地中海貧血相關(guān)基因檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

附件3地中海貧血相關(guān)基因檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)地中海貧血相關(guān)基因檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。本指導(dǎo)原則是對(duì)地中海貧血相關(guān)基因檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)也不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法也可以采用但需要提供詳細(xì)的研究和驗(yàn)證資料相關(guān)人員應(yīng)在遵循法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。一、適用范圍是由于珠蛋白基因發(fā)生突變（包括點(diǎn)突變和缺失等，致使珠蛋白肽—1—鏈合成減少或完全不能合成而導(dǎo)致的一組單基因遺傳性溶血性疾病輕者可無(wú)臨床表現(xiàn)重者以進(jìn)行性溶血性貧血為主要特征。根據(jù)珠蛋白肽鏈合成受到抑制的類型地貧分為α-β-和γ-地貧等，臨床上最常見(jiàn)的是α-和β-地貧。地貧主要分布在地中海沿岸東南亞和少數(shù)非洲地區(qū)具有明顯的種族特性和地域分布差危害最大的遺傳病之一尤以南和廣東的地貧基因人群攜帶率可達(dá)10%以上，廣西更是達(dá)到了20%以上。α-地貧主要是由于α-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起α珠蛋白基因簇位于16p13.3，包括胎兒期和成人期表達(dá)的2個(gè)基因α2和α1基的列序?yàn)?’-α2α1-3’可將α地貧分為3類（1缺失型α+地（-α/缺失1個(gè)α基因；（2型α0（--/2個(gè)α基因同時(shí)缺失（3型α+（αTα/或αT/，1個(gè)α1或α2基因發(fā)生點(diǎn)突變或少數(shù)幾個(gè)堿基的缺失。中國(guó)現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)至少19種α-珠蛋白基因大片段缺失和38種α-珠蛋白基中6種α-珠蛋白基因的突變SEA/α3.7/α4.2/αS/HBA2c.369C>GαS/HBA2：c.77TCαCSα（HBA2c.427T>C占患病人群總數(shù)的98%。α地貧基因型和臨床分型的關(guān)系已經(jīng)基本闡明α-地貧的表型嚴(yán)重程度隨著功能性α-珠蛋白基因的減少而加重（11個(gè)α-基因缺失或點(diǎn)突變（-α/αα或ααT/αα或αTα/αα，稱為靜止型α-地貧，通常不貧血，血液學(xué)表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素（2）2個(gè)α-—2—基因缺失或復(fù)合-α基因點(diǎn)突變，或點(diǎn)突變，其基因型為-/αα或α/-α或-α/ααT或αTα/-α或αTα/T，稱為輕型α現(xiàn)為不貧血或輕度貧血，血液學(xué)檢查有小細(xì)胞低色素特征（3）3個(gè)α基因缺失或復(fù)合α基因點(diǎn)突變，基因型為--/-α或--/αTα，稱為中間型α-稱HbH基為αTααTα的病例（如αCSα/αCSα、αQSα/Sα和αCSα/αQSα）也表現(xiàn)為HbH病。通常，-/αTα的非缺失型HbH病較單純?nèi)笔虷bH（--/-α的臨床表現(xiàn)更為嚴(yán)重特別是基因型為--/αCSα或/QSα的HbH病患者，貧血程度較為嚴(yán)重（4）4個(gè)α-基因缺失其基因型為--/-稱為重型α-地貧又稱bs胎兒水腫綜合征，此類個(gè)體一般無(wú)法存活到出生或分娩后半小時(shí)內(nèi)死亡。β-地貧是由于β-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起，以點(diǎn)突變?yōu)橹?，少?shù)為缺失型。β-珠蛋白基因簇位于1括2個(gè)成人期表達(dá)基因（β和δ，基因的排列順序?yàn)?’-δ-β-3’。根據(jù)β-將β-地貧分為3類（1β0地貧β-珠蛋白鏈完全不能合成，其所在的等位基因稱為β0地貧等位基因（2β+地貧β-珠蛋白鏈合成減少，其所在的等位基因稱為β+地貧等位基因（3β++型β-地貧β-珠蛋白鏈合成輕微減少中國(guó)已至少報(bào)道84種β-珠蛋白基因點(diǎn)突變和種β-珠蛋白基因缺失。其中，6種點(diǎn)突變：B：c.126_129delCTTT，HBB：c.52A>T，HBB：c.-78A>G，HBB：c.79G>A，HBB：c.316-197C>T和HBB：占了—3—全部突變類型的90%以上。β地貧的臨床表型可分為4種（1型β-型為β++/N血液學(xué)表型正常或臨界一般只能通過(guò)分子診斷識(shí)別；（2）輕型β-地貧，基因型為β0/βN或β+/βN，臨床表現(xiàn)為小細(xì)胞和值升高（3）中間型β-地貧，基因型為β+/β+或β+/β0多于幼兒期出現(xiàn)中度貧血（4型β-為β+β0或β0β0常常于嬰兒期（3-12月齡）發(fā)病。如不治療，患兒多于5歲前死亡。此外，中間型的分子基礎(chǔ)較為復(fù)雜，顯性β-地貧突變的雜合子（βD/N，合并α-地貧突變的β-地貧突變純合子（β0/β0，或合并α-珠蛋白三聯(lián)體的β-地貧突變雜合子（β0/βN或β+/N，也會(huì)顯示中間型的表型。