糞便檢驗-(keyonh)課件

糞便檢驗

第八組糞便檢查主要用于協(xié)助診斷消化道疾?。?、腸道感染性疾病；2、腸道寄生蟲感染；3、消化道出血鑒別與腫瘤篩檢；4、了解胃腸道消化、吸收功能；5、黃疸的鑒別診斷。糞便成分主要有：1、未被消化的食物殘渣；2、已被消化但未被吸收的食糜；3、消化道分泌物；4、分解產(chǎn)物；5、腸壁脫落的上皮細胞；6、細菌，如大腸埃希氏菌、腸球菌和一些過路菌；第一節(jié)標本采集和處理

一、標本容器盛標本的容器應清潔、干燥、有蓋、無吸水和滲漏。細菌學檢查，糞便標本應采集于滅菌、有蓋的容器內(nèi)。二、標本采集標本新鮮，盛器清潔、干燥。選取有病理意義的標本，多點取樣。及時檢測，標本采集后于1小時內(nèi)檢測

完畢。寄生蟲檢測應多次取樣，并注意取樣方式。阿米巴滋養(yǎng)體等原蟲檢測，應及時、保溫送

檢。糞便隱血檢測應于試驗前素食三天，并禁服

鐵劑、及維生素。

第二節(jié)理學檢查

1、糞便量2、糞便外觀顏色：正常人糞便呈黃褐色，嬰兒糞便呈黃綠色或金黃色糊狀。常見顏色的改變見下表：顏色生理性況病理性況黃褐色金黃色

灰白色綠色紅色醬色黑色成人正常顏色哺乳兒正常顏色，食物中有較多奶類，服用山道年、大黃等藥物服用鋇劑后食用大量含葉綠素蔬菜食用大量紅色食物后飲食大量咖啡、可可、巧克力等食物服用活性炭、鐵劑、餓劑、中藥或豬血等存在未經(jīng)改變的膽紅素膽汁減少或缺如，脂肪過量存在乳兒消化不良下消化道出血阿米巴痢疾上消化道出血性狀：正常人糞便為成形軟便，嬰兒為糊狀便。病理狀態(tài)時，糞便性狀可發(fā)生改變。（1）稀糊狀或稀汁樣便：常因細菌腸毒素、內(nèi)源性促分泌物質(zhì)、致瀉物質(zhì)等物質(zhì)刺激腸道，導致腸蠕動亢進或腸液分泌增多所致。多見于各種感染和非感染性腹瀉，尤其是急性胃腸炎。

（2）膿性及膿血便：常見于下消化道病變、各種腸炎、痢疾、急性血吸蟲病，結(jié)腸或直腸癌，慢性潰瘍性結(jié)腸炎、腸結(jié)核。（3）米苷樣便：呈白色陶米水樣，多見于霍亂、副霍亂，為白色淘米水樣。

（4）柏油樣便：因上消化道出血所致，隱血試驗強陽性。（5）白陶土樣便：主要見于阻塞性黃疸及鋇餐造影術(shù)后。（6）鮮血便：見于直腸息肉，結(jié)腸癌、肛裂、痔瘡。

（7）胨狀便：見于慢性菌痢及過敏性腸炎。（8）黏液便：粘液混勻于糞便中，見于小腸病變；粘液非混勻于糞便中且較集中，見于大腸病變；粘液粘附于糞便表面，常見于直腸炎；透明膠凍樣粘液附于糞便表面時，見于粘液性腸炎、痙孿性便秘、情緒激動等。

3、寄生蟲蟲體糞便中如有蟲體較大的腸道寄生蟲蠕蟲，如蛔蟲、蟯蟲、絳蟲等或其片段，肉眼可見。鉤蟲蟲體需篩洗糞便后才見。4、氣味糞便的臭味與進食的種類，疾病的性質(zhì)有關(guān)。病理情況：糞便惡臭一般見于慢性腸炎、胰腺疾病、消化道大出血、結(jié)腸或直腸癌；糞便魚腥臭味見于阿米巴性腸炎；糞便酸臭味見于消化、吸收不良。

第三節(jié)顯微鏡檢查及其臨床意義

顯微鏡檢查內(nèi)容主要包括寄生蟲蟲卵、原蟲、細胞、真菌、結(jié)晶、食物殘渣等。（二）糞便中各有形成分的形態(tài)和意義

1、細胞1）紅細胞：正常糞便無紅細胞。上消化道出血時，紅細胞被破壞，糞便中難以見到。下消化道炎癥或出血時可出現(xiàn)數(shù)量不等的紅細胞，如痢疾、潰瘍性結(jié)腸炎、結(jié)腸癌、直腸息肉、痔瘡、急性血吸蟲病等。消化道疾病時由于炎病損傷出血，白細胞、紅細胞同時存在。細菌性痢疾時紅細胞少于白細胞，多分散存在且形態(tài)正常；阿米巴痢疾者紅細胞多于白細胞，多粘連成堆存在并有殘碎現(xiàn)象。

