生物學做Westernblot儀器教學課件

生物學做Westernblot儀器聰明出于勤奮，天才在于積累生物學做Westernblot儀器生物學做Westernblot儀器聰明出于勤奮，天才在于積累Westernblot常見檢測方法(有四嗎m化學顯色法如DAB顯色放射自顯影法如同位秦化學發(fā)光法如ECL化學熒光法如Rdye680、IRdye780不同檢測方法特點G四panylimited化學顯色法操作簡便,無需暗和顯影設備,顯色直觀,但靈敏度較低,國外已不常見?；瘜W發(fā)光法(ECL)比化學顯色法受敏度高,可達pg水平。但由于是酶促反應,不同曝光時間得到的信號與樣品量不成線性關系,不能做準確定量。熒光法果用熒光檢測原理,操作簡單,熒光信號強弱直接反映目的蛋白量,可進行精確定量;還可以根據(jù)熒光染料的不同,用不同的熒光二抗可以在同一張膜上同時檢測兩種蛋白質。關系數(shù)據(jù)庫綜合設計是《數(shù)據(jù)庫原理及應用》課程的核心能力之一，其涵蓋的知識點繁多并抽象，在實際教學中，學生在數(shù)據(jù)庫綜合設計環(huán)節(jié)中往往容易思路輪亂，概念不清，因此需要教師在教學中采用科學的教學方法加以引導。一、課堂設計思路從一個需求復雜的實際項目出發(fā)，對數(shù)據(jù)庫設計整體流程進行系統(tǒng)化的訓練，以翻轉課堂的形式，學生進行分組討論，提高學生的實際工程實踐能力。結合實際項目，為一個有一定復雜程度的應用程序開發(fā)項目設計數(shù)據(jù)庫，采用翻轉課堂授課方式，貫穿數(shù)據(jù)庫設計的整個流程：系統(tǒng)業(yè)務流程分析→系統(tǒng)中E_R圖繪制→前后臺功能需求的區(qū)分→信息數(shù)據(jù)提煉分析→數(shù)據(jù)庫邏輯結構設計→數(shù)據(jù)庫實現(xiàn)，使學生具有復雜項目數(shù)據(jù)庫設計的能力。二、項目選取翻轉課堂教學中，第一項重要因素就是課堂項目實例，因為作為課堂教學使用，因此對于項目的難度、復雜度、工程應用價值、教學適合度等方面均有一定要求。本文中的項目選自中國大學生計算機設計大賽的參賽題目，數(shù)據(jù)庫是作為應用程序設計的一部分，其設計需求必須是依據(jù)實際的軟件項目需求。三、課堂教學實施過程設計翻轉課堂具體實施過程設計如下圖1所示。通過這種形式，學生對于需求復雜的項目的數(shù)據(jù)庫設計思路清晰，方法明確，設計的更加合理。四、案例設計項目題目：“停車app系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫設計”（一）項目內容1.項目概述通過掌上停車，車主在出行前就可以掌握停車場的車位信息，還能夠使用手機自助繳費，大大提高出行的效率；停車場管理方能夠實時掌握車場數(shù)據(jù)，實行統(tǒng)一的動態(tài)管理，同時還能計時收費避免誤差，降低人工成本。2.項目功能需求（1）停車服務管理平臺。停車服務管理平臺是掌上停車APP的后臺支撐，提供車主、運營單位、監(jiān)管單位等信息的維護。（2）用戶端。注冊登錄、找車位、停車位預測、停車繳費、繳費信息查詢、個人中心。（二）課上學生匯報并討論（1）小組同學上臺匯報，展示ppt。（2）就該項目及小組完成的內容，根據(jù)學生容易出現(xiàn)的三類錯誤布置課堂討論問題。第一類錯誤：實體和聯(lián)系混淆Q1.