第02章藥物的鑒別試驗(yàn)

第二章藥物的鑒別試驗(yàn)《藥物分析課件》基本要求掌握：鑒別試驗(yàn)的目的、藥物性狀和物理常數(shù)的測定及其對藥物鑒別的作用，常用鑒別方法與選擇。熟悉:鑒別試驗(yàn)的影響因素與注意事項(xiàng)。了解：鑒別試驗(yàn)方法的驗(yàn)證。基本內(nèi)容一、概述二、藥物鑒別的項(xiàng)目三、藥物鑒別的方法四、鑒別試驗(yàn)的條件練習(xí)與思考一、概述

鑒別試驗(yàn)(identificationtest)：根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，采用化學(xué)、物理化學(xué)或生物學(xué)方法來判斷藥物的真?zhèn)巍?/p>

二、藥物鑒別的項(xiàng)目藥物的鑒別試驗(yàn)包括：性狀和鑒別（一）性狀（definition)聚集狀態(tài)、晶形

1.外觀色澤臭、味例維生素B1Ch.P（2010）

【性狀】本品為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；有微弱的特臭，味苦；干燥品在空氣中迅速吸收約4%的水分。（色澤）（聚集狀態(tài)）（臭）（味）2.溶解度極易溶：1份溶質(zhì)在不到1份溶劑中溶解易溶：1份溶質(zhì)在1份~不到10份溶劑中溶解溶解:1份溶質(zhì)在10份~不到30份溶劑中溶解略溶:1份溶質(zhì)在30份~不到100份溶劑中溶解微溶:…..在100份~不到1000份溶劑中溶解極微溶解:在1000份~不到10000份溶劑中溶解幾乎不溶或不溶：…10000份溶劑中不完全溶凡例項(xiàng)目與要求Ch.P（2010）（2）溶解度是藥品的一種物理性質(zhì)。各品種項(xiàng)下選用的部分溶劑及其在該溶劑中的溶解性能，可供精制或制備溶液時(shí)參考。例尼莫地平Ch.P（2010）

【性狀】

本品在丙酮、三氯甲烷或乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解，在乙醚中微溶，在水中幾乎不溶。其測定結(jié)果不僅對藥品具有鑒別意義，也可反映藥品的純度，是評價(jià)藥品質(zhì)量的主要指標(biāo)之一。3.物理常數(shù)相對密度、餾程、熔點(diǎn)、凝點(diǎn)、比旋度、折光率、黏度、吸收系數(shù)、碘值、皂化值、酸值。

第一法：易碎的固體藥品1）熔點(diǎn)

第二法：不易碎的固體藥品（脂肪酸、石蠟等）

第三法：凡士林或其他類似的物質(zhì)例撲米酮Ch.P（2010）

【性狀】熔點(diǎn)本品的熔點(diǎn)（附錄ⅥC）為280~284℃。摩爾吸收系數(shù)ε=A/CL

3）吸收系數(shù)百分吸收系數(shù)

2）比旋度：指在一定波長下，偏振光透過1dm且每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時(shí)測得的旋光度?？捎糜阼b別藥物、檢查藥物的純度和含量測定。

例維生素CCh.P（2010）

【性狀】比旋度取本品，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.10g的溶液，依法測定，比旋度為+20.5°～+21.5°.例鹽酸氨溴索Ch.P（2010）

【性狀】吸收系數(shù)精密稱取本品適量，加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含25μg的溶液，照紫外-可見分光光度法，在244nm的波長處測定吸光度，吸收系數(shù)()為233～247。（二）一般鑒別試驗(yàn)（generalidentificationtest）

ChP附錄中有：丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機(jī)氟類、無機(jī)金屬類（Na,K,Li,Ca,Ba,Fe.,Al,Zn,Cu,Ag,Hg等）、有機(jī)酸鹽類（水楊酸鹽）、無酸鹽類。

只能證實(shí)為某一類藥物，不能證實(shí)為某一種藥物。1.有機(jī)氟化物有機(jī)氟氧瓶燃燒無機(jī)氟離子pH4.3

茜素氟藍(lán)硝酸亞鈰藍(lán)紫色絡(luò)合物2.有機(jī)酸鹽(1)水楊酸水楊酸+FeCl3中性條件弱酸性條件紅色配位化合物紫色配位化合物（酚－OH）(2)酒石酸鹽供試品溶液（中性）+氨制硝酸銀水浴中銀鏡（還原性）3.芳香第一胺類供試品+稀鹽酸亞硝酸鈉堿性-萘酚試液橙黃到猩紅色4.托烷生物堿類具有莨菪酸結(jié)構(gòu)，有Vitali反應(yīng),顯紫色。5.無機(jī)金屬鹽

（1）鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽的焰色反應(yīng)

Na+顯鮮黃色K+顯紫色

Ca2+顯磚紅色

（2）銨鹽供試品+NaOH氨氣堿性：使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變藍(lán)還原性：使硝酸亞汞試液濕潤的濾紙顯黑色臭：氨臭6.無機(jī)酸根

氯化物：?

