自體骨髓間充質(zhì)干細胞技術治療肝硬化

自體骨髓間充質(zhì)干細胞技術治療肝硬化

可行性研究報告一、 醫(yī)療機構名稱、級別、類別，相應診療科目登記情況，相應科室設置情況二、 技術開展的目的、意義和實施方案1開展該項醫(yī)療技術的目的隨著人類疾病譜的變化，傳染病的逐漸減少，而由于自身細胞、組織或器官壞死而導致的疾病越來越多。這些疾病僅通過手術和藥物是不能解決的。正是從這個意義上說，20世紀是藥物治療的時代，21世紀是細胞治療的時代，這是繼藥物治療、手術治療之后的又—場醫(yī)療革命。干細胞移植治療是一種新興的治療方式，為目前難以醫(yī)治的多種疾病帶來全新的治療方式，是最有可能在不遠的將來替代現(xiàn)有某些醫(yī)療技術的治療方式。 間充質(zhì)干細胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是骨髓中除造血干細胞以外的另一種成體干細胞，廣泛分布于動物體內(nèi)骨髓、肝臟、脂肪等多種組織中。MSCs具有強大的自我更新能力和多向分化潛能，是移植領域應用前景廣闊的再生來源細胞；同時，MSCs是一種重要的免疫調(diào)節(jié)細胞，MSCs在炎癥細胞因子刺激后對免疫系統(tǒng)表現(xiàn)出很強的抑制作用，所以MSCs有望應用于減少免疫排斥，延長移植物存活時間，治療相關免疫失調(diào)癥，如自身免疫疾病等方面。骨髓來源間充質(zhì)干細胞由于來源自體，安全性已被證實，已在許多臨床試驗中應用。肝病是嚴重危害人類健康的一類疾病，是醫(yī)學研究面臨的巨大挑戰(zhàn)之一。我國是一個乙型肝炎大國，人群乙型肝炎病毒攜帶率高達10%，每年因肝炎相關性肝硬化引發(fā)終末期肝病新增病例數(shù)超過500萬。另外，由于環(huán)境因素、生活習慣等改變，由脂肪性肝病、藥物性肝病及免疫性肝病等引起的終末期肝病也在逐年增加每年新增病例數(shù)約為100萬。肝硬化、慢性重癥肝炎等終末期肝病是一個高發(fā)病率、高死亡率的嚴重危害人類健康的公共衛(wèi)生問題。由于進行肝臟移植曾經(jīng)是治療終末期肝臟疾病的唯一選擇，但是治療費用數(shù)額巨大、而且供體的短缺、配型的艱難、術后需長期使用免疫抑制劑、圍手術期風險大、以及術后移植肝并發(fā)肝炎、腫瘤等問題，許多患者最終放棄治療。間充質(zhì)干細胞移植治療重癥肝病給患者帶來新的希望。2開展該項醫(yī)療技術的意義干細胞技術為人類部分再生（產(chǎn)生新的功能細胞、組織和器官）從而為治療疾病、提高生存年限和生活質(zhì)量提供了重要基礎，勢必引起疾病治療和醫(yī)療模式的深刻變革。從而基于干細胞的藥物研究和開發(fā)，也許會引起整個醫(yī)藥行業(yè)的革命。干細胞技術（比如自體干細胞移植治療）也將是未來個體醫(yī)學的重要組成部分。屬于生物技術，有相應的廢物處理措施，對環(huán)境影響小。醫(yī)院探尋并開展新型的醫(yī)療技術服務廣大患者是醫(yī)院的職責之一。21世紀是生物醫(yī)學世紀。干細胞治療一種新興的、先進的治療技術。我科提供的具有代表性的細胞治療技術為醫(yī)院搭建了生物細胞治療的平臺（技術、人員、管理、設備、硬件、品牌、學術），樹立了醫(yī)院的品牌和聲譽，這些因素都會間接的為醫(yī)院提高了就診量，增加了整體收入，創(chuàng)造更多的經(jīng)濟效益和社會效益。能夠在較短的時間內(nèi)建立和開展，生物細胞GMP實驗室可服務于全院的臨床與科研。這對于提高醫(yī)院的整體技術理論水平、學科交叉融合特色、開展國內(nèi)外科研合作與學術交流、發(fā)表高水平臨床與科研學術論文具有重要意義。目前，隨著干細胞分離培養(yǎng)技術的逐漸成熟，干細胞研究的重點已經(jīng)開始逐漸從基礎研究轉(zhuǎn)向臨床研究，建立完整的干細胞移植治療技術體系，非常有助于提高技術科研水平，培育新的利潤增長點，提高醫(yī)院經(jīng)營管理效益，同時可以及時地搶占國內(nèi)干細胞研究的制高點并與國際研究水平保持同步，可以大幅度提高醫(yī)院的科研水平和醫(yī)療工作的科技含量，豐富疾病治療手段，提高醫(yī)療水平，提高醫(yī)院知名度。同時，本項目的開展，非常有助于提高科研水平、培育新的利潤增長點，并能使患者獲得及時的治療，改善患者癥狀，提高生活質(zhì)量，減少社會負擔，社會效益十分顯著。軍事方面，干細胞治療在救治戰(zhàn)時傷病員方面也可發(fā)揮重要作用，如輻射損傷等等。3開展該項醫(yī)療技術的實施方案治療前需檢查肝功能、血常規(guī)、凝血功能等進行評估?