2018年發(fā)布的《重型β-地中海貧血的診斷和治療指南》明確規(guī)定：對(duì)于重型β-地中海貧血的診斷，有條件者均應(yīng)進(jìn)行基因診斷，基因型為純合子或雙重雜合子為確診本病的指標(biāo)。2018年發(fā)布《兒童非輸血依賴型地中海貧血的診治和管理專家共識(shí)也明確規(guī)定地貧基因檢測(cè)為非輸血依賴型地貧的診斷依據(jù)之一。另外國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的相關(guān)文件要求為減少重型地貧患兒出生，在我國(guó)地貧高發(fā)省份實(shí)施地貧防控試點(diǎn)項(xiàng)目。主要流程包括（1對(duì)新婚夫婦和計(jì)劃懷孕夫婦在懷孕前或孕期進(jìn)行血常規(guī)初篩（2對(duì)夫婦一方或雙方血常規(guī)檢查結(jié)果陽(yáng)性的—4—夫婦進(jìn)行血紅蛋白分析復(fù)篩（3對(duì)血紅蛋白分析復(fù)篩結(jié)果均為陽(yáng)性的夫婦，取其抗凝靜脈全血進(jìn)行相應(yīng)的α+地貧基因檢測(cè)；（4）綜合夫婦雙方病史詢問(wèn)、地貧篩查和基因檢測(cè)結(jié)果，判定為高風(fēng)險(xiǎn)夫婦對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)夫婦進(jìn)行追蹤及時(shí)了解受檢婦女懷孕情況指導(dǎo)女方在懷孕后適宜時(shí)期接受產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷的對(duì)羊水和臍帶血檢測(cè)項(xiàng)目為相應(yīng)的地貧基因檢測(cè)。綜上結(jié)合該類產(chǎn)品臨床使用的實(shí)際情況本指導(dǎo)原則的預(yù)期用途可為用于體外定性檢測(cè)人外周靜脈全血或胎兒羊水等樣本中基因組DNA的α-和/或β-地貧相關(guān)基因，用于α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷，地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的評(píng)估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷等。結(jié)合該類產(chǎn)品在中國(guó)注冊(cè)的實(shí)際情況以及當(dāng)前的認(rèn)知本指導(dǎo)原則僅對(duì)“α-和/或β-地貧的輔助診（遺傳診斷”預(yù)期用途的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行了詳細(xì)闡述針對(duì)其他預(yù)期用途本指導(dǎo)原則僅對(duì)部分內(nèi)容進(jìn)行了闡述申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容進(jìn)行補(bǔ)充并做出相應(yīng)評(píng)價(jià)。本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于PCR探針?lè)ǚ椒ń⒌?，?duì)于其他分子生物學(xué)檢測(cè)技（如PCR-反向點(diǎn)雜交法和gap-PCR法等可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請(qǐng)人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)不適用部分進(jìn)行或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證但需闡述不適用的理由并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更—5—的產(chǎn)品。二、注冊(cè)申報(bào)資料要求（一）綜述資料綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途產(chǎn)品描述有關(guān)生物安全性的說(shuō)明研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗(yàn)原理檢測(cè)的突變類型以及臨床意義等方面詳細(xì)說(shuō)明申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（原總局令第5號(hào)，以下簡(jiǎn)稱《辦法）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告（原總局公告2014年第44號(hào)，以下簡(jiǎn)稱《44號(hào)公告》的要求。（二）主要原材料的研究資料主要原材料研究資料包括主要反應(yīng)成分、對(duì)照品（質(zhì)控品）及企業(yè)參考品的研究資料。1.化申提。1.1核酸提取/純化試（如有的主要組成原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。1.2引物、探針—6—提供引物探針核酸序列模板核酸序列及兩者的對(duì)應(yīng)情況建議設(shè)計(jì)多套引物探針以供篩選，針對(duì)待測(cè)位點(diǎn)的特異性等進(jìn)行評(píng)價(jià)，選擇最佳設(shè)計(jì)，并提交詳細(xì)的篩選研究數(shù)據(jù)。申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)選定的引物探針原材料進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)一般包括：分子量、純度（HPLC等、濃度、探針熒光標(biāo)記基團(tuán)的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)以及功能性試驗(yàn)等并依據(jù)評(píng)價(jià)結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。