功能需求中提到的：“停車服務管理平臺、掌上停車APP、車主、運營單位、監(jiān)管單位”是否需要認定為“實體”。Q2.請分析停車繳費功能：車輛即將離開時，車主通過輸入車牌，查詢應繳金額，通過支付寶進行繳費，繳費成功后，15分鐘內，車輛自行離開，超過15分鐘，繼續(xù)計費。這一功能涉及的實體，及這功能實現(xiàn)需要及產(chǎn)生的信息有哪些？第二類錯誤：功能的實現(xiàn)方式混淆Q1.“找車位”這一功能中提到的，查找停車場的“剩余車位”，你認為“剩余車位”是作為一個關系的屬性，還是可以通過編寫程序計算獲得，如何計算？第三類錯誤：E_R圖與推導的關系模型不對應Q1.請分析E_R圖中，停車點，停車位，用戶三者之間的聯(lián)系。Q2.請分析是用戶和停車位之間產(chǎn)生“停車繳費”聯(lián)系，還是用戶和繳費信息之間產(chǎn)生“停車繳費”聯(lián)系呢？第四類錯誤：數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)詳細設計中概念模糊Q1.數(shù)據(jù)庫詳細設計中，缺少參照完整性約束，請你為其添加。Q2.“天氣情況”約束說明有誤，請問如何更改？（3）教師總結。教師對項目的問題做較全面的總結，使學生對問題的認識更加深刻。（三）課后學生自我總結及反饋課后學生根據(jù)自己的項目中的問題進行總結，并設計合理的解決方案，如還有為明白的問題與教師反饋交流。同時教師在課后要對所有組學生的答辯情況，遇到的問題進行總結，分析學生的作品，為今后的教學提供參考。五、結語本文是采用翻轉課堂這一教學方法在數(shù)據(jù)庫設計內容模塊中應用設計，從課堂設計思路、項目選取、課堂教學實施過程設計三個方面進行課堂教學設計，為數(shù)據(jù)庫綜合設計教學研究提出淺薄的意見。軍?；A課程是軍校課程體系的重要組成部分，承擔著培養(yǎng)學員通識能力和全面發(fā)展的重任，然而近年來基礎課程教學存在教員灌輸知識技能，學員學習功利化，教員與學員假互動等問題，這些問題的產(chǎn)生在一定程度上可以歸結為教學缺乏生命自覺的理念。一、什么是生命自覺“生命自覺”是指生命個體能夠體認到生命的存在并有意識的將生命向朝著健康，主動的方向發(fā)展和生長。李政濤教授將“生命自覺”概括為三個特征：一是明自我、二是明他人、三是明環(huán)境。具體來說，明自我是指能夠自覺確立人生信念，能夠體認到自我生命的獨特和與眾不同，也知曉自我生命的局限和限度。明他人是指對他人的生命敏感，尊重和敬畏。明環(huán)境是指能夠意識到環(huán)境對個體的影響以及個體對環(huán)境的促進作用。如果將教育看作是培養(yǎng)人的實踐活動，則生命自覺理念則是培養(yǎng)什么人的核心價值觀，即無論是什么樣的人才都應具備生命自覺的特質。二、軍?；A課教學滲透生命自覺理念的必要性軍校基礎課的意義在于使學員具備扎實的基本素養(yǎng)，如道德規(guī)范，軍事紀律，文化常識等。而這些內容又可以統(tǒng)稱為通識內容，因而軍?；A課又可稱為通識課。西方教育研究將通識課稱為“generalcurriculum”，強調知識的普遍性與一般性，目的在于個體的全面發(fā)展。1.生命自覺理念是軍?；A課的意識載體軍?；A課作為通識課程來說，其內容內化于學員并產(chǎn)生作用存在一個過程：個體接收內容并同化順應該內容進而影響思維和行動。