；緱l件符合者，經(jīng)簽署知情同意書后可進行干細胞治療。1）首先由醫(yī)生在滅菌環(huán)境采集骨髓，大約50~120毫升；2） 而后將采集到的細胞在超潔凈實驗室進行培養(yǎng)、擴增及質(zhì)檢等過程；3） 于培養(yǎng)的第10、17、24、31天左右分四次回輸干細胞；4） 觀察治療反應及療效；間隔3~6個月可進行下一療程的治療；5） 進行間充質(zhì)干細胞移植后進行至少1年隨訪。三、技術基本情況1國內(nèi)外開展情況近年來，隨著干細胞研究領域的巨大進展，干細胞移植為終末期肝病的治療帶來了新的契機。經(jīng)過大量的體外實驗研究和動物試驗研究，間充質(zhì)干細胞技術已逐步應用于臨床。間充質(zhì)干細胞移植治療終末期肝病已經(jīng)在國內(nèi)外得到較廣泛應用其安全性和有效性也得到了高度的認可?！﹪鴥?nèi)外學者業(yè)已開始進行相關小規(guī)模前瞻性試驗應用結果表明此方法安全、有效，患者耐受情況良好。研究發(fā)現(xiàn)，將肝硬化患者自身來源的MSCs，經(jīng)介入技術再注入患者體內(nèi)，其肝功能的各項指標、Child分級、生活質(zhì)量都有明顯好轉(zhuǎn)。Terai等報道了9名接受從周圍靜脈輸注自體骨髓細胞治療的肝硬化患者，在移植24周后，血清白蛋白、總蛋白水平明顯改善(P<0.05),顯著改善Child-Pugh分級(P<0.05),并未觀察到任何副作用。2007年，Mohamadnejad等選取了4位失代償期肝硬化患者為臨床研究對象。從患者自身提取的MSCs經(jīng)過一系列處理后，制備成細胞混懸液，以(1-1.5)x106個/mL細胞懸液的細胞濃度向患者自身回輸20mL,在隨后的1年里定期隨訪，發(fā)現(xiàn)患者的血漿白蛋白(albumin,ALB)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alaninetransaminase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartateaminotransferase,AST)、直接膽紅素(directbilirubin)、凝血酶原時間(prothrombintime,PT)等指標均有一定程度好轉(zhuǎn)，且隨訪期間無明顯不良反應，并發(fā)癥也得到控制，甚至連原已萎縮的肝臟還有所增大，生活質(zhì)量和精神狀況均得到明顯改善。2008年，國內(nèi)學者王迪等通過40例經(jīng)肝動脈移植骨髓干細胞病例作類似的研究(移植方案：提取自身來源的骨髓干細胞，并制成10mL細胞懸液，其CD34+干細胞數(shù)為1x106-1x109/mL，再將上述10mL細胞懸液移植到肝臟)，所得結果與Mohamadnejad等很相似。還有結果報道：移植12周后，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)逐漸降低，由平均186.34IU/L降至68.96IU/L；總膽紅素(TBIL),由平均161.3知mol/L降至78.93pmol/L；白蛋白(ALB)逐漸升高，由平均24.39g/L升至31.96g/L，表明間充質(zhì)干細胞移植治療后，患者肝功能明顯改善。在干細胞移植后凝血酶原活動度^丁人)逐漸上升，由術前平均26.33%上升至術后8周的53.48%，表明間充質(zhì)干細胞移植治療后患者凝血機制明顯改善。問卷評分發(fā)現(xiàn)調(diào)查移植后大多數(shù)患者身體狀況有明顯的改善：移植后8周(51.6%):食欲改善的45例(75%)；體力好轉(zhuǎn)32例(53.3%)；腹脹減輕28例(46.6%)；在60例移植患者中未發(fā)現(xiàn)嚴重并發(fā)癥。MSCs治療肝病的具體機制尚不清楚，MSCs對肝纖維化肝硬化的治療原理可能主要包括：⑴.MSCs分化形成正常肝細胞，補充肝細胞數(shù)量，改善肝功能：維持人體正常肝臟功能約需2.5x1010個肝細胞。MSCs通過體外誘導然后輸注體內(nèi)可隨循環(huán)植入肝臟增殖分化成肝細胞。⑵.MSCs分泌細胞因子/生長因子、抑制炎癥反應：MSCs可分泌多種因子，如HGF、ILs、SCF、SDF-1a、TGF-B、TNF-a等。其中HGF不但具有誘導MSCs自身向肝細胞分化功能，還抑制TGF-B1產(chǎn)生，阻止肝臟纖維化和抗肝細胞凋亡的活性，從而提高存活率。IL-10能破壞TNF的纖維化信號傳導通路，減少纖維化。⑶.MSCs激活卵原細胞，促進肝細胞再生：卵圓細胞被認為是肝細胞的前體細胞.