激光共聚焦使用手冊講解課件

激光共聚焦顯微鏡FV1000-光譜掃描型-(倒置顯微鏡IX81)簡易使用說明書激光共聚焦顯微鏡啟動系統(tǒng) 3顯微鏡鏡下觀察

微分干涉差觀察 4

熒光觀察 5取圖的操作界面 6如何取圖 XY平面單標 7 XY平面雙標

同步掃描方式 10

序列掃描方式 13 XY平面

單標+微分干涉差 16 XYZ掃描雙標 19 XYL光譜掃描 212D操作界面 24圖像分析

打開文件 24 3D圖像的疊加 25

比例尺的使用 26 3D圖像的重建 27

3D圖像的旋轉(zhuǎn) 29 Unmixing 31

保存圖像 35保存到CD-R 36關(guān)閉系統(tǒng) 37附錄 38內(nèi)容啟動系統(tǒng) 3內(nèi)容1. 打開計算機.2.打開激光器.

(打開鑰匙開關(guān).)2-1. 多線氬離子(458nm,488nm,

514nm)ON(打開電源開關(guān)后,打開鑰匙開關(guān).)2-2. 氦氖綠(543nm)ON2-3. 氦氖紅(633nm)ON打開汞燈電源開關(guān).登陸WindowsXP系統(tǒng).雙擊快捷方式：

打開FV10-ASW應用軟件.*系統(tǒng)軟件的啟動需要等待一定時間.開啟系統(tǒng)5231UserID: Administrator

Password: fluoview

UserID: Administrator

Password: Administrator

1. 打開計算機.開啟系統(tǒng)5231UserID: A

微分干涉差觀察

1. 使用手控面板選擇物鏡.(參照

Memo.)2. 插入起偏鏡.3. 插入微分干涉滑塊.4. 點擊FV10-ASW軟件中的圖標.5. 標本聚焦.Memo按照7-1的操作轉(zhuǎn)換物鏡的倍率之后，對：●物鏡●各物鏡對應的DIC元件*進行操作.*DIC元件1234Note1. 使用TD滑塊控制鹵素燈的光強.Note2. 檢查濾色片轉(zhuǎn)盤的位置是否為“6.DICT”.如果不是,用手柄按下DICT圖標.

Note1顯微鏡鏡下觀察手控面板用此旋鈕進行微分干涉法對比度的調(diào)節(jié).微分干涉差觀察1. 使用手控面板選擇物鏡.

熒光觀察

123顯微鏡鏡下觀察Handswitch1. 使用手控面板選擇物鏡.2. 點擊FV10-ASW軟件中的圖標.3. 使用手控面板選擇熒光濾色片.

(參照

Memo.)4. 標本聚焦.Note2Notes1&3Note1. 選擇第3步后,顯微鏡進入熒光觀察狀態(tài).注意此時汞燈的機械快門要打開.(建議通常機械快門要放在關(guān)閉的位置().)Note2. 檢查DIC滑塊是否拉出.Memo

關(guān)于熒光濾色片NIBA：藍色激發(fā)/綠色熒光 （例：FITC、EGFP等）WIG：綠色激發(fā)/紅色熒光 （例：Rhodamine、DsRed等）Note3. 觀察之前，檢查汞燈的機械快門要放在開啟的位置().熒光觀察123顯微鏡鏡下觀察Handswitc圖像的拇指索引明場觀察

(顯微鏡鏡下觀察)熒光觀察

(顯微鏡鏡下觀察)染料選擇光路圖取圖條件的保存調(diào)出取圖條件TwinScanner

設(shè)定取圖的操作界面掃描的按鈕選擇XYZ,XYT或XYL每個通道的調(diào)節(jié)

共聚焦的孔徑大小鹵素燈的光強調(diào)節(jié)

Kalman方式圖像顯示窗口內(nèi)存中所顯示的文件掃描模式掃描速度像素數(shù)縮放和平移激光輸出的調(diào)節(jié)Lambda掃描的設(shè)定物鏡聚焦時間間隔和時間計數(shù)

(用于XYT或XT掃描)λ掃描帶寬選擇圖像的拇指索引明場觀察

(顯微鏡鏡下觀察)熒光觀察

(獲取單張圖像（XY平面）（熒光圖像）例：綠色熒光染色（FITC）點擊FV10-ASW軟件中的按鈕關(guān)閉汞燈快門.同時,點擊按鈕關(guān)閉鹵素燈快門.

