滴定法與比色法檢測銀耳中亞硫酸鹽含量

利用滴定法與比色法檢測銀耳中亞硫酸鹽的含量華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院2012級(jí)生物技術(shù)張盛盼C5—52313660565488華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院2012級(jí)生物工程朱晁誼C5—52313662411308摘要銀耳是人們喜愛的傳統(tǒng)食品，近年來不斷有媒體報(bào)道，銀耳中二氧化硫含量超過國家標(biāo)準(zhǔn)。過高的二氧化硫?qū)θ梭w有很大危害性，它會(huì)使人產(chǎn)生嘔葉、腹瀉、惡心等癥狀，嚴(yán)重的其至?xí)：θ说母闻K、腎臟。而由于二氧化硫是氣體不容易固定也不便于測定，故本實(shí)驗(yàn)以亞硫酸鹽的形式測得銀耳中硫的含量。本實(shí)驗(yàn)主要以滴定法與比色法為檢測方法，檢測市售銀耳中亞硫酸鹽的含量，并且通過加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，篩選出銀耳中亞硫酸鹽最適宜的檢測方法。關(guān)鍵詞：銀耳亞硫酸鹽比色法滴定法1前言經(jīng)濟(jì)飛速發(fā)展，人們對(duì)健康要求不斷提高?！凹t心蛋”“三聚氧胺奶粉”“瘦肉精”事件令人為之震驚，人們的目光也轉(zhuǎn)移到了我們吃的食物上來。近年來食品中超量使用和濫用亞硫酸鹽的現(xiàn)象也日趨受到人們的關(guān)注，加強(qiáng)對(duì)食品中SO?及SO32-含量的檢測已成為急需解決的問題。1.1食品中的亞硫酸鹽食品中亞硫酸鹽的主要來源是食品生產(chǎn)工藝中用于漂白、防腐、脫色和抗氧化的添加劑，常用的有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、低亞硫酸鈉和焦亞硫酸鈉等，亞硫酸鹽與食品中的糖、蛋白質(zhì)、色素、酶、維生索、醛、酮等作用后，以游離型和結(jié)合型的so32-形式殘留在食品中；食品加工工藝中還常用硫磺作為漂白熏蒸劑，使食品中殘留一部分游離的二氧化硫⑴。自20世紀(jì)80年代起，亞硫酸鹽的安全性引起了越來越多的關(guān)注。許多國家對(duì)食品中的亞硫酸鹽含量規(guī)定了最大使用量和最大殘留限量，并且研究了各種亞硫酸鹽的測定方法。WHO規(guī)定每人每日允許攝人量為0-0.7mg/kg(以二氧化硫計(jì))。人體少量攝取(lg/d)亞硫酸鹽，在體內(nèi)迅速氧化成硫酸鹽，不會(huì)引起嚴(yán)重的生理障礙。但攝取4~6g/d,會(huì)引起劇烈的胃腸障礙，造成腹瀉，頭痛；二氧化硫可與血中硫胺素結(jié)合，導(dǎo)致肝、腦和脾等臟器退行性變性。1.2銀耳與亞硫酸鹽銀耳，乂名白木耳，藥食兩用類真菌。它含有一種對(duì)人體很有益處的植物膠及黏液質(zhì)，不但能滋陰養(yǎng)顏，還能分解腸胃管道的污穢物，有清掃腸胃的功能。此外，還有豐富的磷質(zhì)，有補(bǔ)脾健胃，清涼除燥的功用，對(duì)虛火上升、煩躁失眠，食欲不振或虛不受補(bǔ)的人有良好的食療效果。歷代皇家貴族將銀耳看作是“延年益壽之品”、“長生不老良藥”。但由于消費(fèi)者往往錯(cuò)誤地認(rèn)為“銀耳越白越好”，使部分生產(chǎn)廠商對(duì)銀耳產(chǎn)品進(jìn)行“超量漂白”，導(dǎo)致銀耳產(chǎn)品中二氧化硫的殘留量普遍超標(biāo)。銀耳產(chǎn)品中的二氧化硫主要來自“硫磺熏蒸”這種傳統(tǒng)的銀耳漂白加工工藝。硫磺燃燒產(chǎn)生的二氧化硫具有漂白作用，同時(shí)還可掩蓋銀耳發(fā)霉所造成的再斑［2］。二氧化硫遇水則形成亞硫酸鹽，亞硫酸鹽不僅會(huì)引發(fā)支氣管痙攣，還會(huì)在人體內(nèi)轉(zhuǎn)化成致癌物質(zhì)。