1.3酶酶包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)各種酶的活性進(jìn)行驗(yàn)證提交功能性試驗(yàn)資料，并確定酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。DNA聚合酶應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性UDG/UNG核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。1.4s包括、dCTP、dGTP、dTTP或dUT；應(yīng)提交對(duì)其純并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。2.對(duì)照品（質(zhì)控品）試劑盒的質(zhì)控體系通過(guò)設(shè)置各種試劑盒對(duì)照（質(zhì)控品來(lái)實(shí)現(xiàn)陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)至少包括代表性的突變位點(diǎn)和突變類型陰性對(duì)照可以是含有野生型序列的核酸溶液空白對(duì)照為不含核酸的—7—溶液。如該類產(chǎn)品所采用的方法學(xué)和檢驗(yàn)原理顯示無(wú)論檢測(cè)何種樣本（野生型、雜合突變和純合突變，其反應(yīng)體系均可報(bào)出核酸序列結(jié)果，均可對(duì)管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，則無(wú)需另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)；否則，試劑盒應(yīng)另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)。對(duì)照品可采用人基因組DNA、細(xì)胞系或質(zhì)粒等?？瞻讓?duì)照應(yīng)參與樣本核酸的平行提取申請(qǐng)人應(yīng)提供對(duì)照品原料選擇制備定值過(guò)程等的詳細(xì)研究數(shù)據(jù)并對(duì)其檢測(cè)結(jié)果做出明確的范圍要求。3.企業(yè)參考品企業(yè)參考品主要包括陽(yáng)性參考品陰性參考品檢測(cè)限參考品和精密度參考品等申請(qǐng)人應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料選擇制備方法、基因序列確認(rèn)及檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的詳細(xì)研究資料等。3.1陽(yáng)臨則樣本類型應(yīng)與待測(cè)樣本一致應(yīng)至少包含所有檢測(cè)位點(diǎn)的雜合型樣本同時(shí)盡量納入純合突變型樣本對(duì)于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。3.2陰以及易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的同源序列樣本同時(shí)應(yīng)盡量包含檢測(cè)范圍外其他檢測(cè)位點(diǎn)的樣本等。3.3檢測(cè)限參考品可選擇最低檢測(cè)限濃度（例如：95%檢出率水平）或接近最低檢測(cè)限濃度（例如100%檢出率水平）的臨床樣本或其核酸溶液，至少包含所有檢測(cè)位點(diǎn)的雜合型樣本?！?—3.4精密度參考品應(yīng)至少包括低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸溶液應(yīng)至少包括代表性的突變位點(diǎn)和突變類型且在每一反應(yīng)體系均有分布。目前該類產(chǎn)品已有國(guó)家參考品對(duì)于申報(bào)產(chǎn)品所聲稱的檢測(cè)位點(diǎn)，企業(yè)參考品的要求應(yīng)不低于國(guó)家參考品。（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料主要生產(chǎn)工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度dNTPs濃度緩沖液離子濃度等分裝和凍（如有、生產(chǎn)過(guò)程應(yīng)對(duì)關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說(shuō)明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。反應(yīng)體系研究指反應(yīng)條件的選擇確定過(guò)程，包括樣本采集、預(yù)處（如有樣本用量試劑用量核酸提取純化步驟PCRC值）等的確定。不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如有差異應(yīng)分別提交。（四）分析性能評(píng)估資料申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)下述各項(xiàng)分析性能提交詳細(xì)的評(píng)估資料包括試驗(yàn)地點(diǎn)適用儀器試劑規(guī)格批號(hào)試驗(yàn)方法試驗(yàn)樣（類型、來(lái)源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認(rèn)等、可接受標(biāo)分析性能評(píng)估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考國(guó)內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則。