點擊染料選擇按鈕.在染料列表中,雙擊用于觀察的熒光染料.

*取消當前熒光染料，選擇另外熒光染料，要雙擊已指定的熒光染料，并重復步驟2.3. 點擊Apply按鈕. (關(guān)閉染料選擇面板可以用Close按鈕.)123染料選擇后的顯示界面如何取圖(XY平面-單標)獲取單張圖像（XY平面）（熒光圖像）點擊FV10-AMemo

掃描控制面板 : 連續(xù)掃描 : 停止掃描 : 快速掃描(隔行掃描)456[1] 探測器的靈敏度調(diào)節(jié)(HV)[2] 共聚焦的孔徑大小調(diào)節(jié)(C.A.)[3] 激光輸出的調(diào)節(jié)(Laser)

[1][2][3]調(diào)節(jié)方法

(例:HV調(diào)節(jié)):點擊滑塊,HV直接提高(或降低)到指定的位置.點擊此按鈕

或者使用鼠標轉(zhuǎn)輪進行微調(diào).圖像調(diào)節(jié)略述如何取圖(XY平面-單標)4. 點擊XYRepeat按鈕開始掃描.5. 調(diào)節(jié)綠色(FITC)圖像.

(圖像調(diào)節(jié)的略述如下.

更多的信息,參照附錄1.)6. 點擊Stop按鈕停止掃描.(參照

Memo.)Memo

掃描控制面板456[1] 探測器的靈敏度調(diào)節(jié)78910如何取圖(XY平面-單標)7. 選擇AutoHV,并選擇掃描速度. * 隨著掃描速度變慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就會消除.

(也可以使用Kalmanaccumulation方式.

更多的信息，參照附錄2.)

8. 點擊XY按鈕取得一幅圖像.9. 點擊SeriesDone按鈕,“2DView-LiveImage(x)”2D界面就出現(xiàn).10. 保存該幅圖像:

右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標，選擇另存為保存該幅圖像.

(保存為“xml”類型是FV10-ASW軟件專用的圖像格式.)Memo

FV10-ASW專用的圖形格式OIF格式:

創(chuàng)建“一個含(16-bitTIFF)的圖像”和“一個附屬文件,”不能單獨分割.OIB格式:

創(chuàng)建單個的OIF格式的文件,方便進行移動和進行其它的操作.

78910如何取圖(XY平面-單標)7. 選擇AutoH123獲取單張圖像（XY平面）（熒光圖像）

例：綠色熒光（Alexa488）＋紅色熒光（Alexa546）二重染色同步掃描如何取圖(XY平面-雙標)點擊FV10-ASW軟件中的按鈕關(guān)閉汞燈快門.同時,點擊按鈕關(guān)閉鹵素燈快門.

點擊染料選擇按鈕.在染料列表中,雙擊用于觀察的熒光染料.

*取消當前熒光染料，選擇另外熒光染料，要雙擊已指定的熒光染料，并重復步驟2.3. 點擊Apply按鈕. (關(guān)閉染料選擇面板可以用Close按鈕.)染料選擇后的顯示界面123獲取單張圖像（XY平面）（熒光圖像）如何取圖456如何取圖(XY平面-雙標)Memo

掃描控制面板 : 連續(xù)掃描 : 停止掃描 : 快速掃描(隔行掃描)[1] 探測器的靈敏度調(diào)節(jié)(HV)[2] 共聚焦的孔徑大小調(diào)節(jié)(C.A.)[3] 激光輸出的調(diào)節(jié)(Laser)[1][2][3]調(diào)節(jié)方法

(例:HV調(diào)節(jié)):點擊滑塊,HV直接提高(或降低)到指定的位置.點擊此按鈕

或者使用鼠標轉(zhuǎn)輪進行微調(diào).圖像調(diào)節(jié)略述4. 點擊XYRepeat按鈕開始掃描.5. 調(diào)節(jié)綠色(AlexaFluor488)圖像和紅色(AlexaFluor546)圖像.