當肝臟輕微損傷時肝臟可通過自身的肝細胞增殖修復嚴重時則通過卵圓細胞修復再生。而MSCs在分泌上述細胞因子時起到激活卵圓細胞、促進肝細胞再生作用。⑷.MSCs抑制肝星形細胞(hepaticstellatecells,HSCs)活化、阻止細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix,ECM)的生成：HSCs是正常肝和纖維化時合成細胞外基質(zhì)的主要細胞。MSCs可能通過HGF阻斷細胞外信號調(diào)節(jié)激酶的磷酸化作用，抑制a-SMA陽性細胞的增殖,使門脈區(qū)成纖維細胞的生長抑制、凋亡增加，從而緩解肝纖維化進展。⑸.MSCs降解肝內(nèi)過量的ECM基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)具有較強的降解ECM作用。MSCs是MMP-2和MTMMP-2等酶的主要來源，并且其表達水平與肝纖維化密切相關，這是由于它們對肝纖維化的逆轉(zhuǎn)起重要作用。通過他們及其他學者的研究結論推斷，MSCs移植是一種行之有效的、能夠控制并緩解肝硬化的治療手段，在治療經(jīng)費、來源缺乏、排異反應等方面都優(yōu)于肝移植?？梢婇g充質(zhì)干細胞移植可以作為肝纖維化肝硬化的一種新的治療方法。世界各國有超過10項間充質(zhì)干細胞治療肝硬化臨床試驗項目在FDA或ClinicalTria^±冊，入選患者超過300例，但仍然處于I期或II期的臨床試驗階段，其中很多項目都是用異體來源的間充質(zhì)干細胞。我國已開始用間充質(zhì)干細胞治療，根據(jù)初步的臨床報告，間充質(zhì)干細胞對肝硬化的治療都取得了較好的療效。近5年來，先后已有武漢協(xié)和醫(yī)院、哈醫(yī)大附一院、天津市人民醫(yī)院、中山大學附屬醫(yī)院、遼寧省人民醫(yī)院、北京協(xié)和醫(yī)院、北京人民醫(yī)院、解放軍總醫(yī)院(301X解放軍第304醫(yī)院、解放軍455醫(yī)院等多家單位開展了間充質(zhì)干細胞的研究和治療工作。2適應證肝硬化病例選擇的標準：1）年齡18-70歲，男女不限；2） 根據(jù)患者的病史、癥狀、體征、實驗室及器械檢查結果，結合近幾年的病情進展情況，診斷為肝硬化失代償期，且伴有大量腹水。3） 在既往的一年內(nèi)，雖經(jīng)內(nèi)科積極治療，病情仍反復加重。4） 需間斷補充血漿白蛋白及口服利尿劑治療。）血漿白蛋白大于25g/L，總膽紅素小于170umol/L，凝血酶原活動度大于30%（凝血酶原時間小于20秒），大量腹水控制到中等以下，自發(fā)性腹膜炎及肝性腦病已治愈，CTP評分大于等于7分；）血紅蛋白大于7.0g/L，血小板大于3萬，紅細胞比容大于0.25；7） 近一個月內(nèi)無消化道出血病史；8） 自愿簽署知情同意書。3禁忌證1） 不符合納入標準；2） 有門靜脈血栓，或合并有嚴重慢性消耗性疾病以及嚴重心血管、腦血管、肺、內(nèi)分泌系統(tǒng)、腎臟及造血系統(tǒng)等原發(fā)性疾??；3） 同時合并原發(fā)性肝癌，或患有任何其他腫瘤；4） 有肝臟切除或門靜脈高壓分流和（或斷流）手術史、已行或近期擬行肝移植者；5） 試驗前2周內(nèi)曾服用影響本項目的藥物（如非選擇性受體阻斷劑、生長抑素制劑、血管活性藥物和中藥等）；6）靜脈曲張破裂出血、重創(chuàng)傷、手術、出血、自發(fā)性細菌性腹膜炎、急性感染發(fā)作期及伴有休克的患者；7） 妊娠和哺乳期婦女；8） 度過敏體質(zhì)或者有嚴重過敏史者；9） 患有精神疾病者、酗酒、有藥癮或有其它不宜進行臨床試驗者。4不良反應治療比較安全，至今未見重大不良反應，有很小部分病例在細胞回輸后出現(xiàn)體溫升高（37.0X~38.5r），絕大部分病人在2~6小時內(nèi)恢復正常體溫。極少數(shù)體溫較高超過39°C的患者，在使用解熱藥后就可以完全緩解。在我們的臨床應用觀察中迄今為止，干細胞移植治療尚未導致重大的副作用或不良反應；僅有個別病人在介入治療后產(chǎn)生穿刺部位疼痛，輕微頭昏、頭痛及低度發(fā)熱等。5技術路線A、 骨髓采集：器前和器后上棘多個部位抽取骨髓約50~120毫升。B、 密度梯度離心法分離，貼壁法純化。C、 細胞擴增：細胞長到80%匯合時1：3-5傳代。D、 細胞質(zhì)檢、質(zhì)控。E、 細胞凍存、復蘇及運輸。F、 細胞回輸：靜脈注射和/或蛛網(wǎng)膜下腔注射治療。6質(zhì)量控制措施1）母體組織標本的遺傳缺陷調(diào)查和病原微生物檢測：術前用ELISA方法常規(guī)進行母體標本的病原微生物檢測，包括艾滋病病毒HIVAb/Ag、乙肝病毒HBsAg、丙肝病毒HCVAb/Ag、TP等病原微生物。