中藥制劑雜質(zhì)檢查技術(shù)-特殊雜質(zhì)檢查

IMPURITYDETECTIONTECHNOLOGYOFTRADITIONALCHINESEMEDICINEPREPARATIONS–INSPECTIONTECHNOLOGYOFALKALOIDS中藥制劑雜質(zhì)檢查技術(shù)——生物堿的檢查案例導(dǎo)入云南賓川村民吃草烏中毒事件

2015年9月8日，云南賓川縣金牛鎮(zhèn)一村民邀約親戚朋友到家中煮食草烏燉豬腳，參加就餐的親屬先后出現(xiàn)中毒癥狀，并到醫(yī)院就診，經(jīng)醫(yī)院全力搶救，其中6人搶救無效死亡。根據(jù)檢測結(jié)果，該縣村民食用草烏中毒事件定性為烏頭堿中毒賓川縣中醫(yī)院楊鴻醫(yī)生說，草烏屬于毒性中藥材，烏頭類藥物都含有烏頭堿，烏頭堿的毒性極為強(qiáng)烈，常人只需服用3到4毫克就會出現(xiàn)心慌、心悸、心律不齊，甚至心跳驟停如何控制中藥制劑中的毒性雜質(zhì)烏頭堿?烏頭堿屬于哪一類天然活性成分?案例導(dǎo)入云南賓川村民吃草烏中毒事件哪些中藥中含有烏頭堿?烏頭堿屬于一般雜質(zhì)還是特殊雜質(zhì)？生物堿的檢查一、概述藥物除需檢查一般雜質(zhì)外，還需檢查可能存在的特殊雜質(zhì)。特殊雜質(zhì)是指某些藥物制劑在生產(chǎn)和貯藏、運(yùn)輸過程中，由于自身性質(zhì)、生產(chǎn)方式及工藝條件，可能引入的雜質(zhì)

1.特殊雜質(zhì)的檢查特殊雜質(zhì)的檢查通常是利用藥物與雜質(zhì)在理化性質(zhì)方法的差異，采用物理、化學(xué)、生物等方法進(jìn)行檢查。由于藥物品種不同，所含的特殊雜質(zhì)不同，采用的檢查方法也不同，故特殊雜質(zhì)的檢查方法收載在各品種的檢查項(xiàng)下一、概述

2.烏頭堿類生物堿的檢查烏頭類藥物有川烏、草烏、附子等。烏頭類藥物含有多種生物堿，其中烏頭堿型生物堿中C8、C14上的羥基分別與乙酸、苯甲酸結(jié)合生成雙酯型生物堿。雙酯型生物堿親酯性強(qiáng)，有麻辣味，毒性大。為保證用藥安全，《中國藥典》（2020年版）規(guī)定應(yīng)對烏頭類藥物及其成方制劑進(jìn)行雙酯型烏頭堿的限量檢查。常用方法為薄層色譜法（TLC），也可采用高效液相色譜法（HPLC）生物堿的檢查一、概述

3.其他生物堿的檢查除了烏頭類劇毒性生物堿的檢查外，中藥制劑中生物堿的檢查還包括總生物堿限量檢查，如風(fēng)濕定片等；莨菪堿限量檢查，如復(fù)方苦參腸炎康片等；士的寧的限量檢查，如復(fù)方夏天無片、風(fēng)寒雙李拐片等，還有鹽酸罌粟堿和嗎啡的限量檢查，如咳喘寧口服液等生物堿的檢查二、薄層色譜檢查法1.方法簡述將供試品和雜質(zhì)對照品分別點(diǎn)樣于同一薄層板上，展開、顯色、檢視。觀察供試品產(chǎn)生的斑點(diǎn)的位置和大小，并與雜質(zhì)對照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較，從而判斷雜質(zhì)是否超過限量。本法簡便、快速、靈敏、不需特殊設(shè)備，適用于有機(jī)雜質(zhì)的檢查生物堿的檢查二、薄層色譜檢查法2.檢查步驟生物堿的檢查供試品溶液的配制