生命自覺從個體自身出發(fā)，可以有意識的促使自身生命生長繼而達到全面發(fā)展。這種理念消除了專業(yè)教育和通識教育間的理念隔閡，從人的生長視角觀察課程和教學從而促進人的全面發(fā)展，而軍?；A課程培養(yǎng)學員綜合能力和素養(yǎng)的目的使得生命自覺的理念在通識課程中成為意識載體，課程與教學從目的到內容及方法都不得不顧及生命自覺。2.生命自覺理念是軍人必需的職業(yè)素養(yǎng)習主席提出新一代革命軍人的“四有”標準，即有靈魂，有本事，有血性和有品德?！八挠小睒藴士梢詮亩鄠€角度進行解讀，筆者認為從教育學的角度來觀察該標準，可以發(fā)現(xiàn)這四條標準是生命自覺理念的具體轉化。生命自覺的特征之一“明自我”強調自己對自身的認識和理解關乎生命自覺對個體的影響程度，而“四有”標準使得軍人對個體的認識和理解直觀化深刻化，軍人生命的生長和發(fā)展需要有靈魂的刺激，需要有本事的目標，需要有血性的作風，需要有品德的素養(yǎng)。“四有”標準是軍人必需的職業(yè)素養(yǎng)，因此生命自覺的要求也是軍人的必備素質。三、軍?；A課教學缺乏生命自覺理念軍校基礎課教學應將培養(yǎng)學員綜合素養(yǎng)和全面發(fā)展能力為中心要務，因此教學過程中教員的地位，教員與學員的關系以及教學方法的選擇等內容都應圍繞該中心要務展開，然而筆者發(fā)現(xiàn)目前教學中存在的例如教學方法單一，教員忽視學員接受水平等問題緣于教學缺乏生命自覺的理念。1.教員的主導地位壓縮學員的生長空間軍校教學具有一定軍事院校的特殊性和規(guī)定性，但凡是教學都應符合教學的一般規(guī)律，即明晰教與學的關系問題。教學方法上壓縮學員生長空間的表現(xiàn)：軍校課堂主要采用講授法，其他如案例，互動等方法不過是講授法的變式，還未形成以學員的生長為目的的教學方法。誠然，不是將課堂交給學員或者多向學員提出幾個問題就是促進學員生長的表現(xiàn)，學員的生長空間是由教員和學員共同互動生成的，教員與學員平等對話，教員引導學員主動積極思考，將教員的教與學員的學有機結合。教學形式上的壓縮學員生長空間的表現(xiàn)：軍校課堂講究嚴格的紀律，很難見到學員靈光乍現(xiàn)后主動舉手提出疑問，也很少見到真正意義上的小組討論合作學習。這兩種壓縮學員生長空間的表現(xiàn)都是由教員的主導地位導致的，教員與學員的課堂地位上的不平等無形中疏遠了教員與學員的關系，使得對學員有生長有促進的形式和內容難以深入和繼續(xù)。2.教員的教與學員的學割裂脫節(jié)軍校教員習慣將“教學目的，教法學法”等內容在上課時告訴學員，但很少有教員思考過“教法學法”的背后潛在的理念是：教員如何教，學員如何學。這種割裂式的思維方式最終的結果是在實際課堂中教員上自己的課，學員學自己的習，偶爾完成任務式的互動交流也難以擺脫課堂教與學的割裂脫節(jié)。教與學作為一個基本單位，實質上是密不可分的，教員的教的過程即學員學的過程，所有只強調教法或學法的內容都凸顯出教學的片面性與割裂性，如“以學習者為中心設計教學”，“先學后教”等。“以學習者為中心設計教學”明顯可以看出忽視了“教員的教”，而“先學后教”這種看似十分流行的方式卻被很多教員異化的使用。“先學后教”其方法論指導來源于“先行組織者策略”。“先行組織者策略”是奧蘇伯爾有意義學習的一個重要組成部分，先行組織者是安排在學習任務之前呈示給學習者的引導材料，它比學習任務具有更高一層的抽象性和包攝性。