(圖像調(diào)節(jié)的略述如下.

更多的信息,參照附錄1.)6. 點擊Stop按鈕停止掃描.(參照

Memo.)456如何取圖(XY平面-雙標)Memo

掃描控制面78910如何取圖(XY平面-雙標)7. 選擇AutoHV,并選擇掃描速度. * 隨著掃描速度變慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就會消除.

(也可以使用Kalmanaccumulation方式.

更多的信息，參照附錄2.)

8. 點擊XY按鈕取得一幅圖像.9. 點擊SeriesDone按鈕,“2DView-LiveImage(x)”2D界面就出現(xiàn).10. 保存該幅圖像:

右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標，選擇另存為保存該幅圖像.

(保存為“xml”類型是FV10-ASW軟件專用的圖像格式.)Memo

FV10-ASW專用的圖形格式OIF格式:

創(chuàng)建“一個含(16-bitTIFF)的圖像”和“一個附屬文件,”不能單獨分割.OIB格式:

創(chuàng)建單個的OIF格式的文件,方便進行移動和進行其它的操作.

78910如何取圖(XY平面-雙標)7. 選擇AutoH123獲取單張圖像（XY平面）（熒光圖像）

例：綠色熒光（Alexa488）＋紅色熒光（Alexa546）二重染色序列掃描(這里介紹線序列掃描.)如何取圖(XY平面-雙標)點擊FV10-ASW軟件中的按鈕關(guān)閉汞燈快門.同時,點擊按鈕關(guān)閉鹵素燈快門.

點擊染料選擇按鈕.在染料列表中,雙擊用于觀察的熒光染料.

*取消當前熒光染料，選擇另外熒光染料，要雙擊已指定的熒光染料，并重復步驟2.3. 點擊Apply按鈕. (關(guān)閉染料選擇面板可以用Close按鈕.)染料選擇后的顯示界面123獲取單張圖像（XY平面）（熒光圖像）如何取圖4567如何取圖(XY平面-雙標)4. 點擊序列掃描,并選擇線序列方式.5. 點擊XYRepeat按鈕開始掃描.6. 調(diào)節(jié)綠色(AlexaFluor488)圖像和紅色(AlexaFluor546)圖像.

(圖像調(diào)節(jié)的略述如下.

更多的信息,參照附錄1.)7. 點擊Stop按鈕停止掃描.(參照

Memo.)[1] 探測器的靈敏度調(diào)節(jié)(HV)[2] 共聚焦的孔徑大小調(diào)節(jié)(C.A.)[3] 激光輸出的調(diào)節(jié)(Laser)[1][2][3]調(diào)節(jié)方法

(例:HV調(diào)節(jié)):點擊滑塊,HV直接提高(或降低)到指定的位置.點擊此按鈕

或者使用鼠標轉(zhuǎn)輪進行微調(diào).圖像調(diào)節(jié)略述4567如何取圖(XY平面-雙標)4. 點擊序列掃描,并891011如何取圖(XY平面-雙標)8. 選擇AutoHV,并選擇掃描速度. * 隨著掃描速度變慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就會消除.

(也可以使用Kalmanaccumulation方式.

更多的信息，參照附錄2.)

9. 點擊XY按鈕取得一幅圖像.10. 點擊SeriesDone按鈕,“2DView-LiveImage(x)”2D界面就出現(xiàn).11. 保存該幅圖像:

右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標，選擇另存為保存該幅圖像.