2實(shí)驗(yàn)原理食品中亞硫酸鹽測定方法比較常用的為鹽酸副玫瑰苯胺法［3］,但該法操作較繁鎖,而且方法中使用一些劇毒試劑會(huì)造成環(huán)境污染。離子色譜法需要特殊儀器、操作相對(duì)繁瑣。甲基綠褪色法中的甲基綠價(jià)格比較昂貴，不適合實(shí)驗(yàn)室日常分析。本實(shí)驗(yàn)主要采用滴定法和孔雀石綠褪色光度法⑷兩種檢測方法，通過加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，篩選出銀耳中亞硫酸鹽最適宜的檢測方法。2.1孔雀石綠褪色光度法本法利用so32-能使孔雀石綠褪色且褪色的程度與S03?-量的變化顯著相關(guān)，從而用分光光度法進(jìn)行亞硫酸鹽測定。2.2滴定法一直接碘■法本法利用碘可以與二氧化硫發(fā)生氧化還原反應(yīng)的性質(zhì)，用碘標(biāo)準(zhǔn)溶液作滴定劑，淀粉作指示劑，根據(jù)所消耗的碘標(biāo)準(zhǔn)溶液量計(jì)算出樣品中二氧化硫含量，反應(yīng)式如下：l2+SO2+2H2O=== 2r+SO42+4H+3實(shí)驗(yàn)設(shè)備電子分析天平（感量O.OOOlg）.紫外-可見分光光度計(jì)4實(shí)驗(yàn)材料及試劑供試2種銀耳樣品1、2號(hào)，均市售，粉碎、過篩，保存?zhèn)溆?。鹽酸(3:1,V/V)、O.lmol/L的NaOH溶液、0.010mol/L的碘標(biāo)準(zhǔn)使用液、10g/L的淀粉指示液、0.01%的孔雀(石)綠溶液、5.00X103mol/L的M2SO3標(biāo)準(zhǔn)溶液、pH6.0的NaAc-HAc緩沖溶液[取NaAc54.6g,加lmol/LHAc溶液20ml溶解后，加水橋釋至500ml]□以上試劑均為分析純；蒸鎘水或去離子水。5實(shí)驗(yàn)操作步驟5.1樣品溶液的制備一浸泡法稱取l.OOOOg銀耳，用0.1mol/L的NaOH溶液定容于100ml容量瓶中，浸泡30min,過濾。5.2滴定法5.2.1滴定濾液至250ml碘量瓶中，依次加入10ml鹽酸、1ml淀粉指示液。搖勻后用碘標(biāo)準(zhǔn)使用液滴定至變藍(lán)且30s內(nèi)不褪色為止，記下消耗的碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。結(jié)果見表1和表2。5.2.2加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)選取—號(hào)樣品，以10ml鹽酸為酸化劑，25ml0.1mol/LNaOH溶液為吸收劑，做回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表3。5.3孔雀石綠褪色光度法5.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作向5支10ml比色管中，分別加入1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mlNa2SO3標(biāo)準(zhǔn)溶液,各加入1.00ml0.01%孔雀綠溶液，搖勻，加入pH6緩沖溶液1.00ml,用水定容。放置5min后，以去離子水作參比，在最大吸收波長620nm測定溶液吸光度⑸。以吸光度(y)為縱坐標(biāo)，SO?含量(x)為橫坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。見圖5.3.2樣品測定取1.0ml樣品處理液于10ml比色管中，以后步驟同標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。結(jié)果見表4和表5。5.3.3加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)選取—號(hào)，以鹽酸為酸化劑，25ml0.1mol/LNaOH溶液為吸收劑，結(jié)果見表6。