2）細胞制劑微生物檢查：干細胞制劑制備完成后，用全自動細菌培養(yǎng)儀和配套標準的血培養(yǎng)瓶進行真菌和細菌檢測及熱源檢測。3）干細胞生物學功能檢測：細胞存活率檢測；使用臺盼藍染色法計數(shù)活細胞數(shù)目；使用血常規(guī)計數(shù)儀計數(shù)單個核細胞總數(shù)；使用流式細胞計數(shù)儀檢測細胞表面標志，CD29、CD44、CD73、CD90和CD105陽性，陽性率不低于95%；CD34、CD45、CD31和HLA-DR陰性，陽性率不高于2%；體外誘導多向分化特性檢測。7療效判定標準肝硬化及其它終末期肝病主要療效判定標準：根據(jù)終末期肝病的診斷分期標準與肝功能Child-Pugh分級改變情況評價轉(zhuǎn)歸。①顯效：癥狀明顯減輕，B超檢查腹水消失或少量，肝功能達A級以上；或評分前進一個數(shù)量級為顯效（如從C級到B級，或者B到A級）；②有效：癥狀減緩，B超檢查腹水中量或少量，肝功能達B級以上而未達A級者；或評分減少但不夠一個數(shù)量級為有效；轎效：癥狀改善不明顯，腹水黃疸加重，肝功能C級者；或肝功能僅有一項改善或無明顯改善則為無效。8評估方法術后觀察患者食欲、體力、腹腔積液、面容等癥狀、體征及不良反應的發(fā)生，術后第2、4、8、12周復查谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT、AST、膽紅素TBil、白蛋白Alb、凝血酶PT等實驗室指標。將對所有病例嚴密隨訪至少1年，隨訪主要觀察和記錄內(nèi)容包括：腹水再發(fā)時間、肝硬化并發(fā)癥出現(xiàn)狀況、病程中應用白蛋白的情況、肝功能（白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素、相關的凝血酶等XChild-Pugh積分及AFP等化驗指標，評估患者生活質(zhì)量，并隨時進行必要的檢查和治療。主要療效判別指標：a）肝臟儲備功能：由于目前尚缺少客觀、準確和統(tǒng)一的臨床評價標準，肝臟儲備功能是反映肝臟功能最重要的指標，因此，我們將能反映肝臟合成功能的指標作為臨床療效的主要判別指標。主要包括：白蛋白（ALB）,膽固醇（CHO）,膽堿酯酶（CHE）以及凝血系列。這些指標在治療2周后呈現(xiàn)明顯好轉(zhuǎn)趨勢。b）終末期肝病的評分：Child-Pugh評分是反映終末期肝病肝臟儲備功能較為客觀的綜合性指標，因此比較治療前后Child-Pugh評分的改善情況是判斷治療效果較為準確的手段。根據(jù)Child-Pugh評分標準：5~7分為A級，8~10分為B級；11~15分為C級。根據(jù)Child-Pugh評分標準，分別于治療后1、2、3、4周及2、3、4--12個月觀察患者肝臟儲備功能情況。次要療效判別指標：a） 肝臟酶學：部分病人的肝臟酶學改變可呈現(xiàn)好轉(zhuǎn)，主要包括：谷丙轉(zhuǎn)移酶（ALT）谷草轉(zhuǎn)移酶（AST）;總膽紅素（TBIL）。b） 門脈高壓相關并發(fā)癥：患者術后肝硬化相關的并發(fā)癥發(fā)生頻率明顯減少甚至消失，主要包括：消化道出血、腹水、自發(fā)性細菌性腹膜炎以及肝性腦病等。c） 影像學B超、CT檢查和胃鏡檢查可幫助輔助診斷肝硬化的程度和肝硬化的并發(fā)癥。9與其它醫(yī)療技術的比較（風險、療效、費用及療程）眾所周知，對于各種肝臟疾病所致的肝臟功能衰竭，臨床對之尚無行之有效的治療手段。目前有希望的治療方式有原位肝移植、生物人工肝及基因治療等.然而，這些治療方式都面臨肝源短缺、免疫毒性及高額的治療費用等問題.目前終末期肝病的臨床治療手段主要包括：內(nèi)科常規(guī)治療、人工肝支持系統(tǒng)和原位肝移植等。（1）內(nèi)科常規(guī)治療常規(guī)的內(nèi)科常規(guī)治療主要以補充血漿、白蛋白、保肝、利尿等為主。這些治療措施雖能暫時改善臨床癥狀，卻不能逆轉(zhuǎn)肝細胞數(shù)量日益減少導致的肝功能逐漸減退。（2）人工肝支持系統(tǒng)人工肝支持系統(tǒng)已有50余年的發(fā)展歷史。盡管隨著材料學、細胞工程學及臨床醫(yī)學的不斷發(fā)展，人工肝支持治療已成為急性肝功能衰竭治療的有效方法之一，為自身肝臟的再生及等待肝源爭取了時間。然而，對于終末期肝病慢性肝功能衰竭患者療效不盡人意。（3） 原位肝移植原位肝移植是目前治療終末期肝病的唯一有效手段。但是肝移植供體缺乏成為原位肝移植治療的瓶頸。