筆者認為，“先學后教”的核心是認知關系，即學與教的關系。學與教不僅是時間上的先后關系，還是學與教雙向滋養(yǎng)的關系。教員應認真思考：先期組織學員學習內容與之后教的內容是什么關系；學員什么內容可以學，什么內容不用學；教員什么內容可以教，什么內容不用教。3.教學評價強調學員唯一性和有效性教學的有效性一直是教學評價領域的熱點話題，近年來教學評價對象及內涵逐漸從教員的教轉變?yōu)閷W員的學。如果進一步追問“學員的學”是學了什么的話，可以有以下答案：學的知識與技能；學的情感態(tài)度和價值觀；學的分析與解決問題的能力等。從教學過程的角度看，以上的內容大多屬于終結性評價，而過程性評價的內容幾乎沒有涉及。從生命自覺的角度看，幾乎沒有生命生長的痕跡，只是外界強加的刺激和被動的接收。如果追問的答案是：學員在與教員互動中提出了獨特的問題，生發(fā)出創(chuàng)新的解決問題的思路，對以往的思維方式有了糾偏的過程等。從教學過程的角度看，注重學員學習過程，是對學員學習的過程性評價。從生命自覺的角度看，注重生命的內在生長，注重教學前和教學后思維價值觀的過程轉變。教學是教員與學員共同完成的教育實踐活動，因此評價教學不僅要關注學員的生命生長，還應關注教員的生命發(fā)展，教員在一堂教學課后自身的生命是否有生長，這是今后評價教學的另一重要指標。從設計教學到實施教學再到評價教學，這一線性過程如果沒有新鮮事物出現(xiàn)，只是按照計劃實施評價，這是完整的教學但不一定是優(yōu)秀的教學，因為缺乏教學生長，學員完全在教員的引導下進入所謂的正軌，提問的預設與回答如出一轍，沒有新的思路，即使有了，因與教員的授課進程不一，也會被打斷，因而熄滅了生命生長。教員的生命生長應在不斷與學員思維交鋒中開始，在與學員的雙向互動中結束。四、提升軍?；A課教學生命自覺理念的策略為了提升軍校基礎課教學生命自覺的理念，進一步提高軍?；A課教學質量，筆者從教育立場，思維方式和評價方式三個方面提出解決策略。1.基于教育立場，理解實踐生命自覺教育立場是指從教育的視角來觀察教學現(xiàn)象，分析教學問題，找出解決辦法。教育立場的核心是對生命的關注。教員一般在上課之前會召開教學準備會，在會上了解學員的以往學習生活經(jīng)歷，學習的目的和學員的要求。但很少會有教員思考學員的生命發(fā)展到哪個階段，若要使其繼續(xù)發(fā)展，我可以做些什么。因此在教育立場下實踐生命自覺，教員應做好以下幾個方面：第一，教學目標的制定主要依據(jù)學員生命實際狀態(tài)。學科教學目標的一般性是教員制定教學目標的參考，依據(jù)學員實際狀況，特別是生命發(fā)展階段才是根本。具體來說，教學目標的達成應該可以促進學員生命生長，該種生長是學員內在動力驅使所致，而不是外在強力刺激造成。第二，教員在與學員互動過程中關注其生命是否生長。教員的反思不應只在課后進行，在授課過程中應已經(jīng)開始，時刻反思剛剛過去的授課環(huán)節(jié)對學員產(chǎn)生了哪些影響，這些影響在多大程度上促進了學員生命生長，接下來該如何調整。因此，教學環(huán)節(jié)的調整不該是被動的應對，而是教員主動的改良，目的是更好的使學員生命得以生長發(fā)展。2.運用整體關系式思維，樹立復雜性思維理念上文提到教與學的事實割裂問題，其前提預設是看待教與學的觀念本身是孤立的，運用整體關系式思維就是針對割裂式和二元對立式思維的弊端所采用的辦法。課堂的生命自覺過程是教員與學員共生共長的過程。