(保存為“xml”類型是FV10-ASW軟件專用的圖像格式.)Memo

FV10-ASW專用的圖形格式OIF格式:

創(chuàng)建“一個含(16-bitTIFF)的圖像”和“一個附屬文件,”不能單獨分割.OIB格式:

創(chuàng)建單個的OIF格式的文件,方便進行移動和進行其它的操作.

891011如何取圖(XY平面-雙標)8. 選擇Auto1234獲取單張圖像（XY平面）

（熒光圖像＋微分干涉）例：綠色熒光（FITC）+DIC圖像如何取圖(XY平面-單標+微分干涉差)

1. 點擊FV10-ASW軟件中的按鈕關(guān)閉汞燈快門.同時,點擊按鈕關(guān)閉鹵素燈快門.

點擊染料選擇按鈕.在染料列表中,雙擊用于觀察的熒光染料.

*取消當前熒光染料，選擇另外熒光染料，要雙擊已指定的熒光染料，并重復步驟2.3. 點擊Apply按鈕.(關(guān)閉染料選擇面板可以用Close按鈕.)4. 選擇TD1.染料選擇后的顯示界面1234獲取單張圖像（XY平面）如何取圖(XY平面-567如何取圖(XY平面-單標+微分干涉差)Memo

掃描控制面板 : 連續(xù)掃描 : 停止掃描 : 快速掃描(隔行掃描)[1] 探測器的靈敏度調(diào)節(jié)(HV)[2] 共聚焦的孔徑大小調(diào)節(jié)(C.A.)[3] 激光輸出的調(diào)節(jié)(Laser)[1][2][3]調(diào)節(jié)方法

(例:HV調(diào)節(jié)):點擊滑塊,HV直接提高(或降低)到指定的位置.點擊此按鈕

或者使用鼠標轉(zhuǎn)輪進行微調(diào).圖像調(diào)節(jié)略述5. 點擊XYRepeat按鈕開始掃描.

6. 調(diào)節(jié)綠色(FITC)圖像和微分干涉差的圖像.

(圖像調(diào)節(jié)的略述如下.

更多的信息,參照附錄1.)7. 點擊Stop按鈕停止掃描.(參照

Memo.)567如何取圖(XY平面-單標+微分干涉差)Memo891011如何取圖(XY平面-單標+微分干涉差)8.選擇AutoHV,并選擇掃描速度. * 隨著掃描速度變慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就會消除.

(也可以使用Kalmanaccumulation方式.

更多的信息，參照附錄2.)

9. 點擊XY按鈕取得一幅圖像.10. 點擊SeriesDone按鈕,“2DView-LiveImage(x)”2D界面就出現(xiàn).11. 保存該幅圖像:

右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標，選擇另存為保存該幅圖像.

(保存為“xml”類型是FV10-ASW軟件專用的圖像格式.)Memo

FV10-ASW專用的圖形格式OIF格式:

創(chuàng)建“一個含(16-bitTIFF)的圖像”和“一個附屬文件,”不能單獨分割.OIB格式:

創(chuàng)建單個的OIF格式的文件,方便進行移動和進行其它的操作.

891011如何取圖(XY平面-單標+微分干涉差)8.1458Memo

和

按鈕 :點擊移動1.0m. :點擊移動0.1m.267

獲取3D圖像(XYZ)

(熒光圖像)

例:綠色熒光(FITC)和紅色熒光(Rhodamine)雙標這里介紹線序列掃描取圖的過程.如何取圖(XYZ掃描-雙標)

1. 采用13和14頁步驟1到7.2. 輸入StepSize大小(點擊OP按鈕可以使用推薦的值),并選擇.3. 點擊XYRepeat按鈕開始掃描.4. 點擊

和按鈕上移焦點位置.

(參照Memo.)5. 當圖像顯示到達上限時,點擊Set按鈕確定.6. 點擊

和按鈕下移焦點位置.

