中藥藥理學(xué)第五章中藥藥理的研究方法課件

第五章

中藥藥理的研究方法第五章

中藥藥理的研究方法1

第一節(jié)中藥藥理學(xué)研究的思路與方法一、中藥藥理學(xué)研究的基本知識(shí)1、研究用樣品

復(fù)方、單味藥、有效部位群及有效單體。藥理實(shí)驗(yàn)前必須注意中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化。2、實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物

選擇合適的種類及品系的動(dòng)物是正確評(píng)價(jià)藥物作用的基礎(chǔ)。選用與人體的結(jié)構(gòu)、機(jī)能、代謝、疾病特點(diǎn)相近似的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。小鼠和大鼠—常用動(dòng)物，豚鼠—過(guò)敏試驗(yàn)，家兔—熱源檢查和解熱試驗(yàn)，貓、狗、大鼠—血壓試驗(yàn)，鴿子、狗、貓—催吐試驗(yàn)。

第一節(jié)中藥藥理學(xué)研究的思路與方23、劑量和分組的設(shè)定

主要藥效研究的各種試驗(yàn)至少設(shè)3個(gè)劑量組。能夠測(cè)出ＬＤ５０的受試藥物—1/10-1/5ＬＤ５０；制劑毒性小，測(cè)不出ＬＤ５０

---人用劑量折算動(dòng)物用量。粗略的等效倍數(shù)為1（人）、3-4（狗和猴），5-6（貓、兔），6-8（大鼠、豚鼠），10-12（小鼠）3、劑量和分組的設(shè)定3隨機(jī)、對(duì)照和重復(fù)是科學(xué)實(shí)驗(yàn)基本原則。主要藥效試驗(yàn)常需設(shè)下列對(duì)照組：

（1）正常對(duì)照組，又稱”空白對(duì)照組“或”陰性對(duì)照組“，即除不用被研究的藥物外，對(duì)照組的動(dòng)物要經(jīng)受同樣的處理，如給生理鹽水，當(dāng)藥物中若含有特殊溶媒或基質(zhì)者，對(duì)照組應(yīng)接受相同容量的溶媒或基質(zhì)。

隨機(jī)、對(duì)照和重復(fù)是科學(xué)實(shí)驗(yàn)基本原則。主要藥效試驗(yàn)常需設(shè)下列對(duì)4（2）陽(yáng)性對(duì)照組，是最常用的一種對(duì)照方法，也稱有效對(duì)照或積極對(duì)照。以現(xiàn)行最有效或臨床上最常用的藥物或治療方法為對(duì)照。

陽(yáng)性對(duì)照藥設(shè)置目的是檢查試驗(yàn)體系是否可靠和比較所研究藥物的作用特點(diǎn)。陽(yáng)性藥應(yīng)是國(guó)家《藥典》或部頒標(biāo)準(zhǔn)，或新批準(zhǔn)生產(chǎn)的有批號(hào)的藥物。功效主治、劑型、給藥途徑應(yīng)與受試藥相似，兩者才有可比性。（2）陽(yáng)性對(duì)照組，是最常用的一種對(duì)照方法，也稱有效對(duì)照或積極5（3）模型對(duì)照組除不用藥以外，其他處理與給藥組相同。一個(gè)藥理實(shí)驗(yàn)需設(shè)5－6個(gè)實(shí)驗(yàn)組，10－14只動(dòng)物（大鼠或小鼠）,體重、性別要有隨機(jī)性，需要分批進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意各組動(dòng)物之間的平行操作。主要藥效實(shí)驗(yàn)需要重復(fù)。如抗腫瘤藥物，其驅(qū)邪作用要求重復(fù)三批，降血糖實(shí)驗(yàn)也要求重復(fù)。（3）模型對(duì)照組除不用藥以外，其他處理與給藥組相同。64、藥效學(xué)指標(biāo)的選擇原則：（1）針對(duì)性強(qiáng)，要緊密結(jié)合主要病因病機(jī)，能夠反映臨床治療意義；（2）敏感，對(duì)于病情及證候的任何變化以及藥物的防治作用，能敏感、準(zhǔn)確反映出來(lái)；（3）穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，結(jié)果才可靠。4、藥效學(xué)指標(biāo)的選擇7二、中藥藥理學(xué)研究思路與方法學(xué)進(jìn)展（一）研究思路