以教員提問為例，教員提問個體回答問題，這一問題可能是對個體生命自覺的促進，而如何通過個體的回答促進其他個體的生命自覺才是教員真正應該思考和把握的。教員提出的問題與問題之間是否有聯(lián)系，這種聯(lián)系是橫向聯(lián)系、縱向聯(lián)系還是交叉聯(lián)系，這種問題的預設必然要采用整體關系式思維。人的復雜性也決定了教育人是一個復雜的過程，在這當中教員應樹立復雜性思維的理念。所謂復雜性思維結合軍校教學來說是指當學員的一種觀點或行為發(fā)生時，其背后隱藏著復雜的生成過程，而教員應具備復雜性思維從而理解、引導和改善學員的觀點行為，使學員進一步實現(xiàn)生命自覺。3.確立教員學員評價主體，關注教學生長過程以往在教學評價中一直是教員占據(jù)主導地位，近年來教育界已然認識到學員才是教學評價的主體，然而筆者認為，單純強調學員的主體地位實際上也不符合教學規(guī)律，因此該確立以教員學員為中心的評價主體，細化評價指標，如教員在教學中的滿意度、生長度等內容；學員在教學中的知識技能收獲、價值觀的收獲以及生命自覺的生長等內容。筆者認為軍校教學賦予生命自覺的內涵是一種理想的目標，軍?；A課教學首先應富有生命自覺，這種自覺來源于生命的本質、來源于教育的精髓，更是軍校培養(yǎng)人才的核心素養(yǎng)之一。Westernblot常見檢測方法(有四嗎m化學顯色法如DAB顯色放射自顯影法如同位秦化學發(fā)光法如ECL化學熒光法如Rdye680、IRdye780不同檢測方法特點G四panylimited化學顯色法操作簡便,無需暗和顯影設備,顯色直觀,但靈敏度較低,國外已不常見?；瘜W發(fā)光法(ECL)比化學顯色法受敏度高,可達pg水平。但由于是酶促反應,不同曝光時間得到的信號與樣品量不成線性關系,不能做準確定量。熒光法果用熒光檢測原理,操作簡單,熒光信號強弱直接反映目的蛋白量,可進行精確定量;還可以根據(jù)熒光染料的不同,用不同的熒光二抗可以在同一張膜上同時檢測兩種蛋白質。ECL常見問題⑥mpanyLimited司≯暗操作麻煩,曝光時間難以控制,無法準確定量背景高,高濃度蛋白易出現(xiàn)“吹泡”現(xiàn)象>檢測兩種蛋白時,需要Stripping和Re-probe,操作復雜>膠片上無法直接觀察到MarkerGeneCompanyLimited解決方案:odyssey基因有限公司雙色紅外熒光成像系統(tǒng)熒光紅外雙色熒光——準確定量、線性范圍寬廣紅外—背景低、信噪比高雙色——同時檢測、同時輸出GeneCompanyLimitedOdysseyVSECL流程一有ECLOdyssey跑膠跑膠轉膜轉膜234567封閉封閉結合一抗、洗滌結合一抗、洗滌結合標記二抗、結合標記二洗滌抗、洗滌,成像發(fā)光試劑盒暗厲曝光成像LIi熒光直接檢測⑥m叫●信號持久●不需要底物●不需要底片暗室INFRAREDRAREDAPDDETECTORDIODEON-SCREENAntigenonPrimaryantibodyRDyelabeledsecondarymembranebindstoantigenantibodybindstoprimaryantibody熒光一準確定量mCHEMILUMINESCENCEODYSSEY動態(tài)信號一信號隨時間變化靜態(tài)信號一信號不隨時間變化信號不與目標蛋白濃度成比例關系信號和目標蛋白濃度成比例關系Saturation◆NTENSITY●Hig