硫酸鹽：?如：母核相同，取代基不同一般鑒別試驗(yàn)?zāi)骋活愃幬飳勹b別實(shí)驗(yàn)此類藥物中的某一種藥物（三）專屬鑒別試驗(yàn)(specificidentificationtest)苯巴比妥司可巴比妥鈉巴比妥例司可巴比妥鈉

Ch.P（2010）

【鑒別】（2）取供試品0.1g，加水10ml溶解后，加碘試液2ml，所顯棕黃色在5分鐘內(nèi)消失。（4）本品顯丙二酰脲類的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ).例

苯巴比妥

Ch.P（2010）

【鑒別】（1）取本品約10mg，加硫酸2滴與亞硝酸鈉約5mg，即顯橙黃色，隨即轉(zhuǎn)橙紅色。（4）本品顯丙二酰脲類的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ).三、鑒別方法（一）化學(xué)鑒別法要求：專屬性強(qiáng)、再現(xiàn)性好、靈敏度高、操作簡便快速例阿司匹林Ch.P（2010）

【鑒別】（1）取本品約0.1g，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫堇色。例尼可剎米Ch.P（2010）

【鑒別】（3）取本品2滴，加水1ml，搖勻，加硫酸銅試液2滴與硫氰酸胺試液3滴，即生成草綠色沉淀。例維生素B1Ch.P（2010）【鑒別】（1）取本品約5mg,加氫氧化鈉試液2.5ml溶解后，加鐵氰化鉀試液0.5ml與正丁醇5ml，強(qiáng)力振搖2分鐘，放置使分層，上面的醇層顯強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光；加酸使成酸性，熒光即消失；再加堿使成堿性，熒光又顯出

。例尼可剎米Ch.P（2010）

【鑒別】（1）取本品10滴，加氫氧化鈉試液3ml，加熱，即發(fā)生二乙胺的臭氣，能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變藍(lán)色。制備衍生物測定熔點(diǎn)法

藥物＋試劑新化合物有一定mp;藥物酸化或堿化生成游離酸或堿。操作繁瑣費(fèi)時(shí)間，應(yīng)用較少。（二）光譜鑒別法1.紫外光譜鑒別法紫外光譜圖原理：缺點(diǎn)：光譜較簡單，曲線性狀變化不大，專屬性小于IR特點(diǎn)：具有一定的專屬性，儀器普及率高，操作簡單，應(yīng)用范圍廣方法：例鹽酸氯丙嗪Ch.P（2010）

【鑒別】（2）取本品，加鹽酸溶液（9→1000）制成每1ml中約含5μg的溶液，照紫外-可見分光光度法（附錄ⅣA）測定，在254nm與306nm的波長處有最大吸收，在254nm的波長處吸光度約為0.46。例維生素B2Ch.P（2010）

【鑒別】（2）取含量測定項(xiàng)下的溶液，照紫外-可見分光光度法（附錄ⅣA）測定，在267nm、375nm與444nm的波長處有最大吸收。375nm波長處的吸光度與267nm波長處的吸光度的比值應(yīng)為0.36~0.39。2.紅外光譜鑒別法特點(diǎn)：Ch.P標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照法

《藥品紅外光譜集》USP對照品對照法方法：試樣制備方法：壓片法、糊法、膜法、溶液法基線及取樣量：試樣的制備方法壓片法供試品（約1mg)+干燥KBr/KCl(約200mg)研磨均勻（瑪瑙研缽）

置壓膜中真空加壓至0.8-1GPa2-3min均勻透明片無明顯顆粒供試片同法制空白KBr/KCl片，做空白校正，扣除背景干擾糊法供試品（約5mg）,滴加少量液體石蠟或其他液體制成糊狀物瑪瑙研缽取適量夾于兩個(gè)KBr片（150mg/片）之間供試片KBr（約300mg）制成空白片，作背景校正

膜法

供試品多為高分子聚合物，可做成液膜鋪展于適宜的鹽片上。

溶液法

液體供試品（或溶于適宜的溶劑內(nèi)），制成1%-10%的溶液，置于0.1-0.5mm厚的液體池中，即可測得。原料藥的鑒別實(shí)測光譜與光譜集光譜不一致：（1）注意多晶型問題――轉(zhuǎn)晶；（2）使用對照品，和供試品用相同溶劑重結(jié)晶；（3）用規(guī)定的特定的藥用晶型；（4）改變制樣方法：固體制樣－溶液制樣。