6實(shí)驗(yàn)記錄6.1浸泡滴定法表1樣品1亞硫酸鹽含量測定錐瓶編號(hào)數(shù)據(jù)記錄與計(jì)匸1IIIIIm樣品/gV碘液/mLV法|=V絡(luò)ii=V?iu=Vpii=Vwn=V|||=Vi=Vn=Viu=C碘液/mol?l?0.010亞硫酸鹽含量X（mg/kg以SO2計(jì)）平均值X相對(duì)偏差*/%相對(duì)平均偏差N/%X=1OXV碘液xMsoz/m^品 Mso2=64?06表2樣品2亞硫酸鹽含量測定數(shù)據(jù)記錄與計(jì)算錐瓶編號(hào)1IIIIIm樣品/gV終尸V-I尸Vft111=V碘液/mLV初尸Vwn=V<7|||=V|=V||=Viu=C碘液/mold0.010亞硫酸鹽含量X（mg/kg以SO?計(jì)）

平均值X相對(duì)偏差*/%相對(duì)平均偏差N/%表3浸泡滴定法回收率編號(hào)本底含量（mg,以SO2計(jì)）加標(biāo)量（mg,以S02計(jì)）測得量（mg,以S02計(jì)）回收率（%）RSD(%)123回收率二（測得量一本底含量）/加標(biāo)量xlOO%分析：由表3可見,浸泡滴定法的樣品回收率變化范圍—%?—％,RSD為—％?—%, 符合/不符合）食品中亞硫酸鹽檢測的回收率要求。準(zhǔn)確度—，精密度—o此法用于測定銀耳中亞硫酸鹽含量效果—o6.2浸泡比色法圖1浸泡比色法測定S02含量標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:

錐瓶編號(hào)數(shù)據(jù)記錄與計(jì)竄1IIIIIm樣品/g吸光度A標(biāo)準(zhǔn)曲線得出亞硫酸鹽含量Y（mg,以SO?計(jì)）亞硫酸鹽含量X（mg/kg,以SO2計(jì)）平均值來相對(duì)偏差*/%相對(duì)平均偏差//%表4樣品1亞硫酸鹽含量測定稀釋倍數(shù)=100YX稀釋倍數(shù)YX稀釋倍數(shù)X1000X= YX稀釋倍數(shù)X1000X= 錐瓶編號(hào)數(shù)據(jù)記錄與計(jì)孑1IIIIIm樣品/g吸光度A標(biāo)準(zhǔn)曲線得出亞硫酸鹽含量（mg,以SO2計(jì)）亞硫酸鹽含量X（mg/kg,以SO2計(jì)）平均值乂相對(duì)偏差*/%相對(duì)平均偏差①/%表5樣品2亞硫酸鹽含量測定稀釋倍數(shù)=100

表6浸泡比色法回收率編號(hào)本底含量（mg,以S02計(jì)）加標(biāo)量（mg,以S02計(jì)）測得量（mg,以S02計(jì)）回收率（%）RSD(%)123回收率二（測得量一本底含量）/加標(biāo)量xlOO%分析：由表6可見，浸泡比色法的樣品回收率范圍為—％?—%,RSD為—％?—%,說明此法用于測定銀耳中亞硫酸鹽含量是 的。7實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析1、浸泡比色法中所測得的S02含量稍—（高于、低于）浸泡滴定法，原因 2、在浸泡提取法中，滴定法和比色法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在—％?—%, （低于、高于）國標(biāo)中不高于10%的平行樣測定要求⑹。說明兩種方法作為測定銀耳中亞硫酸鹽的方法，所得試驗(yàn)結(jié)果—（是、否）準(zhǔn)確、可靠。參考文獻(xiàn)楊劍平.二氧化硫及亞硫酸鹽在食品加工中的應(yīng)用[J].山東罐頭科技，1990（2）:14-18.李英.食品中亞硫酸鹽的檢測[J].湘譚師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2001,23（1）:16-24.周徳慶，張雙靈.鹽酸副玫瑰苯胺法測量食品中亞硫酸鹽的不確定度評(píng)定[J].現(xiàn)代測量與實(shí)驗(yàn)室管理，2004(4):18-20.紀(jì)淑娟，王麗麗.孔雀石綠褪色光度法測定食