對照品溶液的配制薄層色譜法檢查

→根據(jù)檢查結(jié)果得到結(jié)論雜質(zhì)對照品法供試品溶液自身稀釋對照法對照藥物法1法＋2法↓二、薄層色譜檢查法3.應(yīng)用實(shí)例生物堿的檢查（1）三七傷藥片中烏頭堿的限量檢查處方：三七、制草烏、紅花、骨碎補(bǔ)、接骨木、雪上一枝蒿供試品溶液的配制：取本品30片，除去包衣，研細(xì)，加氨試液10ml使?jié)櫇?，加乙?50ml，振搖30分鐘，放置2小時(shí)，分取乙醚液，回收溶劑至干，殘?jiān)脽o水乙醇溶解并加至2.0ml，作為供試品溶液對照品溶液的配制：另取烏頭堿對照品，加無水乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作為對照品溶液二、薄層色譜檢查法3.應(yīng)用實(shí)例生物堿的檢查（1）三七傷藥片中烏頭堿的限量檢查薄層色譜檢查：照薄層色譜法（《中國藥典》2020年版通則0502）操作，吸取供試品溶液10μl、對照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺（4:3:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，置日光下檢視檢查要求：供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上出現(xiàn)的斑點(diǎn)應(yīng)小于對照品的斑點(diǎn)，或不出現(xiàn)斑點(diǎn)二、薄層色譜檢查法3.應(yīng)用實(shí)例生物堿的檢查（2）咳喘寧口服液中罌粟堿和嗎啡的限量檢查處方：麻黃、石膏、苦杏仁、桔梗、百部、罌粟殼、甘草供試品溶液的配制：取本品25.0ml，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用三氯甲烷振搖提取3次，每次40ml合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙馐钩?0.0ml，作為供試品溶液對照品溶液的配制：另取鹽酸罌粟堿對照品和嗎啡對照品，分別加甲醇制成每1ml各含5.0mg和2.0mg的溶液，作為對照品溶液二、薄層色譜檢查法3.應(yīng)用實(shí)例生物堿的檢查薄層色譜檢查：照薄層色譜法（《中國藥典》2020年版通則0502）操作，吸取供試品溶液4μl、鹽酸罌粟堿對照品溶液10μl與嗎啡對照品溶液6μl，分別點(diǎn)于同一用2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液（20：20：3：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，置日光下檢視檢查要求：供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，出現(xiàn)的斑點(diǎn)應(yīng)小于對照品斑點(diǎn)（2）咳喘寧口服液中罌粟堿和嗎啡的限量檢查三、高效液相色譜檢查法1.方法簡述采用高壓輸液泵將流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱中，通過進(jìn)樣器注入的供試品被流動(dòng)相帶入色譜柱內(nèi)進(jìn)行分離，各成分先后進(jìn)入檢測器完成定量測定。可以直接測出雜質(zhì)的限量（限度），并與藥典要求比較，判斷是否合格生物堿的檢查2.檢查步驟生物堿的檢查三、高效液相色譜檢查法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)高效液相色譜法檢查外標(biāo)法：雜質(zhì)對照品法內(nèi)標(biāo)法：雜質(zhì)對照品，內(nèi)標(biāo)物加校正因子的主成分自身稀釋對照法不加校正因子的主成分自身稀釋對照法面積歸一化法↓↓根據(jù)檢查結(jié)果，得到結(jié)論對照品溶液的配制&供試品溶液的配制↓3.應(yīng)用實(shí)例生物堿的檢查制川烏中雙酯型生物堿的檢查色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：填充劑、流動(dòng)相、梯度洗脫、檢測波長；理論板數(shù)對照品溶液的配制三、高效液相色譜檢查法供試品溶液的配制藥品粉末過篩、稱量→加入溶劑溶解→超聲處理30分鐘續(xù)濾液→40℃以下減壓回收溶劑→殘?jiān)尤軇┤芙膺^濾，取續(xù)濾液，即得苯甲酰烏頭原堿對照品苯甲酰次烏頭原堿對照品苯甲酰新烏頭原堿對照品加異丙醇-三氯甲烷（1:1）混合溶液進(jìn)行配制3.應(yīng)用實(shí)例生物堿的檢查制川烏中雙酯型生物堿的檢查高效液相色譜法測定：精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，測定，即得三、高效液相色譜檢查法檢查要求：本品按干燥品計(jì)算，含苯甲酰烏頭原堿（C32H45NO10）、苯甲酰次烏頭原堿（C31H43NO9）及苯甲酰新烏頭原堿（C31H43NO10）的總量應(yīng)為0.070%～0.15%鏈接未來崗位藥物的雜質(zhì)檢查不僅包括一般雜質(zhì)檢查，也涵蓋了特殊雜質(zhì)檢查。雙酯型生物類特殊雜質(zhì)具有毒性，嚴(yán)重危害人民身體健康，嚴(yán)格控制其限量，對于保證藥品安全性和純度有著重要意義作為一名藥品檢驗(yàn)人員，須牢固樹立“質(zhì)量第一、安全操作”的意識，牢固掌握生物堿類特殊雜質(zhì)的操作方法和注意事項(xiàng)，細(xì)致準(zhǔn)確的記錄檢驗(yàn)結(jié)果，確保檢驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)可靠小結(jié)特殊雜質(zhì)的定義、生物堿類特殊雜質(zhì)的檢查方法薄層色譜檢查法的檢查步驟和應(yīng)用實(shí)例高效液相色譜檢查法的檢查步驟和應(yīng)用實(shí)例思考題查閱藥典，舉例說明薄層色譜法和高效液相色譜法在中藥制劑的生物堿類特殊雜質(zhì)檢查中的應(yīng)用。IMPURITYDETECTIONTECHNOLOGYOFTRADITIONALCHINESEMEDICINEPREPARATIONS–INSPECTIONOFOTHERSPECIALIMPURITIES土大黃苷的檢查案例導(dǎo)入湖南邵東縣通報(bào)土大黃冒充大黃案件