制劑的鑒別

提取分離

溶劑要適宜

輔料干擾要少

避免晶型轉(zhuǎn)變

輔料無干擾，晶型無變化

輔料無干擾，晶型有變化

晶型無變化，輔料有干擾

晶型有變化，輔料有干擾制劑的鑒別

方法總結(jié)

直接提取，如鹽酸四環(huán)素片（熱乙醇提?。?/p>

鹽的主成分提取，如磷酸氯喹片

酸的主成分提取，如吉非貝齊膠囊

直接取樣，如氨甲環(huán)酸膠囊

其它方法例阿司匹林Ch.P（2010）

【鑒別】（3）本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜（光譜集5圖）一致。對比時(shí)應(yīng)注意的問題：P80(1)-(5)TLC（Rf樣＝Rf對）方法：

PC

HPLC、GC（tR樣＝tR對）

原理：不同物質(zhì)在不同色譜條件下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為。與對照品在相同條件下進(jìn)行色譜分離，并比較其保留行為和檢測結(jié)果是否一致來驗(yàn)證真?zhèn)?。（三）色譜鑒別法(Rf的最佳范圍0.3-0.5,可用范圍0.2-0.8)薄層色譜法比移值(Rf)—定性參數(shù)原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心距離原點(diǎn)到溶劑前沿距離Rf==LL0原點(diǎn)?L0L1L2前沿顏色、大小位置S結(jié)構(gòu)相似藥物供+結(jié)構(gòu)相似藥物供+S分離效能例維生素B6Ch.P（2010）

【鑒別】（2）在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。（四）顯微鑒別法

選擇原則：

1應(yīng)選有專屬性的特征進(jìn)行鑒別。

2多來源的藥材應(yīng)選擇共有的特征進(jìn)行鑒別。用顯微鏡觀察藥材及含藥材粉末的中成藥的組織構(gòu)造、細(xì)胞形狀以及化合物的特征，以鑒別中藥的真?zhèn)?。具有快速、簡便、覆蓋面大等特點(diǎn)。大、小決明子及望江南種皮橫切面詳圖（×400）大決明子小決明子望江南1.種皮角質(zhì)層2.柵狀細(xì)胞表面觀3.柵狀細(xì)胞橫切面觀4.支持細(xì)胞表面觀5.支持細(xì)胞6.營養(yǎng)層薄壁細(xì)胞7.種皮薄壁細(xì)胞8.胚乳細(xì)胞9.子葉碎片大、小決明子及望江南粉末圖（×400）（五）生物學(xué)鑒別法利用微生物或?qū)嶒?yàn)動物進(jìn)行鑒別的方法青霉素鈉滅活例胰島素Ch.P（2005）

【鑒別】（3）取本品適量，加用酸調(diào)節(jié)至pH值為2.5~3.0的水制成每1ml中含5單位的溶液。在20~30℃條件下，取體重20~24g的小鼠5只，按每20g體重皮下注射上述溶液0.25ml，注射后2小時(shí)內(nèi)，至少應(yīng)有4只小鼠發(fā)生驚厥。立即給驚厥的小鼠腹腔注射10%葡萄糖注射液1ml，應(yīng)能使驚厥停止。（六）指紋圖譜與特征圖譜鑒別法菊花提取物的指紋圖譜1－綠原酸2－黃芩苷

3－木犀草素4－芹菜素1－滁菊，產(chǎn)地：滁州市全椒縣，日期：2011.3；2－黃山貢菊，產(chǎn)地：黃山市歙縣，日期：2011.4；3－共有模式圖1滁菊、黃山貢菊及其共有模式指紋圖譜圖10批瓜蔞薤白顆粒與10批瓜蔞藥材乙酸乙酯部位指紋圖譜1-10：瓜蔞薤白顆粒，11-20：瓜蔞圖乙酸乙酯部位共有模式圖譜圖10批瓜蔞薤白顆粒與10批薤白藥材正丁醇部位指紋圖譜1-10：瓜蔞薤白顆粒，11-20：薤白圖正丁醇部位共有模式圖譜四、鑒別試驗(yàn)條件（一）溶液的濃度

溶液的濃度主要指被鑒別物質(zhì)的濃度，其大小影響結(jié)果的判斷。如化學(xué)法中要觀察沉淀、顏色；UV法中λmax,A、（二）溶液的溫度

溫度過高可使產(chǎn)物分解，導(dǎo)致顏色變淺，甚至觀察不到結(jié)果。

（三）溶液的酸堿度

使反應(yīng)物處于活化狀態(tài)、反應(yīng)產(chǎn)物處于穩(wěn)定和易于觀察狀態(tài)。

（四）試驗(yàn)時(shí)間

有機(jī)化合物的化學(xué)反應(yīng)較慢，需要一定的反應(yīng)時(shí)間和條件。

（五