(參照Memo.)7. 當圖像顯示到達下限時,點擊Set按鈕確定.8. 點擊Stop按鈕停止掃描.確定Z軸的上限和下限如下.1458Memo267獲取3D圖像(XYZ)

(910111312如何取圖(XYZ掃描-雙標)9. 選擇AutoHV,并選擇掃描速度. * 隨著掃描速度變慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就會消除.

(也可以使用Kalmanaccumulation方式.

更多的信息，參照附錄2.)

10. 選擇Depth按鈕.11. 點擊XYZ按鈕取得圖像.12. 點擊SeriesDone按鈕,“2DView-LiveImage(x)”2D界面就出現(xiàn).13. 保存該幅圖像:

右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標，選擇另存為保存該幅圖像.

(保存為“xml”類型是FV10-ASW軟件專用的圖像格式.)Memo

FV10-ASW專用的圖形格式OIF格式:

創(chuàng)建“一個含(16-bitTIFF)的圖像”和“一個附屬文件,”不能單獨分割.OIB格式:

創(chuàng)建單個的OIF格式的文件,方便進行移動和進行其它的操作.

910111312如何取圖(XYZ掃描-雙標)9. 選擇123*可以通過調(diào)用掃描狀態(tài)來實現(xiàn)該設(shè)置.更多的信息,參照附錄5.

獲取光譜圖像(XYL)

例:綠色熒光(AlexaFluor488)和綠色熒光(YOYO-1)雙標如何取圖(XYL光譜掃描)

1. 點擊FV10-ASW軟件中的按鈕關(guān)閉汞燈快門.同時,點擊按鈕關(guān)閉鹵素燈快門.

2. 點擊按鈕

檢查光路.3. 做如下設(shè)置.選擇BS20/80或DM405/488.選擇488nm作為激發(fā)光源.選擇Mirror.只選擇CHS1.123*可以通過調(diào)用掃描狀態(tài)來實現(xiàn)該設(shè)置.更多的信息,參45679如何取圖(XYL光譜掃描)

4. 點擊按鈕,出現(xiàn)光譜設(shè)置窗口.5. 設(shè)置CHS1光譜帶寬為10nm,以此為例.

(參照附錄4關(guān)于改變光譜帶寬的方法.)

6. 點擊XYRepeat按鈕開始掃描.7. 在觀察圖像的同時,移動光譜帶到圖像最亮的位置狀態(tài).

(參照附錄4關(guān)于改變光譜帶寬的方法.)

注: 移動光譜帶位置要保持光譜帶寬為10nm不變.8. 調(diào)節(jié)圖像.

(參照附錄1.)

9. 點擊Stop按鈕停止掃描.45679如何取圖(XYL光譜掃描)4. 點擊按鈕101112131514如何取圖(XYL光譜掃描)

10. 選擇AutoHV,并選擇掃描速度. * 隨著掃描速度變慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就會消除.

(也可以使用Kalmanaccumulation方式.

更多的信息，參照附錄2.)

11. 設(shè)定要掃描的波長范圍,光譜帶寬和步距.

Start=開始波長

End=結(jié)束波長

Resolution=光譜帶寬

StepSize=步距12. 選擇Lambda按鈕.13. 點擊XYL按鈕取得圖像.14. 點擊SeriesDone按鈕,“2DView-LiveImage(x)”2D界面就出現(xiàn).15. 保存該幅圖像:

右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標，選擇另存為保存該幅圖像..

(保存為“oib”和"oif"類型是FV10-ASW軟件專用的圖像格式.)101112131514如何取圖(XYL光譜掃描)10.1. 雙擊資源管理器中要選擇打開的文件.