美國2005年的統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，17000等待肝移植的患者，由于供肝缺乏，每年僅有7000患者可以接受原位肝移植治療。加之原位肝移植治療費用昂貴、術后需長期使用免疫抑制劑、圍手術期風險大、以及術后移植肝并發(fā)肝炎、腫瘤等問題，極大限制了原位肝移植的廣泛應用。（4） 雖然成熟的肝細胞移植最接近于臨床應用，但也有一定的局限性，即無法大量的增殖和急需時使用.干細胞增殖能力強，在體內(nèi)外均有極強的向肝系細胞分化的能力，從而干細胞移植倍受重視。相比骨髓干細胞移植治療終末期肝病，外周血干細胞移植更為簡單易行，不僅可以減少病人抽取大量骨髓的痛苦及手術風險，還可避免體外分離骨髓單個核細胞造成的污染及骨髓有形成分的丟失。間充質(zhì)干細胞技術能較好地且長時間地改善終末期肝患者的，降低患者住院的頻率和醫(yī)療開支，同時也為部分患者等待肝移植治療贏取了時間。自體骨髓間充質(zhì)干細胞注射治療，是近幾年國內(nèi)外開展的新技術，該方法可以產(chǎn)生新的肝臟細胞和改善肝臟血液循環(huán)，從根本上減緩或阻斷肝硬化向前發(fā)展，效果好、費用低、安全性大，眾多科學研究顯示，骨髓間充質(zhì)干細胞是一種多潛能干細胞，在相應的組織環(huán)境下具有分化為心肌細胞、神經(jīng)細胞、血管內(nèi)皮細胞、肝臟細胞、胰腺細胞和平滑肌細胞等組織細胞的潛能。自體骨髓間充質(zhì)干細胞治療就是把患者的骨髓抽取一部分，在實驗室經(jīng)過不斷的分離、分化、提純，提取出自體干細胞，然后通過動脈導管介入注射到患病的器官，促進器官的細胞修復和再生，恢復器官的功能和血液供應，達到臨床治療的目的。對于肝硬化患者，自體骨髓間充質(zhì)干細胞治療恰恰在藥物治療和肝臟移植中間顯示出了巨大的治療優(yōu)勢。通過把患者的自體骨髓干細胞經(jīng)動脈插管由肝動脈注射到肝臟，使干細胞在肝臟廣泛植入。因為骨髓間充質(zhì)干細胞具有"因地分化”的特性，就是在什么樣的環(huán)境條件導引下分化成什么樣的細胞，所以骨髓間充質(zhì)干細胞被移植到肝臟組織后，就像種入肝臟的種子，在肝臟微環(huán)境的調(diào)節(jié)下成長發(fā)育成骨髓來源的肝臟干細胞，再通過不斷增殖分化長成新的肝臟細胞、膽管細胞和毛細細胞，從而修復舊的肝組織和改善血液循環(huán)通路，阻斷肝硬化的發(fā)展過程，起到恢復功能和降低門靜脈高壓的作用，促使病肝重獲生機，最終起到延長病人生命和恢復健康的目的。與肝臟移植相比，雖然不能直接換一顆成形的肝臟，但能在患病的肝臟組織內(nèi)長出新的干細胞組織，具有殊途同歸，異曲同工之道。四、我院生物技術診斷與治療中心在間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)方面已具備的條件人員（執(zhí)業(yè)注冊情況、資歷、相關履歷）科研主要成員均為傳染病、消化科、血液學或免疫學等相關專業(yè)，且主要從事細胞生物學和分子生物學研究及臨床工作，細胞培養(yǎng)室工作人員均多年從事細胞培養(yǎng)工作，有豐富的細胞分離培養(yǎng)工作經(jīng)驗。其它見附件。設施設備試驗場所：我試驗室為GMP標準的試驗室，具備千級層流實驗室和百級超潔凈工作臺。儀器設備：血細胞分離機、CO2培養(yǎng)箱，臺式冷凍離心機，大容量落地低溫離心機，生物安全柜，顯微鏡，倒置顯微鏡、大容量培養(yǎng)瓶、冰箱礦20/-80。0，液氮罐（儲存箱），程序降溫儀，流式細胞儀，酶標儀，PCR儀等；其它見附件。3.輔助條件試劑：各種進口培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基、細胞因子和生長因子、單抗等等。耗材：培養(yǎng)瓶，離心管，電動移液器，血清移液管，凍存管，多孔板，臍血凍存袋，過濾器，移液槍，槍頭，細胞刮刀等。干細胞制劑體外分離純化的標準化作業(yè)程序(SOP)，包括從臨床干細胞治療體外分離的申請到干細胞移植后不良反應回報的整個治療過程。制定了質(zhì)量手冊、程序文件、管理文件以及各種記錄表格。與軍事醫(yī)學科學院干細胞研究機構等單位有合作關系等。4.