第28章-臨床生化專用自動(dòng)分析課件

溫州醫(yī)學(xué)院陳筱菲第二十八章

臨床生化專用自動(dòng)化分析第1頁(yè)第2頁(yè)

濁度自動(dòng)化分析電解質(zhì)自動(dòng)化分析電解質(zhì)（自動(dòng)化）分析血?dú)猓ㄗ詣?dòng)化）分析小結(jié)主要內(nèi)容2以上分析技術(shù)均有專用分析儀濁度自動(dòng)化分析儀：免疫比濁法，測(cè)定蛋白質(zhì)抗原和抗體反應(yīng)產(chǎn)生的細(xì)小混濁，生化檢驗(yàn)指標(biāo)包括血清PA、AAT、Hp、Cp、CRP、IgG等，及某些尿液蛋白等。電解質(zhì)自動(dòng)化分析儀：利用電化學(xué)原理中的離子選擇電極法，測(cè)定K+、Na+、Cl-、Ca2+等。血?dú)夥治鰞x：利用電化學(xué)原理，測(cè)定血液氣體和pH，包括PO2、PCO2、pH，再計(jì)算出其他血?dú)夂退釅A指標(biāo)。3教學(xué)目標(biāo)與要求

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熟悉濁度、電解質(zhì)和血?dú)鉁y(cè)定的校準(zhǔn)要求

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了解電解質(zhì)測(cè)定和血?dú)鉁y(cè)定各電極的成分

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掌握濁度、電解質(zhì)、血?dú)猓ㄗ詣?dòng)）分析儀檢測(cè)的是什么常規(guī)生化指標(biāo)；電解質(zhì)和血?dú)夥治鰳悠芬蟆?第5頁(yè)第一節(jié)濁度自動(dòng)化分析

濁度（turbidity）：是指溶液中懸浮物對(duì)光線透過(guò)時(shí)所發(fā)生的阻礙程度。濁度分析（Turbidityanalysis）：通過(guò)檢測(cè)光線的反射或折射強(qiáng)度，或檢測(cè)透過(guò)光強(qiáng)度來(lái)對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量分析。5第6頁(yè)（一）濁度分析的基礎(chǔ)理論粒子對(duì)光具有反射、折射、散射和吸收等作用。1.膠體溶液2.光透射理論朗伯-比爾（Lambert-Beer）定律：3.光散射理論雷萊（Rayleigh）公式：散射光強(qiáng)度一、濁度分析的基本原理和方法6第7頁(yè)

一定條件下，抗原與抗體在液相中特異結(jié)合，形成有一定大小的抗原-抗體免疫復(fù)合物顆粒，反應(yīng)液出現(xiàn)混濁。測(cè)量透射光或散射光信號(hào)強(qiáng)弱，可推算出被測(cè)物的量。4.免疫濁度分析臨床濁度分析中基本都是7

第8頁(yè)（二）濁度分析的基本方法5o～90o角：0o角：8

第9頁(yè)濁度法的分類2.終點(diǎn)散射濁度法檢測(cè)反應(yīng)終點(diǎn)與起始點(diǎn)之間信號(hào)變化的方法。3.速率散射濁度法在抗原與抗體反應(yīng)的最高峰測(cè)定其復(fù)合物形成的量。速率指抗原抗體結(jié)合反應(yīng)過(guò)程中，單位時(shí)間內(nèi)兩者結(jié)合成復(fù)合物的量。

1.透射濁度法9第10頁(yè)由大小適中、均勻一致的膠乳顆粒吸附或交聯(lián)抗體，遇到相應(yīng)抗原時(shí)發(fā)生聚集。敏感度較高。單個(gè)膠乳顆粒大小在入射光波長(zhǎng)之內(nèi)，光線可透過(guò)。當(dāng)兩個(gè)或更多膠乳顆粒凝聚時(shí)，透過(guò)光減少，光減少的程度與膠乳凝集量成正比。粒子強(qiáng)化免疫濁度法10