2）白細胞（膿細胞）糞便中的白細胞常見中性粒細胞。病理情況下，中性粒細胞呈灰白色，胞體腫脹、壞死、破碎、結(jié)構(gòu)不完整，胞質(zhì)內(nèi)充滿細小的顆粒，核不清楚的中性粒細胞，常成堆出現(xiàn)，此時稱為“膿細胞”

正常糞便，無或偶見白細胞。結(jié)腸炎，白細胞分散存在，一般少于15個/HFP；細菌性痢疾、潰瘍性結(jié)腸炎時，可見大量的白細胞或成堆出現(xiàn)的膿細胞以及吞有異物的小吞噬細胞；腸易激綜合癥、腸道寄生蟲病時可見較多的嗜酸性粒細胞，可伴有夏科-萊登結(jié)晶。

3）巨噬細胞：常隨膿細胞出現(xiàn)于急性菌痢的糞便中，潰瘍性結(jié)腸炎時，亦可偶見。

4）腸黏膜上皮細胞：見于結(jié)腸炎癥、偽膜性腸炎。5）腫瘤細胞：乙狀結(jié)腸癌、直腸癌病人的血性糞便，及時涂片染色（瑞氏或HE染色）可找到成堆體積大，形態(tài)異常的腫瘤細胞。2、寄生蟲卵、原蟲、滴蟲①寄生蟲卵：糞便中檢查寄生蟲卵是診斷腸道寄生蟲感染的最常用的指標。糞便中常見的寄生蟲卵有：蛔蟲卵、鉤蟲卵、鞭蟲卵、蟯蟲卵、華枝睪吸蟲卵、血吸蟲卵、姜片蟲卵和帶絳蟲卵等。②原蟲和滴蟲：腸寄生原蟲包括阿米巴原蟲、隱孢子蟲、鞭毛蟲、纖毛蟲和人芽囊原蟲等。

3、結(jié)晶糞便中檢出夏科-雷登結(jié)晶，主要見于阿米巴痢疾、鉤蟲病以及過敏性腸炎，并同時見到嗜酸性粒細胞。4、食物殘渣在正常糞便中，食物殘渣均系已充分消化后的無定形細小顆粒。未經(jīng)充分消化的食物殘渣，常見的有以下幾種：①脂肪小滴②淀粉顆粒③肌肉纖維④結(jié)締組織⑤植物纖維及植物細胞第四節(jié)化學檢查及其臨床意義一、隱血試驗

概念：隱血是指上消化道有少量出血時（每日出血量少于5ml），而且紅細胞因被消化分解,肉眼不見糞便改變顏色，并且糞便涂片顯微檢查未能檢出紅細胞。而需用其他間接方法才能證實的出血。隱血試驗的方法有化學法和免疫法兩種。

1、化學法隱血試驗（OBT）試驗原理：血紅蛋白中含鐵血紅素具有過氧化物酶的活性，能分解過氧化物，催化色原物質(zhì)而呈色，呈色的深淺反映了血紅蛋白的含量，即出血量的多少。常用方法：主要有鄰聯(lián)甲苯胺法，聯(lián)苯胺法，匹拉米洞法，愈創(chuàng)木酯法等。假陽性情況：如外源性干擾；假陰性情況：如外源性與內(nèi)源性干擾聯(lián)苯胺法【原理】

于糞便內(nèi)加入易被氧化的物質(zhì)（聯(lián)苯胺等）及放氧的物質(zhì)（H2O2）,經(jīng)糞便內(nèi)血液的作用（血色素中的鐵卟啉環(huán)有過氧化酶作用）分解過氧化氫放出O2-，使聯(lián)苯胺被氧化而致顏色?！緳z查方法、結(jié)果及優(yōu)缺點】1.方法

聯(lián)苯胺法

無色孔雀綠法

單克隆抗體OB試驗取聯(lián)苯胺粉少許置于玻片上，滴加冰醋酸

2-3滴，再加3%H2O22滴，取糞便少許與以上試劑混勻，觀察結(jié)果。

2.結(jié)果

2分鐘蘭色（+）

1分鐘蘭色（++）

1/2分鐘蘭色（+++）

立即蘭色（++++）

2分鐘以上蘭色（-）

2、免疫法隱血試驗原理：該試驗所有的抗體可分為兩類，一種為抗人血紅蛋白抗體，另一種為抗人紅細胞基質(zhì)抗體。常用方法有免疫單擴法、對流免疫電泳、免疫擴散法、酶聯(lián)免疫吸附試驗、反向間接血凝法等。免疫法不必控制飲食，且敏感性和特異