風險評估及應急預案由于在干細胞移植的整個過程中，涉及到很多的臨床醫(yī)療技術的操作，每一個過程都有一定的風險，在整個過程中，其中可能的風險包括：①麻醉意外及其并發(fā)癥，重危者可危及生命；②治療中血管損傷，致出血不止、大出血休克，危及生命等情況，嚴重時需輸血或另行止血處理；③移植后發(fā)熱反應；④局部或全身各種感染及血液制品引起的疾病(如：病毒性肝炎、艾滋病、梅毒、瘧疾、巨細胞病毒;)⑤治療后效果不明顯，臨床癥狀和體征的改善與您的期望存在偏差，甚至治療無效；⑥治療后癥狀加重，或臨床有效時間較短，原有病情繼續(xù)進展，癥狀及體征加重；⑦干細胞動員期間，可能出現(xiàn)“白細胞瘀滯癥”，可發(fā)生呼吸困難、頭暈、言語不清等臨床表現(xiàn)，或其他心腦血管意外；⑧其他難以預料的危及生命、致殘的意外情況等等。其中常見的發(fā)熱、頭疼、腰背部及雙下肢酸痛、嘔吐，其他風險存在但是發(fā)生的風險非常低，目前為止沒有發(fā)生一例。應急處理可與相關科室聯(lián)系也可提前預設方案，如輸注前給予地塞米松靜脈注射。輸注干細胞時可另建一靜脈通路輸注魚精蛋白中和肝素。準備肌注非那根等藥，護理人員床旁監(jiān)護及相應的對癥處理。如骨髓動員過程出現(xiàn)發(fā)熱時及時對癥處理；采集時患者出現(xiàn)麻醉意外時采集室配備相關的急救措施；介入時意外時出血、疼痛、繼發(fā)感染，給予相應處理。心理護理：解釋干細胞移植的必要性、要求、程序、可能出現(xiàn)的并發(fā)癥以及預防并發(fā)癥的措施，減少病人緊張、孤獨感。移植后恢復期護理：做好生活護理，鼓勵進食高蛋白、高熱量、高維生素、易消化的飲食，協(xié)助進行適當活動，增強機體抵抗力。五、 醫(yī)學倫理審查報告我國在干細胞領域與西方國家的差距較其他領域小，受宗教影響也較小，公眾接受程度較高。隨著信息時代的發(fā)展，患者從廣播、電視、報紙、網(wǎng)絡了解到細胞治療的知識，越來越多的患者主動尋求細胞治療。從政府到基層，該項目的社會倫理適應性方面都被認可。不論是骨髓來源還是臍帶來源，間充質(zhì)干細胞屬于成體干細胞，與胚胎干細胞相比，其倫理學爭論問題不突出，已為社會各方面人士接受。干細胞治療技術安全性和有效性已被大量臨床實踐所驗證。異體細胞的移植可以與輸血相比，至于自體細胞回輸則不存在倫理學問題。醫(yī)學界稱干細胞為"萬能細胞”，也有人通俗而形象地稱其為"干什么都行的細胞”，盡管在臨床安全性方面尚未出現(xiàn)大問題，我們?nèi)匀粦撟⒁馄浒踩?，不要引起醫(yī)療爭端；同時要保護患者及捐獻者的隱私，注意不得泄露間充質(zhì)干細胞捐獻者及受者資料。六、 其它主要參考文獻：SchuppanD,AfdhalNH.Livercirrhosis.Lancet.2008;371(9615):838-51.KashaniA,LandaverdeC,MediciV,RossaroL.Fluidretentionincirrhosis:pathophysiologyandmanagement.QJM.2008;101⑵:71-85.Pittenger,M.F.,Mackay,A.M.,Beck,S.C.,Jaiswal,R.K.,Douglas,R.,Mosca,J.D.,Moorman,M.A.,Simonetti,D.W.,Craig,S.andMarshak,D.R.()Multilineagepotentialofadulthumanmesenchymalstemcells.Science1999;284,143-147Jiang,Y.,Jahagirdar,B.N.,Reinhardt,R.L.,Schwartz,R.E.,Keene,C.D.,Ortiz-Gonzalez,X.R.,Reyes,M.,Lenvik,T.,Lund,T.,Blackstad,M.etal.Pluripotencyofmesenchymalstemcellsderivedfromadultmarrow.Nature2002;418,41-49Alison,M.R.,Poulsom,R.,Jeffery,R.,Dhillon,A.P.,Quaglia,A.Jacob,J.,Novelli,M.,Prentice,G.,Williamson,J.andWright,N.A.Hepatocytesfromnon-hepaticadultstemcells.Nature2000;406,257-260Hong,S.H.,Gang,E.J.,Jeong,J.A.,Ahn,C.,Hwang,S.H.,Yang,I.H.,Park,H.K.,Han,H.andKim,H.Invitrohepaticdifferentiationofhumanmesenchymalstemcells.Hepatology2004;40,1275-1284Lee,K.D.,Kuo,T.K.,Whang-Peng,J.,Chung,Y.F.,Lin,C.T.,Chou,S.H.,Chen,J.R.,Chen,Y.P.andLee,O.