第11頁(yè)（一）濁度分析儀分類1.分光光度計(jì)可做透射比濁法。2.自動(dòng)生化分析儀可做透射比濁法。3.散射濁度分析儀能做散射比濁法，臨床上又稱為特定蛋白分析儀。二、濁度分析儀的分類和基本結(jié)構(gòu)11

第12頁(yè)（二）特定蛋白分析儀的結(jié)構(gòu)分析系統(tǒng)：類似于自動(dòng)生化分析儀（較簡(jiǎn)單）用于加樣、稀釋、保溫和測(cè)試等包括散射測(cè)濁儀、加液系統(tǒng)、試劑轉(zhuǎn)盤、樣品轉(zhuǎn)盤等計(jì)算機(jī)系統(tǒng)用于輸入病人數(shù)據(jù)、選擇程序菜單、計(jì)算參考曲線和儲(chǔ)存測(cè)試結(jié)果12

（一）一般操作步驟

1．開(kāi)機(jī)前準(zhǔn)備2．開(kāi)機(jī)3．校準(zhǔn)：采用多點(diǎn)校準(zhǔn)的方式進(jìn)行校準(zhǔn)。4.測(cè)定質(zhì)控5.測(cè)定樣品

三、特定蛋白分析儀的使用13

第14頁(yè)1.日保養(yǎng)2.周保養(yǎng)3.月保養(yǎng)4.半年保養(yǎng)（二）常規(guī)保養(yǎng)14

第15頁(yè)1.抗原過(guò)剩校正免疫濁度分析的基本要求：始終保持反應(yīng)體系中抗體適量過(guò)剩?？乖^(guò)剩的檢測(cè)方法：①連續(xù)監(jiān)測(cè)抗原抗體反應(yīng)曲線是否呈現(xiàn)異常。②反應(yīng)體系中追加抗體，濁度增大提示抗原過(guò)剩。③待測(cè)標(biāo)本用兩種稀釋度測(cè)定，濃度高的樣本濁度反而降低則提示抗原過(guò)剩。（三）注意事項(xiàng)15第16頁(yè)（二）減少偽濁度偽濁度：由待測(cè)抗原抗體免疫復(fù)合物產(chǎn)生的濁度外，其它可引起透射光或散射光發(fā)生變化的信號(hào)。減少產(chǎn)生偽濁度的方法：1.標(biāo)本：采用新鮮、合格標(biāo)本。脂濁標(biāo)本影響濁度。2.檢測(cè)體系：保持比色杯和稀釋杯清潔。3.試劑：使用合格的抗體試劑。4.增濁劑濃度：嚴(yán)格控制。16第17頁(yè)特定蛋白臨床常規(guī)項(xiàng)目四、特定蛋白濁度分析的臨床應(yīng)用17

第18頁(yè)第二節(jié)電解質(zhì)自動(dòng)化分析電解質(zhì)在溶液中能解離成帶電離子而具有導(dǎo)電性的一類物質(zhì)主要指體液中最常測(cè)定的Na+、K+、Cl-、Ca2+、Mg2+、HCO3-和無(wú)機(jī)磷等。電解質(zhì)分析儀（electrolyteanalyzer）離子選擇電極法（ISE）測(cè)量溶液中離子濃度的儀器。Na+、K+、Cl-、Ca2+常規(guī)采用ISE法18第19頁(yè)（一）電解質(zhì)分析儀的原理離子選擇性電極（ISE）由特殊敏感膜制成，對(duì)溶液中某種特定離子具有選擇性響應(yīng)的電化學(xué)傳感器。通常由電極管、內(nèi)電極、電極內(nèi)充溶液和電極膜（或稱敏感膜）四個(gè)部分組成。一、電解質(zhì)分析儀的原理和方法19第20頁(yè)電極電位產(chǎn)生大多數(shù)電極膜電位的產(chǎn)生是基于膜材料與溶液界面發(fā)生的離子交換反應(yīng)。電極電位與溶液中特定離子活度的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系Nernst方程式：