每項(xiàng)性能評(píng)估應(yīng)盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本，對(duì)于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系等。1.核酸提取/純化性能（如有）—9—在進(jìn)行靶核酸檢測(cè)前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂崽崛?純化步驟。該步驟應(yīng)最大量分離和純化目的核酸并盡可能去除PCR抑制物。無(wú)論檢測(cè)試劑是否含有核酸提取/純化組分，申請(qǐng)人都應(yīng)對(duì)配套使用的核酸提取/純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度等做充分的驗(yàn)證，并評(píng)價(jià)該方法能否滿足該類產(chǎn)品的要求。2.檢測(cè)準(zhǔn)確性建議采用若干份臨床樣本驗(yàn)證該類產(chǎn)品的檢測(cè)準(zhǔn)確性樣本類型與說(shuō)明書聲稱的樣本類型一致樣本應(yīng)涵蓋野生型所有檢測(cè)位點(diǎn)的雜合突變型同時(shí)盡量納入純合突變型對(duì)于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。3.最低檢測(cè)限該類產(chǎn)品的最低檢測(cè)限可定義為在滿足一定的檢測(cè)準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠檢出目標(biāo)序列的最低人基因組DNA的濃度可采用梯度濃度的人基因組DNA樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，95%下的最低人基因組DNA濃度。檢測(cè)限評(píng)價(jià)建議采用臨床樣本或細(xì)胞系并至少包含所有檢測(cè)位點(diǎn)的雜合突變型。應(yīng)明確臨床樣本或細(xì)胞系與人基因組DNA濃度的對(duì)應(yīng)關(guān)系。4.分析特異性4.1應(yīng)針對(duì)同源序列或檢測(cè)范圍外基因和位點(diǎn)進(jìn)行交叉反提交詳細(xì)的驗(yàn)證資料。4.2應(yīng)針對(duì)可能的內(nèi)源和外源性干擾物進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究?！?—細(xì)胞的干擾等外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑和常用藥物等。干擾試驗(yàn)可通過(guò)在臨床樣本中人工添加干擾物質(zhì)的方式評(píng)價(jià)干擾物質(zhì)對(duì)目標(biāo)序列檢測(cè)的影響也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本進(jìn)行干擾試驗(yàn)評(píng)價(jià)建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃（“最差條”條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)如有干擾，應(yīng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。5.精密度精密度評(píng)價(jià)應(yīng)采用臨床樣本進(jìn)行試驗(yàn)試驗(yàn)操作完全按照說(shuō)取/體系進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)，并至少覆蓋代表性的突變位點(diǎn)和突變類型。精密度評(píng)價(jià)需滿足如下要求：5.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要因素進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測(cè)試和試劑批次等。5.2設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期對(duì)批內(nèi)/批間日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)如有條件申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間重復(fù)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。5.3用于精密度評(píng)價(jià)的臨床樣本至少設(shè)置低濃度和中/高濃度水平。5.4精密度指標(biāo)可設(shè)置為CV（如有申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)精密度—1—指標(biāo)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。（五）陽(yáng)性判斷值確定資料建議納入一定數(shù)量的臨床樣本應(yīng)包括所有檢測(cè)位點(diǎn)的各種基因型（野生型、雜合突變型，同時(shí)盡量納入純合突變型，采用受試者工作特（ROC曲線或其他合理方法確定陽(yáng)性判斷值。