性都高于化學法。假陽性情況：高靈敏度可造成假陽性，

故不宜用于日常篩檢。假陰性情況：主要檢測下消化道出血，

以及帶現(xiàn)象。臨床意義：糞便隱血試驗主要用于消化道出血、消化道腫瘤的篩檢和鑒別。隱血陽性：

1、見于消化道出血、藥物致胃粘膜損傷（如服用阿司匹林、糖皮質(zhì)激素）、腸結(jié)核、克羅思病、胃?。ㄎ笣?、胃炎）、潰瘍性結(jié)腸炎、結(jié)腸息肉、鉤蟲病及腎病綜合癥出血熱、消化道惡性腫瘤等。

2、消化性潰瘍與腫瘤出血的鑒別：隱血試驗對消化道潰瘍的陽性診斷率為40-70％，呈間斷性陽性；而消化道惡性腫瘤診斷陽性率可達95％，且呈持續(xù)性陽性。第五節(jié)糞便的細菌學檢查正常人的腸道中棲居大量的不同種類的微生物，組成人類健康極為重要的體內(nèi)微生態(tài)環(huán)境——參與營養(yǎng)、消化、吸收及清潔腸道，維護健康的作用。腹瀉因病原菌或病毒在在腸道繁殖引發(fā)，引起腹瀉細菌種類多。本實驗主要介紹疑為沙門菌或志賀菌屬感染者或帶菌者的糞便標本（或直腸拭子）中致病菌的分離和鑒定。

由于腸道中存在大腸埃希菌等很多條件致病菌，其與腸道致病菌的主要區(qū)別之一是：大多數(shù)條件致病菌可分解乳糖，而絕大多數(shù)腸道致病菌則不分解乳糖。分離腸道致病菌多用含乳糖的弱選擇性鑒別培養(yǎng)液（如麥康凱瓊脂等）以及對大腸埃希菌等條件致病菌有較強抑制作用、而又有利于腸道某些致病菌（如沙門菌及志賀菌屬）生長繁殖的強選擇性鑒別培養(yǎng)液。糞便標本常見的病原菌：■G＋菌：葡萄球菌屬、白色假絲酵母菌、艱難梭菌、結(jié)核分枝桿菌、蠟樣芽孢桿菌■G－菌：志賀菌、沙門菌、致病性大腸埃希菌、霍亂弧菌、親水氣單胞菌、類志賀鄰單胞菌、彎曲菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌

試劑與器材菌株：傷寒沙門菌培養(yǎng)基：麥康凱和SS瓊脂平板各種生化反應培養(yǎng)液及革蘭氏染液等試劑（可參見微生物的自動分析及附錄）

沙門菌多價“O”（A-F組）及單價“O”診斷血清、“H”因子診斷血清標本的采集

由于糞便中細菌種類很多，故應根據(jù)檢查目的的不同選擇適宜的培養(yǎng)液或用適當方法處理，盡可能地抑制雜菌，以利于病原菌的檢出。不能認為糞便中細菌含量多，糞便標本的采集就無須無菌操作。糞便標本的采集也應遵循無菌操作的原則。若便器或標本容器不潔而污染了變形桿菌，就可能影響病原菌的分離檢出，甚至把污染菌誤報，造成誤診。標本的采集采樣的時期應合適。疑似痢疾患者應在發(fā)病初期、用藥前采取標本。糞便標本采集時應挑取無尿液污染的有膿血、黏液部分的糞便2—3g（液狀糞便可挑取絮狀物），盛于無菌容器內(nèi)送檢。在無法獲得糞便時，可采用直腸拭子，即用滅菌棉拭子經(jīng)0.9%氯化鈉溶液或增菌培養(yǎng)液濕潤后，插入肛門內(nèi))4—5cm處，輕輕轉(zhuǎn)動一圈后取出，插入無菌試管（CaryBlair系統(tǒng)運送管）或保存液中送檢；疑似傷寒患者應在發(fā)病2—3周內(nèi)采集糞便標本。標本的采集在無法獲得糞便時，可采用直腸拭子，即用滅菌棉拭子經(jīng)0.9%氯化鈉溶液或增菌培養(yǎng)液濕潤后，插入肛門內(nèi))4—5cm處，輕輕轉(zhuǎn)動一圈后取出，插入無菌試管（CaryBlair，卡—布系統(tǒng)運送管）或保存液中送檢；應采集可疑糞便，如立即患者粘液膿血便、霍亂患者的米泔水樣便等。以為換亂患者，硬質(zhì)堿性蛋白胨水中。除嬰幼兒外，不推薦用棉拭子做常規(guī)病原菌培養(yǎng)。糞便標本如不能立即送檢，可將標本放入甘油鹽水保存液中，或保存于冰箱內(nèi)（勿超過2小時）。糞便標本的細菌學檢驗程序糞便標本或肛拭子道標本涂片增菌培養(yǎng)直接分離報告革蘭染色；動力學觀察與制動試驗（KIA、MIU）初步報告需氧培養(yǎng)GN增菌液或亞硒酸增菌液堿性蛋白胨TCBS平板或其它堿性平板分離SS平板MAC平板EMB平板副溶血性弧菌選擇平板菌落形態(tài)生化反應菌落形態(tài)、生化反應、抗血清凝集藥敏菌落形態(tài)、生化反應、抗血清凝集藥敏步驟與方法革蘭氏染色志賀菌與沙門菌：急性腹瀉患者的糞便標本劃線接種于SS平板和MAC平板。慢性腹瀉患者志賀菌或攜帶者應接種GN增菌液，沙門菌接種亞硒酸鹽增菌液，再轉(zhuǎn)種SS平板與MAC平板，觀察小的、透明或半透明、無色或淺黃色的可以菌落生長，有時SS平板可見中心黑色菌落（H2S）。挑選三個可疑菌落分別接種三支KIA、MIU培養(yǎng)基，觀察結(jié)果。挑取菌落進行革蘭氏染色，觀察細菌形態(tài)、排列。采用傷寒沙門菌診斷血清進行血清學鑒定。步驟與方法生化反應鑒定第2日觀察平板上有無可疑菌落，用接種針于上述平板中挑取單個可疑菌落（無色、半透明、光滑、較?。?—3個，分別接種至2—3管雙糖培養(yǎng)液內(nèi)，置37℃培養(yǎng)18—24h。第3日觀察細菌生長情況，根據(jù)表10—2初步鑒定細菌種類，然后取雙糖培養(yǎng)液上的菌落進行系列生化鑒定。表不同腸道細菌在雙糖培養(yǎng)液培養(yǎng)結(jié)果（教學實驗模擬標本的結(jié)果）序號上層（乳糖）下層（葡萄糖）動力可能結(jié)果

1++有大腸埃希菌

2—+有傷寒沙門菌

3—+無痢疾志賀菌步驟與方法血清學最終鑒定根據(jù)雙糖培養(yǎng)液及系列生化反應結(jié)果判斷，最后利用血清學實驗對細菌進行最后的確定。如果初步鑒定結(jié)果為沙門菌屬，則取雙糖培養(yǎng)液斜面上菌苔與沙門菌多價“O”（A-F組）診斷血清作玻片凝集實驗，如凝集即為沙門菌屬，然后分別與A-F組的單價“O”診斷血清作玻片凝集實驗定組，最后以H因子診斷血清作玻片凝集實驗以定型（種），必要時可用因子診斷血清定型。如果根據(jù)雙糖培養(yǎng)液及系列生化反應結(jié)果判斷，初步鑒定結(jié)果為志賀菌屬，則取菌苔與志賀菌屬多價診斷血清作玻片凝集實驗以定組，必要時可用因子診斷血清定種或型。步驟與方法若為較典型的沙門菌生化反應，但與A-F組多價“O”診斷血清又不發(fā)生凝集反應，應考慮可能為有VI抗原的沙門菌，可將菌制成懸液以100℃加熱30分鐘以除去VI抗原后，再做血清學鑒定。如為較典型的志賀菌生化反應又不與其多價診斷血清發(fā)生凝集，則可用同樣方法加熱100℃1小時以破壞其K抗原，再做玻片凝集反應鑒定之。在細菌的血清鑒定中，最常使用的方法是凝集反應，其基本原理是細菌為顆粒性抗原，當與相應的抗體混合時，在一定濃度的電解質(zhì)條件下，可出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。步驟與方法取一潔凈載玻片，用記號筆劃兩個1—1.5cm的圓圈。取1：5或1：10診斷血清一接種環(huán)置于玻片左側(cè)圈內(nèi)，在右側(cè)圈內(nèi)放一接種環(huán)0.9%氯化鈉作為對照。如天氣炎熱，環(huán)境溫度高，則應適當多取血清及0.9%氯化鈉，以防試劑短時間內(nèi)干涸，影響結(jié)果的觀察。用接種環(huán)取待鑒定的新鮮細菌少許，分別研磨乳化于診斷血清及0.9%氯化鈉內(nèi)使之均勻混合。旋轉(zhuǎn)搖動玻片數(shù)次，