±：陰離子時(shí)為－，陽(yáng)離子時(shí)為＋

20第21頁(yè)電極電位測(cè)量ISE的EISE值的測(cè)定將ISE與參比電極共同浸入待測(cè)樣品中組成一個(gè)原電池，通過(guò)測(cè)量E電池來(lái)測(cè)定EISE值。在一定條件下，原電池的電動(dòng)勢(shì)與被測(cè)離子活度的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系。21SampleSolution參比電極HalfCell測(cè)量電極HalfCell測(cè)量電動(dòng)勢(shì)EMF離子選擇膜

參比液滲透膜參比電極電極內(nèi)液電極芯電極芯22第23頁(yè)濕式電解質(zhì)分析儀結(jié)構(gòu)框圖

二、電解質(zhì)分析儀的基本結(jié)構(gòu)和分類（一）電解質(zhì)分析儀的基本結(jié)構(gòu)組成ISE組液路系統(tǒng)電路系統(tǒng)程序控制模塊顯示操作系統(tǒng)23測(cè)量室,電極,電極支撐ISEBG24第25頁(yè)電極

液路系統(tǒng)由標(biāo)本盤、溶液瓶、驅(qū)動(dòng)電機(jī)、采樣針、電極管路系統(tǒng)、蠕動(dòng)泵、三通閥、管道等組成。Na+

電壓測(cè)定法(Na+選擇玻璃)

K+電壓測(cè)定法(生物離子選擇膜)

Cl-電壓測(cè)定法(PVC離子選擇膜)

Ca++

電壓測(cè)定法(PVC離子選擇膜)25第26頁(yè)（二）電解質(zhì)分析儀的分類1.按自動(dòng)化程度分類分為半自動(dòng)和全自動(dòng)電解質(zhì)分析儀。2.按工作方式分類分為濕式和干式電解質(zhì)分析儀。3.按儀器的功能分類可分為電解質(zhì)分析儀、含電解質(zhì)分析的血?dú)夥治鰞x、含電解質(zhì)分析的自動(dòng)生化分析儀等。26

（一）一般操作步驟

1．開(kāi)機(jī)前準(zhǔn)備2．開(kāi)機(jī)3．校準(zhǔn)：應(yīng)使用兩水平的校準(zhǔn)液

4.測(cè)定質(zhì)控三、電解質(zhì)分析儀的使用27第28頁(yè)（1）樣品要求：若使用抗凝血漿，不能采用含鈉鉀的抗凝劑建議使用肝素或肝素鋰

血漿鉀比血清低0.2mmol/L～0.5mmol/L因血液凝固時(shí)血小板破裂會(huì)釋放出一部分K＋。應(yīng)避免溶血，否則K＋由細(xì)胞釋出增多血清或血漿樣品應(yīng)及時(shí)分離，久置血細(xì)胞中鉀釋放。

5.樣品分析28

第29頁(yè)*（2）樣品分析方法直接法指樣本不經(jīng)稀釋直接由電極測(cè)量離子活度；優(yōu)點(diǎn)是可采用全血測(cè)定，它迅速方便，結(jié)果準(zhǔn)確，不會(huì)因血清中水體積所占比例改變而影響結(jié)果。29

第30頁(yè)間接法：多用指樣本經(jīng)一定離子強(qiáng)度緩沖溶液稀釋后測(cè)量?jī)?yōu)點(diǎn)：樣品用量少，電極使用壽命長(zhǎng)缺點(diǎn)：高脂樣品可造成假性低鈉血癥因脂蛋白分子體積大，稀釋后脂質(zhì)占據(jù)體積比減小。而細(xì)胞外液以鈉和氯為主，因此表現(xiàn)為假性低鈉血癥和假性低氯血癥，鉀離子影響小。30