1、提高中藥藥理基礎(chǔ)研究水平

以療效為核心，從中藥分子與生命分子的相互作用找切入點(diǎn)，以分子群體的變化來(lái)揭示中藥分子調(diào)解規(guī)律，大力開(kāi)展中藥分子藥理學(xué)研究。二、中藥藥理學(xué)研究思路與方法學(xué)進(jìn)展82、深入進(jìn)行中藥藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制相關(guān)性研究途徑之一：研究單體有效成分，利用各種現(xiàn)代篩選模型和篩選技術(shù)，以其中一種或幾種有效成分作為定性、定量指標(biāo)進(jìn)行研究，明確其與藥效“量效相關(guān)”的有效成分。石菖蒲—中樞神經(jīng)系統(tǒng)—血腦屏障—欖香素、細(xì)辛醚2、深入進(jìn)行中藥藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制相關(guān)性研究9

途徑之二：以單位中藥或小復(fù)方中藥為研究對(duì)象，采用各種提取分離及分析技術(shù)，以選定有效成分為指標(biāo)，進(jìn)行研究。大承氣湯—游離和結(jié)合蒽醌—傳統(tǒng)煎法。中藥中多種藥用部位或一種有效部位中的多種藥用成分，同樣可以利用各種現(xiàn)代篩選模型和技術(shù)，以一種藥理作用為主要因素，研究部位間、成分間或部位與成分之間的相互促進(jìn)、相互抑制的協(xié)同關(guān)系，初步闡明現(xiàn)代中藥不同于西藥而發(fā)揮綜合治療作用的機(jī)制。途徑之二：以單位中藥或小復(fù)方中藥為研究對(duì)象，采用各10

3、加強(qiáng)與中藥功效相關(guān)的系統(tǒng)藥理作用研究

綜合運(yùn)用整體動(dòng)物疾病模型、病證結(jié)合模型以及利用多種生物學(xué)等方法建立的細(xì)胞模型進(jìn)行中藥功效相關(guān)的系統(tǒng)藥理作用研究，對(duì)全面揭示中藥作用的實(shí)質(zhì)具有重要意義。3、加強(qiáng)與中藥功效相關(guān)的系統(tǒng)藥理作用研究11（二）中藥藥理研究方法學(xué)進(jìn)展

1、中藥血清藥理學(xué)、腦脊液藥理學(xué)

中藥或中藥復(fù)方經(jīng)口給動(dòng)物灌服一定時(shí)間后采集動(dòng)物血清，分離血液，用含有藥物成分的血清進(jìn)行體外試驗(yàn)的一種方法。（二）中藥藥理研究方法學(xué)進(jìn)展122、分子生物學(xué)與生物芯片技術(shù)

基因芯片技術(shù)（核酸雜交原理）：待分析樣品通過(guò)與芯片中已知堿基序列的片段互補(bǔ)雜交，從而確定樣品中的核算序列和性質(zhì)，對(duì)基因表達(dá)的量及其特性進(jìn)行分析。可將中藥作用的所有靶基因全部顯示出來(lái)，通過(guò)基因表達(dá)譜和表達(dá)產(chǎn)物的差比性分析，揭示中藥復(fù)方的作用靶點(diǎn)、作用環(huán)節(jié)和作用過(guò)程。2、分子生物學(xué)與生物芯片技術(shù)13

3、現(xiàn)代智能色譜、波譜技術(shù)和中藥藥理研究結(jié)合

中藥化學(xué)、化學(xué)分析及中藥藥理研究結(jié)合。

高效液相色譜-質(zhì)譜法、高效液相色譜-電噴霧離子化質(zhì)譜法、高效液相色譜-核磁共振法、高效毛細(xì)血管電泳-質(zhì)譜法及分子生物色譜技術(shù)，提高中藥復(fù)方活性物質(zhì)的篩選率。3、現(xiàn)代智能色譜、波譜技術(shù)和中藥藥理研究結(jié)合14

