實驗革蘭氏染

實驗革蘭氏染第1頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月【菌種】齒垢【試劑】生理鹽水、革蘭染液【其他材料】酒精燈、接種環(huán)、玻片、牙簽、吸水紙、顯微鏡等【方法】1、細菌涂片標本的制片

2、革蘭染液染色

3、油鏡下觀察結果

一、革蘭染色法由丹麥醫(yī)生HansChristianGram于1884年創(chuàng)立。第2頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月器具：接種環(huán)（上）和接種針（下）

柄約22cm2—5mm絕緣柄約7.5cm金屬柄約14.5cm5—8cm安裝環(huán)(針)的螺口(約8mm)細菌涂片的制備第3頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月操作原則：無菌操作（燒灼滅菌）Asepticarea10-20cm外焰焰芯內(nèi)焰第4頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月菌液采取法細菌涂片的制備第5頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月細菌涂片的制備

一般制備涂片包括涂片、干燥、固定三步。涂片干燥固定【操作步驟】第6頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月固定的目的：使細菌的細胞凝固，使菌體與玻片粘得更牢固；可改變菌體對染料的通透性；加熱固定可殺死細菌，比較安全。

第7頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月

結晶紫

1’

碘液

1’95%乙醇

30”復紅

1’

沖洗濾紙干燥

油鏡觀察沖洗沖洗沖洗二、革蘭染液染色初染媒染脫色復染【操作步驟】第8頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月紫色（G＋）革蘭氏染色步驟示意圖革蘭氏染色甲菌乙菌初染結晶紫媒染碘液脫色乙醇復染稀釋復紅紫色（G＋）紅色（G-）革蘭氏染色步驟示意圖第9頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月【結果】細菌被染成紫色者，稱為革蘭陽性菌；而細菌染成紅色者，稱為革蘭陰性菌；陽性菌——紫色

陰性菌——紅色第10頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月【革蘭氏染色法的原理

】

1、細胞壁通透性學說

2、等電點學說

3、化學學說第11頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月

通透性學說G+菌細胞壁結構致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)含量少，乙醇不易進入。G-菌細胞壁結構疏松，肽聚糖層薄，含大量脂質(zhì)，乙醇易滲入。第12頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月

等電點學說G+菌等電點（pI2~3）G-菌等電點（pI4~5）在相同pH條件下G+菌所帶負電荷比G-菌多，所以與帶正電荷的結晶紫染料結合較牢固，不易脫色。第13頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月化學學說G+菌菌體內(nèi)含有大量核糖核酸鎂鹽，可與碘、結晶紫等染料牢固結合，使已著色的細菌不易被乙醇脫色G-菌菌體內(nèi)含核糖核酸鎂鹽很少，故易被脫色第14頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月注意事項涂片的厚度。固定的程度。染色的時間控制：一一半一。沖洗的方法，不要對著涂片區(qū)。95%乙醇脫色時間。第1