)分：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性葡萄球菌（六）抵抗力無芽胞菌中最強(qiáng)，耐熱、耐干燥、耐高鹽，對石炭酸、升汞、龍膽紫敏感。易產(chǎn)生耐藥性變異，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillinresistantstaphylococcus,MRSA）。MRSA常呈多重耐藥，成為醫(yī)院感染的常見菌。長期住院、反復(fù)使用各種廣譜抗菌藥物、燒傷或有傷口的病人及與MRSA定植或感染的病人接觸都是造成院內(nèi)MRSA流行的危險因素。MRSA定植或感染的人員及院內(nèi)環(huán)境污染是引起院內(nèi)流行的主要來源。

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）：二、致病性和免疫性(一)致病物質(zhì)金黃色葡萄球菌產(chǎn)生多種侵襲性酶與外毒素。

1．血漿凝固酶（coagulase)：結(jié)合型凝固酶、游離型凝固酶。

鑒別金黃色葡萄球菌的重要指標(biāo)。3．殺白細(xì)胞素4．腸毒素：（A、B、C1、C2、C3、D、E、G、H9個血清型）5．表皮剝脫毒素6.毒性休克綜合征毒素1（toxicshocksyndrometoxin1,TSST1）2．葡萄球菌溶血素（二）所致疾病

金黃色葡萄球菌

1．侵襲性疾?。海?）皮膚軟組織感染

特點(diǎn)：病灶局限且膿汁粘稠

（2）內(nèi)臟器官感染（3）全身感染（4）尿路感染2．毒素性疾病（1）食物中毒（2）燙傷樣皮膚綜合征：由表皮剝脫毒素引起。（3）葡萄球菌性腸炎人類凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最為常見。CNS主要引起以下幾種感染：泌尿系感染，細(xì)菌性心內(nèi)膜炎，敗血癥等，其中大多為醫(yī)院內(nèi)感染。此外，心臟起搏器安裝、置換人工心臟瓣膜、長期腹膜透析、靜脈滴注等亦可造成凝固酶陰性葡萄球菌的感染。凝固酶陰性葡萄球菌的致病性三、幾種常見葡萄球菌的鑒別細(xì)菌菌落顏色溶血觸酶凝固酶甘露醇新生霉素

金黃色金黃色β+++S葡萄球菌表皮葡萄白色γ+--S球菌溶血葡萄白色β+--S/R球菌腐生葡萄檸檬黃γ+--R球菌四、防治原則預(yù)防：皮膚創(chuàng)