如試劑判讀存在灰區(qū)，應(yīng)解釋說(shuō)明灰區(qū)范圍的確定方法。對(duì)于某些檢測(cè)方法學(xué)陽(yáng)性判斷值研究可能不適用申請(qǐng)人應(yīng)說(shuō)明理由。（六）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要包括申報(bào)產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究和適用樣本的穩(wěn)定性研究?jī)刹糠?。前者主要包括申?bào)產(chǎn)品的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開(kāi)瓶/復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件和保存時(shí)間等的研究。實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究應(yīng)采用至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后選取多個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行產(chǎn)品性能評(píng)價(jià)從而確定產(chǎn)品保存條件和有效期。如核酸提取液可保存還需對(duì)核酸提取液的保存條件和保存時(shí)間進(jìn)行研究。（七）臨床試驗(yàn)應(yīng)滿足《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則（原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)的要求如相關(guān)法規(guī)、文件有更新臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求下面僅說(shuō)明該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)中應(yīng)關(guān)注的重點(diǎn)問(wèn)題。—2—1對(duì)“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途1.1臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)及人員申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及預(yù)期用途綜合不同地區(qū)人種和流于3含3符合法規(guī)要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開(kāi)展臨床試驗(yàn)。1.2臨床試驗(yàn)適用人群和臨床樣本具有地貧癥狀和/或體征，或血液學(xué)表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素的疑似地貧患者和攜帶者；需與地貧進(jìn)行鑒別診斷的其他疾病患常性貧血等。臨床試驗(yàn)所用樣本應(yīng)為抗凝外周血樣本（基因組DNA非臨床樣本。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)分別滿足申書（如適用）的相關(guān)要求。1.3臨床試驗(yàn)方法1.3.1已有同類產(chǎn)品上市的申報(bào)產(chǎn)品對(duì)于已批準(zhǔn)的α-地貧突變和β地貧突變，原則上選擇已上市同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的臨床檢測(cè)性能。1.3.2無(wú)同類產(chǎn)品上市的申報(bào)產(chǎn)品1.3.2.1如新突變位點(diǎn)的臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可（如：國(guó)內(nèi)相關(guān)指南或?qū)＜夜沧R(shí)，且上述認(rèn)可基于充分的中國(guó)人群的臨床擇基因測(cè)序（針對(duì)新的點(diǎn)突變）或臨床普遍使用的其他公認(rèn)方法（針對(duì)其他類型的新突變位點(diǎn)，—3—此還應(yīng)提交新位點(diǎn)臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可的相關(guān)證據(jù)該部分資料可不納入臨床方案和報(bào)告。1.3.2.2如新突變位點(diǎn)的臨床意義未獲行業(yè)認(rèn)可，則臨床試驗(yàn)應(yīng)包括兩個(gè)目的新突變位點(diǎn)的臨床檢測(cè)性能評(píng)價(jià)和臨床意義評(píng)價(jià)新突變位點(diǎn)的臨床檢測(cè)性能評(píng)價(jià)可參考1.3.2.1新突變位點(diǎn)的臨床意義評(píng)價(jià)應(yīng)提交基于中國(guó)人群的充分的臨床證據(jù)證明基因型與表型的關(guān)系如隨訪或其他可證明基因型與表型關(guān)系的臨床驗(yàn)證資料。1.4最低樣本量和陽(yáng)性例數(shù)臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算并詳細(xì)描述所使用統(tǒng)計(jì)方法及各參數(shù)的確定依據(jù)。1.4.1臨床檢測(cè)性能評(píng)價(jià)的樣本量估算臨床檢測(cè)性能評(píng)價(jià)的樣本量估算可分為以下幾種情況。