第二節(jié)中藥復(fù)方藥理學(xué)研究一、中藥復(fù)方配伍研究方法（一）

拆方研究有助于中藥復(fù)方配伍合理性的闡明

1、單味研究法

十全大補(bǔ)湯—提高免疫力，拆方實(shí)驗(yàn)—地黃

2、藥對(duì)研究法

六味地黃湯（五個(gè)藥對(duì)）：一補(bǔ)一瀉（地黃+澤瀉、山茱萸+丹皮、山藥+茯苓）；三補(bǔ)三瀉（地黃+山茱萸+山藥、澤瀉+丹皮+茯苓）。

第二節(jié)中藥復(fù)方153、藥物組間關(guān)系研究法

四物湯—補(bǔ)血，四君子湯—補(bǔ)氣，二者合用，四君子湯抗貧血作用增強(qiáng)。補(bǔ)氣藥可增強(qiáng)補(bǔ)血藥的補(bǔ)血效能，中醫(yī)“補(bǔ)氣生血”理論。

4、撤藥分析法

黃芩湯（黃芩、芍藥、甘草、大棗）

5、聚類分析法

以性味歸經(jīng)為特征，數(shù)學(xué)模型，統(tǒng)計(jì)分析。半夏瀉心湯。

3、藥物組間關(guān)系研究法166、正交設(shè)計(jì)法

正交設(shè)計(jì)表將一個(gè)方劑中的藥物（因素）和劑量（水平）按一定規(guī)律設(shè)置。

7、均勻設(shè)計(jì)法

均勻設(shè)計(jì)表。

6、正交設(shè)計(jì)法17（二）與中醫(yī)證候研究結(jié)合探索中藥復(fù)方藥效的優(yōu)勢(shì)

四君子湯—脾虛型便秘及腹瀉（臨床）胃腸運(yùn)動(dòng)—雙向調(diào)節(jié)作用（三）與中藥復(fù)方組合化學(xué)結(jié)合開(kāi)展藥理學(xué)研究

以中藥復(fù)方為天然組合化學(xué)庫(kù)，在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下確定能反映該方劑主治病證的藥理學(xué)指標(biāo)，通過(guò)組分或單體成分的組合篩選，找出其活性最強(qiáng)的組分構(gòu)件，確定方劑“有用分子的構(gòu)成”。（二）與中醫(yī)證候研究結(jié)合探索中藥復(fù)方藥效的優(yōu)勢(shì)18

二、復(fù)方藥效系統(tǒng)評(píng)價(jià)研究1、與臨床研究相結(jié)合進(jìn)行復(fù)方整體藥效的評(píng)價(jià)

從整體功效入手，與臨床研究相結(jié)合，探討中藥復(fù)方多途徑、多靶點(diǎn)的作用環(huán)節(jié)。2、合理利用動(dòng)物模型，客觀揭示中藥復(fù)方的作用機(jī)制

中醫(yī)的“證”涉及多系統(tǒng)、多臟器、多種組織的病變，中藥復(fù)方是對(duì)證治療，和化學(xué)藥物治病原理不同。但目前大多借鑒西醫(yī)學(xué)現(xiàn)有的動(dòng)物模型，其特色及優(yōu)勢(shì)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中難以得到體現(xiàn)和發(fā)揮。

19證的動(dòng)物模型的缺陷動(dòng)物模型少研究難度很大認(rèn)同度差

人和動(dòng)物在生理生化機(jī)能等方面盡管有許多相同之處，在形體、語(yǔ)言、反應(yīng)等有很大差別。

證的動(dòng)物模型的缺陷動(dòng)物模型少20甲狀腺激素處理---陰虛模型動(dòng)物（體重減輕、體溫升高、心率加快，飲水與耗氧增加）；皮下注射腎上腺素合并冰水浸泡---急性血瘀（全血黏度和血漿黏度增高、紅細(xì)胞聚集性增加、紅細(xì)胞變形減弱）。大黃---脾虛模型。甲狀腺激素處理--