2016年1月，湖南邵東縣食品藥品監(jiān)督管理局通報(bào)了一起以土大黃冒充大黃以及無證經(jīng)營中藥材的案件，現(xiàn)場抓獲犯罪嫌疑人，當(dāng)場收繳中藥材大黃1200公斤、中藥飲片熟地2800公斤，涉案金額達(dá)33萬多元據(jù)業(yè)內(nèi)人士介紹，土大黃和大黃在外觀上比較接近，很難分辨，必須用專業(yè)儀器來鑒別。土大黃是民間單方，《中國藥典》沒有記載。其藥性與大黃區(qū)別較大，不能用來替代大黃。不法商家之所以用土大黃冒充大黃是因?yàn)槠渲械牟顑r(jià)很大。土大黃與大黃有哪些理化性質(zhì)方面的差異?案例導(dǎo)入湖南邵東縣通報(bào)土大黃冒充大黃案件如何檢查中藥制劑中是否摻雜了大黃的偽品土大黃？中藥制劑中特殊雜質(zhì)的檢查一、概述藥物除需檢查一般雜質(zhì)外，還需檢查可能存在的特殊雜質(zhì)。特殊雜質(zhì)是指某些藥物制劑在生產(chǎn)和貯藏、運(yùn)輸過程中，由于自身性質(zhì)、生產(chǎn)方式及工藝條件，可能引入的雜質(zhì)特殊雜質(zhì)的檢查通常是利用藥物與雜質(zhì)在理化性質(zhì)方法的差異，采用物理、化學(xué)、生物等方法進(jìn)行檢查。由于藥物品種不同，所含的特殊雜質(zhì)不同，采用的檢查方法也不同，故特殊雜質(zhì)的檢查方法收載在各品種的檢查項(xiàng)下二、土大黃苷的檢查