對(duì)于常見(jiàn)突變位點(diǎn)建議采用單組目標(biāo)值法分別估算每個(gè)突變位點(diǎn)臨床試驗(yàn)的最低樣本量通過(guò)陽(yáng)性符合率計(jì)算所需陽(yáng)性樣本的例數(shù)通過(guò)陰性符合率計(jì)算所需陰性樣本的例數(shù)同時(shí)考慮脫落情況估算最低樣本總量陽(yáng)性符合率和陰性符合率的目標(biāo)值（臨床可接受的最低標(biāo)準(zhǔn)）建議均不低于95%。對(duì)于罕見(jiàn)突變位點(diǎn)陰性樣本的例數(shù)可根據(jù)上述方法進(jìn)行估算，陽(yáng)性樣本則應(yīng)保證一定的例數(shù)。對(duì)于極其罕見(jiàn)的且有確切臨床證據(jù)證明其臨床意義的突變位點(diǎn)陰性樣本的例數(shù)可根據(jù)上述方法進(jìn)行估算陽(yáng)性樣本的例—14—數(shù)則應(yīng)結(jié)合臨床證據(jù)確定。1.4.2新位點(diǎn)臨床意義評(píng)價(jià)的樣本量估算新位點(diǎn)臨床意義評(píng)價(jià)的樣本量估算建議采用抽樣調(diào)查公式或其他合理方法進(jìn)行估算。2.針對(duì)“地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的評(píng)估”和“胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷”預(yù)期用途針對(duì)上述兩個(gè)預(yù)期用途本指導(dǎo)原則僅對(duì)部分內(nèi)容進(jìn)行了闡述申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性充分考慮本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)并進(jìn)行評(píng)價(jià)。2.1臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)和人員如申報(bào)產(chǎn)品的預(yù)期用途為胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷除滿足法規(guī)要求外臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)還應(yīng)取得產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)臨床試驗(yàn)人員應(yīng)為經(jīng)過(guò)專門培訓(xùn)的取得資質(zhì)的人員機(jī)構(gòu)和人員應(yīng)遵循《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法《母嬰保健專項(xiàng)技術(shù)服務(wù)許可及人員資格管理辦法，機(jī)構(gòu)應(yīng)取得《母嬰保健技術(shù)服務(wù)執(zhí)業(yè)許可證，人員應(yīng)取得《母嬰保健技術(shù)考核合格證書。2.2臨床試驗(yàn)適用人群和臨床樣本如預(yù)期用途為地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的評(píng)估則適用人群為地貧表型篩查陽(yáng)性的育齡人群地貧表型篩查陽(yáng)性的育齡人群可根據(jù)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)和地貧高發(fā)地區(qū)相關(guān)政策確定。如預(yù)期用途為胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷則適用人群為地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的胎兒地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的確定可參考國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)等相關(guān)文件?！?5—臨床試驗(yàn)所用樣本應(yīng)為胎兒羊水等臨床樣本（基因組DNA非臨床樣本。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)符合國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)等相關(guān)文件的要求，并滿足產(chǎn)品說(shuō)明書的要求。2.3最低樣本量和陽(yáng)性例數(shù)針對(duì)每種不同的預(yù)期用途應(yīng)分別采用合理方法估算最低樣本量。同一預(yù)期用途的不同樣本類型（羊水和臍帶血等，也應(yīng)分別采用合理方法估算最低樣本量。3.如有其他預(yù)期用途，也應(yīng)設(shè)計(jì)科學(xué)的臨床試驗(yàn)，提供充分的證據(jù)，證明其預(yù)期用途。4.不同預(yù)期用途的通用要求4.1臨床試驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析4.1.1應(yīng)在臨床試驗(yàn)方案或報(bào)告中明確申報(bào)產(chǎn)品、對(duì)比試劑和第三方試劑的試驗(yàn)方法。4.1.2臨床試驗(yàn)病例總結(jié)表應(yīng)以列表方式表示，包括申報(bào)產(chǎn)品的結(jié)果、對(duì)比試劑的結(jié)果、第三方試劑的檢測(cè)結(jié)果（如有、臨床診斷、年齡和性別等。4.1.3以交叉表分別總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以驗(yàn)證兩種試劑檢測(cè)結(jié)果的一致性。