第31頁(yè)1.日保養(yǎng)2.周保養(yǎng)3.月保養(yǎng)6.分析后保養(yǎng)31

第32頁(yè)血?dú)夥治鰞x

(bloodgasanalyzer)應(yīng)用電化學(xué)分析技術(shù)和原理，采用電極對(duì)血液中的pH值、PCO2和PO2進(jìn)行測(cè)定的分析儀器。第三節(jié)血?dú)庾詣?dòng)化分析32一、血?dú)夥治鲭姌OpH電壓測(cè)定法(H+

離子選擇玻璃)

pCO2電壓測(cè)定法(CO2樹(shù)脂選擇膜)

pO2

電流測(cè)定法(極化電極法，O2選擇膜）33氧電極34第35頁(yè)由電極系統(tǒng)、管路系統(tǒng)和電路系統(tǒng)三大部分組成。二、血?dú)夥治鰞x的基本結(jié)構(gòu)35第36頁(yè)管路系統(tǒng)1.氣路系統(tǒng)提供PO2和PCO2電極定標(biāo)時(shí)所需的兩種標(biāo)準(zhǔn)氣體。高標(biāo)氣10%CO2(不含O2)；低標(biāo)氣5%CO2和20%O2

2.液路系統(tǒng)（1）為pH電極定標(biāo)提供兩種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液。

pH6.841和7.383（2）管道沖洗液36液體定標(biāo)系統(tǒng) Roche專利的液體定標(biāo)系統(tǒng)用于標(biāo)定以下參數(shù)：

血?dú)? pH,PCO2

電解質(zhì): Na+,K+,Ca++,Cl-

PO2:用儀器內(nèi)部的氧零點(diǎn)液和室內(nèi)空氣定標(biāo)20%O2

Cobasb221

–定標(biāo)原理37

SolutionA酸性液體= H+ CaCl2 = Ca2++2Cl-

Solution

B

Na2CO3(NaHCO3)

= Na+

+HCO3-+CO32-

NaCl = Na++Cl-

KCl = K++Cl-Cobasb221

–定標(biāo)原理H+,CO2,Na+,K+,Ca2+,Cl-H++HCO3-

=H2O+CO2A、B混合比例1:2和3:238

三、血?dú)夥治龅闹笜?biāo)（一）pH：血液中[H+]濃度的負(fù)對(duì)數(shù)。正常人7.35-7.45（二）PCO2：正常人PO2

80-100mmHg（三）PO2：正常人PCO2

35-45mmHg（四）氧飽和度（SO2）：指血液在一定的PO2下，氧合血紅蛋白（HbO2）占全部Hb的百分比。39

（五）實(shí)際碳酸氫鹽（AB）與標(biāo)準(zhǔn)碳酸氫鹽（SB）AB：血漿中HCO3－的實(shí)際濃度，代謝性酸堿中毒的重要指標(biāo)，也受呼吸因素影響。

AB=0.0031×pCO2×10(pH－6.1)SB：37℃時(shí)用PCO2為40mmHg及PO2為100mmHg的混合氣體平衡后測(cè)定的血漿HCO3－濃度，反映代謝性酸堿中毒。

SB=[40×10（pH－7.608）]

（六）緩沖堿(BB)：具有緩沖作用的陰離子總和包括HCO3－、Hb、血漿蛋白及少量有機(jī)酸鹽和無(wú)機(jī)磷酸鹽。

BB=BE+41.7+0.42×Hb40

（七）堿剩余（BE）在37℃和PCO2為40mmHg時(shí)，將1L全血pH調(diào)整到7.40所需強(qiáng)酸或強(qiáng)堿的mmol數(shù)，是代謝性酸堿中毒的客觀指標(biāo)

BE=HCO3--24.8+16.2×(pH–7.4)（八）陰離子隙（AG）未測(cè)定陰離子（UA）與未測(cè)定陽(yáng)離子（UC）之差。AG=（UA-UC）=NA+-（Cl-+HCO2-）（九）肺泡-動(dòng)脈氧分壓差（A-aDO2）

是判斷肺換氣功能的一個(gè)指標(biāo)

A-aDO2=[FiO2×(BP–47)－

PCO2]－PO2