1.簡述正品大黃為蓼科大黃屬掌葉組植物，主要含有蒽醌類、二苯乙烯類、鞣質(zhì)及番瀉苷A類成分。偽品大黃如華北大黃、河套大黃為大黃屬波葉組植物，富含二苯乙烯苷類成分，尤其含大量土大黃苷中藥制劑中特殊雜質(zhì)的檢查土大黃苷為二苯乙烯類衍生物，通常認(rèn)為含土大黃苷的大黃質(zhì)量較次?！吨袊幍洹纷?985年起規(guī)定大黃藥材及其制劑應(yīng)檢查土大黃苷，包括大黃、大黃流浸膏、大黃浸膏、九味肝泰膠囊、三黃片、致康膠囊等二、土大黃苷的檢查

2.應(yīng)用實(shí)例中藥制劑中特殊雜質(zhì)的檢查（1）大黃流浸膏中土大黃苷的檢查本品為大黃經(jīng)加工制成的流浸膏【檢查】土大黃苷取本品0.2ml，加甲醇2ml，溫浸10分鐘，放冷，取上清液10μl，點(diǎn)于濾紙上，以45%乙醇展開，取出，晾干，放置10分鐘，置紫外光燈（365nm）下觀察，不得顯持久的亮紫色熒光【解析】土大黃苷在紫外光燈下顯亮藍(lán)紫色熒光，利用此性質(zhì)可進(jìn)行靈敏度法檢查，但應(yīng)注意假陽性的發(fā)生二、土大黃苷的檢查

2.應(yīng)用實(shí)例中藥制劑中特殊雜質(zhì)的檢查（2）九味肝泰膠囊中土大黃苷的檢查處方：三七、郁金、蒺藜、姜黃、酒大黃、黃芩、蜈蚣、山藥、五味子供試品溶液的配制：取本品內(nèi)容物0.6g，加乙酸乙酯20ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液對照品溶液的配制：另取土大黃苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液二、土大黃苷的檢查

2.應(yīng)用實(shí)例中藥制劑中特殊雜質(zhì)的檢查（2）九味肝泰膠囊中土大黃苷的檢查薄層色譜檢查：照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（10:3.5:0.2:0.3）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視檢查要求：供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，不得顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)三、豬去氧膽酸和豬膽的檢查

1.簡述天然牛黃和熊膽均含有膽酸類成分，但不含豬去氧膽酸、豬膽等成分?！吨袊幍洹穼烊慌｜S和熊膽的藥物進(jìn)行特殊雜質(zhì)檢查，如十香返生丸、六應(yīng)丸、西黃丸、安宮牛黃丸等檢查豬去氧膽酸，熊膽膠囊檢查豬膽等。檢查方法多采用薄層色譜法中藥制劑中特殊雜質(zhì)的檢查

2.應(yīng)用實(shí)例中藥制劑中特殊雜質(zhì)的檢查（1）安宮牛黃丸中豬去氧膽酸的檢查三、豬去氧膽酸和豬膽的檢查處方：牛黃、水牛角濃縮粉、麝香或人工麝香、珍珠、朱砂、雄黃、黃連、黃芩、梔子、郁金、冰片供試品溶液的配制：取重量差異項(xiàng)下本品，剪碎，取1g，加入等量硅藻土，研細(xì)，加乙醇20ml，加熱回流提取1小時(shí)，放冷，濾過，濾液作為供試品溶液對照品溶液的配制：另取豬去氧膽酸對照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液

2.應(yīng)用實(shí)例中藥制劑中特殊雜質(zhì)的檢查（1）安宮牛黃丸中豬去氧膽酸的檢查三、豬去氧膽酸和豬膽的檢查薄層色譜檢查：照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇（20：25：2：3）的上層溶液為展開劑，展開2次，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰檢查要求：供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，不得顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)

2.應(yīng)用實(shí)例中藥制劑中特殊雜質(zhì)的檢查（2）熊膽膠囊中豬膽的檢查處方：熊膽粉供試品溶液的配制：取本品內(nèi)容物適量（相當(dāng)于熊膽粉0.06g），加乙醇5ml使溶解，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?0%氫氧化鈉溶液5ml，置水浴上加熱水解8小時(shí)（或120℃水解2小時(shí)），放冷，滴加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次10ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，靜置，取上清液作為供試品溶液對照品溶液的配制：取