K.Invitrodifferentiationofhumanumbilicalcordblood-derivedmesenchymalstemcellsintohepatocyte-likecells.Biochem.Biophys.Res.Commun.2005;330,1153-1161Banas,A.,Teratani,T.,Yamamoto,Y.,Tokuhara,M.,Takeshita,F.,Quinn,G.,Okochi,H.andOchiya,T.Adiposetissue-derivedmesenchymalstemcellsasasourceofhumanhepatocytes.Hepatology2007;46,219-228Fang,B.,Shi,M.,Liao,L.,Yang,S.,Liu,Y.andZhao,R.C.SystemicinfusionofFLK1(+)mesenchymalstemcellsamelioratecarbontetrachloride-inducedliverfibrosisinmice.Transplantation2004;78,83-88Sato,Y.,Araki,H.,Kato,J.,Nakamura,K.,Kawano,Y.,Kobune,M.,Sato,T.,Miyanishi,K.,Takayama,T.,Takahashi,M.etal.Humanmesenchymalstemcellsxenografteddirectlytoratliveraredifferentiatedintohumanhepatocyteswithoutfusion.Blood2005;106,756-763vanPoll,D.,Parekkadan,B.,Cho,C.H.,Berthiaume,F.,Nahmias,Y.,Tilles,A.W.andYarmush,M.L.Mesenchymalstemcell-derivedmoleculesdirectlymodulatehepatocellulardeathandregenerationinvitroandinvivo.Hepatology2008;47,1634-1643LeBlanc,K.,Rasmusson,I.,Sundberg,B.,Gotherstrom,C.,Hassan,M.,Uzunel,M.andRingden,O.Treatmentofsevereacutegraft-versus-hostdiseasewiththirdpartyhaploidenticalmesenchymalstemcells.Lancet2004;363,1439-1441TeraiS,IshikawaT,OmoriK,AoyamaK,MarumotoY,UrataY,YokoyamaY,UchidaK,YamasakiT,FujiiY,OkitaK,SakaidaI.Improvedliverfunctioninpatientswithlivercirrhosisafterautologousbonemarrowcellinfusiontherapy.StemCells2006;24,2292-2298Mohamadnejad,M.,Alimoghaddam,K.,Mohyeddin-Bonab,M.,Bagheri,M.,Bashtar,M.,Ghanaati,H.,Baharvand,H.,Ghavamzadeh,A.andMalekzadeh,R.Phase1trialofautologousbonemarrowmesenchymalstemcelltransplantationinpatientswithdecompensatedlivercirrhosis.Arch.IranMed.2007;10,459-466PALysy,DavidCampard,FrangoiseSmets,MustaphaNajimi,EtienneMSokal.Stemcellsforlivertissuerepair:Currentknowledgeandperspectives.WorldJGastroenterol2008;14(6),864-875StefaniaLorenzini,StefanoGitto,ElenaGrandini,PietroAndreone,MauroBernardi.Stemcellsforendstageliverdisease:Howfarhavewegot?WorldJGastroenterol2008;14(29),4593-4599ZhaoQ,RenH,ZhuDandHanZ.Stem/progenitorcellsinliverinjuryrepairandregeneration.Biol.Cell2009;101,557-571SarahSnykers,JoeryDeKock,VeraRogiers,TamaraVanhaecke.InVitrodifferentiationofembryonicandadultstemcellsintohepatocytes:StateoftheArt.StemCells2009;27,577-605ChamberlainG,FoxJ,AshtonBetal.Concisereview:mesenchymalstemcells:theirphenotype,differentiationcapacity,immunologicalfeatures,andpotentialforhoming.StemCells2007;25,2739-2749.OngSY,DaiH,LeongKW.Hepaticdifferentiationpotentialofcommerciallyavailablehumanmesenchymalstemcells.TissueEng2006;12,3477-3485.ChangYJ,LiuJW,LinPC,SunLY,PengCW,LuoGH,ChenTM,LeeRP,LinSZ,HarnHJ,ChiouTW.Mesenchymalstemcellsfacilitaterecoveryfromchemicallyinducedliverdamageanddecreaseliverfibrosis.LifeSci.2009;85(13-14):517-25.PulavendranS,VigneshJ,RoseC.Differentialanti-inflammatoryandanti-fibroticactivityoftransplantedmesenchymalvs.hematopoieticstemcellsincarbontetrachloride-inducedliverinjuryinmice.IntImmunopharmacol.2010;10(4):513-9.YuY,LuL,QianX,ChenN,YaoA,PuL,ZhangF,LiX,KongL,SunB,WangX.Antifibroticeffectofhepatocytegrowthfactor-expressingmesenchymalstemcellsinsmall-for-sizelivertransplantrats.StemCellsDev.2010;19(6):903-14.KimTH,KimJK,ShimW,KimSY,ParkTJ,JungJY.Trackingoftransplantedmesenchymalstemcellslabeledwithfluorescentmagneticnanoparticleinlivercirrhosisratmodelwith3-TMRI.MagnResonImaging.2010;28(7):1004-13.胡國華，沈來根.骨髓間充質(zhì)干細胞治療肝纖維化的研究進展.世界華人消化雜志2007;15(34),3587-3591KisselevaT,GiganteE,BrennerDA.Recentadvancesinliverstemcelltherapy.CurrOpinGastroenterol.2010;26(4):395-402.Kern,S.,Eichler,H.,Stoeve,J.,Kluter,H.andBieback,K..Comparativeanalysisofmesenchymalstemcellsfrombonemarrow,umbilicalcordblood,oradiposetissue.StemCells2006;24,12941301MohamadnejadM,AlimoghaddamK,Mohyeddin-BonabM,BagheriM,BashtarM,GhanaatiH,BaharvandH,GhavamzadehA,MalekzadehR.Phase1trialofautologousbonemarrowmesenchymalstemcelltransplantationinpatientswithdecompensatedlivercirrhosis.ArchIranMed.2007Oct;10(4):459-66.Erratumin:ArchIranMed.2008;11(1):135.柳林，楊海山，孫昱，于世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