4.1.4結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證在數(shù)據(jù)收集過(guò)程中，對(duì)于兩種試劑檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本，采用合理方法進(jìn)行復(fù)核，并對(duì)差異原因進(jìn)行分析。如無(wú)需復(fù)核，—6—應(yīng)說(shuō)明理由。4.2臨床試驗(yàn)方案各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案不可隨意改動(dòng)整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由該實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。試驗(yàn)方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因在試驗(yàn)操作過(guò)程和結(jié)果判定時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對(duì)比試劑/方法應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另外，申報(bào)產(chǎn)品的樣本類型不應(yīng)超越對(duì)比試劑/方法對(duì)樣本類型的要求。4.3臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程結(jié)果分析結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。（八）產(chǎn)品技術(shù)要求產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法《44號(hào)公告》和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則（原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的相關(guān)要求。該類產(chǎn)品作為三類體外診斷試劑應(yīng)將主要原材料生產(chǎn)工藝及半成品要求等內(nèi)容作為附錄附于技術(shù)要求正文后?！?7—該類產(chǎn)品已有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。（九）產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告第三類體外診斷試劑申請(qǐng)注冊(cè)時(shí)應(yīng)提交連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的檢驗(yàn)報(bào)告目前該產(chǎn)品已有國(guó)家參考品，產(chǎn)品檢驗(yàn)應(yīng)滿足國(guó)家參考品的要求。（十）產(chǎn)品說(shuō)明書產(chǎn)品說(shuō)明書應(yīng)滿《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則（原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)的要求產(chǎn)品說(shuō)明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料的相關(guān)研究結(jié)果保持一致。下面對(duì)該類產(chǎn)品說(shuō)明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行闡述。1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：1.1人樣本基因組DNA中的α-和/或貧突變用于α-和/或β-地貧的輔助診（遺傳診斷，地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的評(píng)估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷。1.2介紹地貧相關(guān)的臨床背景信息及實(shí)驗(yàn)室診斷方法等，介紹被測(cè)靶標(biāo)（突變位點(diǎn)）的相關(guān)情況。2.【主要組成成分】2.1說(shuō)明試劑盒包含組分的名稱或數(shù)量等信息，說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。2.2試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試/耗材的名稱及其他相關(guān)信息。2.3如果試劑盒中不包含用于核酸提取純化的試劑組分，則—8—應(yīng)在此注明經(jīng)過(guò)驗(yàn)證后配合使用的商品化核酸提取純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品名稱以和醫(yī)療器械備案（如有等詳細(xì)信息。3.【檢驗(yàn)原理】3.1對(duì)試劑盒的被測(cè)靶標(biāo)進(jìn)行詳細(xì)描述（基因位置、突變位點(diǎn)及相關(guān)特征等，對(duì)試劑盒所用探針、引物或突變的判定等進(jìn)行詳細(xì)介紹對(duì)不同樣本反應(yīng)管組合對(duì)照品設(shè)置及熒光信號(hào)檢測(cè)原理等進(jìn)行介紹。3.2試劑盒技術(shù)原理的詳細(xì)