實驗革蘭氏染

實驗革蘭氏染第1頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月【菌種】齒垢【試劑】生理鹽水、革蘭染液【其他材料】酒精燈、接種環(huán)、玻片、牙簽、吸水紙、顯微鏡等【方法】1、細(xì)菌涂片標(biāo)本的制片

2、革蘭染液染色

3、油鏡下觀察結(jié)果

一、革蘭染色法由丹麥醫(yī)生HansChristianGram于1884年創(chuàng)立。第2頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月器具：接種環(huán)（上）和接種針（下）

柄約22cm2—5mm絕緣柄約7.5cm金屬柄約14.5cm5—8cm安裝環(huán)(針)的螺口(約8mm)細(xì)菌涂片的制備第3頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月操作原則：無菌操作（燒灼滅菌）Asepticarea10-20cm外焰焰芯內(nèi)焰第4頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月菌液采取法細(xì)菌涂片的制備第5頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)菌涂片的制備

一般制備涂片包括涂片、干燥、固定三步。涂片干燥固定【操作步驟】第6頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月固定的目的：使細(xì)菌的細(xì)胞凝固，使菌體與玻片粘得更牢固；可改變菌體對染料的通透性；加熱固定可殺死細(xì)菌，比較安全。

第7頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月

結(jié)晶紫

1’

碘液

1’95%乙醇

30”復(fù)紅

1’

沖洗濾紙干燥

油鏡觀察沖洗沖洗沖洗二、革蘭染液染色初染媒染脫色復(fù)染【操作步驟】第8頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月紫色（G＋）革蘭氏染色步驟示意圖革蘭氏染色甲菌乙菌初染結(jié)晶紫媒染碘液脫色乙醇復(fù)染稀釋復(fù)紅紫色（G＋）紅色（G-）革蘭氏染色步驟示意圖第9頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月【結(jié)果】細(xì)菌被染成紫色者，稱為革蘭陽性菌；而細(xì)菌染成紅色者，稱為革蘭陰性菌；陽性菌——紫色

陰性菌——紅色第10頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月【革蘭氏染色法的原理

】

1、細(xì)胞壁通透性學(xué)說

2、等電點學(xué)說

3、化學(xué)學(xué)說第11頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月

通透性學(xué)說G+菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)含量少，乙醇不易進(jìn)入。G-菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)疏松，肽聚糖層薄，含大量脂質(zhì)，乙醇易滲入。第12頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月

等電點學(xué)說G+菌等電點（pI2~3）G-菌等電點（pI4~5）在相同pH條件下G+菌所帶負(fù)電荷比G-菌多，所以與帶正電荷的結(jié)晶紫染料結(jié)合較牢固，不易脫色。第13頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月化學(xué)學(xué)說G+菌菌體內(nèi)含有大量核糖核酸鎂鹽，可與碘、結(jié)晶紫等染料牢固結(jié)合，使已著色的細(xì)菌不易被乙醇脫色G-菌菌體內(nèi)含核糖核酸鎂鹽很少，故易被脫色第14頁，課件共16頁，創(chuàng)作于2023年2月注意事項涂片的厚度。固定的程度。染色的時間控制：一一半一。沖洗的方法，不要對著涂片區(qū)。95%乙醇脫色時間。第1