1圖像分析(打開文件)2D的操作界面顯示狀態(tài)的切換1:1顯示幀的播放選擇結(jié)束幀投影的切換3D重建放大調(diào)整窗口的大小動畫播放速度選擇開始幀文本不同形狀的ROI區(qū)域網(wǎng)格箭頭比例尺點顏色條Ch1display

Ch2display點擊按鈕

轉(zhuǎn)換顯示模式1. 雙擊資源管理器中要選擇打開的文件.1圖像分析(打開文12圖像分析(3D圖像的疊加)

1. 點擊按鈕

并選擇.2. 要保存此圖像,右擊此圖像,選擇SaveDisplay并命名.12圖像分析(3D圖像的疊加)1. 點擊按鈕12345圖像分析(比例尺的使用)1. 點擊按鈕.2. 點擊圖像的同時,拖放此比例尺到一個特定的位置.3. 點擊手柄的左端或右端,移動鼠標.4. 選擇比例尺并右擊選擇屬性的設(shè)置.5. 設(shè)置具體的比例尺屬性.改變比例尺的大小改變文本,顏色,字體等.12345圖像分析(比例尺的使用)1. 點擊按鈕以一定的角度觀察3D圖像觀察3D圖像的某個橫截面1345圖像分析(3D圖像的重建)

1. 點擊按鈕.2. 創(chuàng)建3D圖像.3. 拖動鼠標以一定的角度觀察圖像.

要保存此圖像,進行下一頁第6步的操作.4. 點擊按鈕

并選定.5. 拖動鼠標觀察某個垂直橫斷面.

要保存此圖像,進行下一頁第6步的操作.以一定的角度觀察3D圖像觀察3D圖像的某個橫截面1345圖像保存上一頁中第3、5選項的圖像68圖像分析(3D圖像的重建)6. 點擊按鈕.7. 會創(chuàng)建一個2D圖像(帶文件名).8. 保存該幅圖像:

右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標，選擇另存為保存該幅圖像.

(保存為“xml”類型是FV10-ASW軟件專用的圖像格式.)Memo

FV10-ASW專用的圖形格式OIF格式:

創(chuàng)建“一個含(16-bitTIFF)的圖像”和“一個附屬文件,”不能單獨分割.OIB格式:

創(chuàng)建單個的OIF格式的文件,方便進行移動和進行其它的操作.

保存上一頁中第3、5選項的圖像68圖像分析(3D圖像的重建13動畫的播放4圖像分析(3D圖像的旋轉(zhuǎn))1. 點擊按鈕.2. 創(chuàng)建3D圖像.3. 拖動鼠標以一定的角度觀察圖像.4. 點擊并控制按鈕

實現(xiàn)圖像圍繞著X-軸旋轉(zhuǎn).

再次點擊停止旋轉(zhuǎn).

點擊并控制按鈕

實現(xiàn)圖像圍繞著Y-軸旋轉(zhuǎn).

再次點擊停止旋轉(zhuǎn).

點擊并控制按鈕

實現(xiàn)圖像圍繞著Z-軸旋轉(zhuǎn).

再次點擊停止旋轉(zhuǎn).13動畫的播放4圖像分析(3D圖像的旋轉(zhuǎn))1. 點擊按鈕要保存動態(tài)旋轉(zhuǎn)的圖像,請參照如下的方法創(chuàng)建3D圖像.例,試圖旋轉(zhuǎn)圖像180度.

5710689圖像分析(3D圖像的旋轉(zhuǎn))5. 點擊按鈕.6. 點擊Anglerotation菜單.7. 選擇旋轉(zhuǎn)軸.8. 輸入旋轉(zhuǎn)的角度.9. 選擇AVI類型并點擊Create按鈕.10. 輸入一個文件名并點擊Save按鈕.Start= 開始角度End= 結(jié)束角度Frame/s= 旋轉(zhuǎn)速度Interval= 單次旋轉(zhuǎn)的角度要保存動態(tài)旋轉(zhuǎn)的圖像,請參照如下的方法創(chuàng)建3D圖234圖像分析

(Unmixing)I.每種熒光染料的定位都很明顯的情形基于XYL圖像中類似熒光光譜相連的原則,通過已知的每種熒光染料的定位分解光譜并得到圖像.例:綠色熒光(AlexaFluor488)和綠色熒光(YOYO-1)雙標56Unmixedimage此處顯示分解光譜的通道分配1. 打開一幅AlexaFluor488和YOYO1雙標的XYL圖像.2. 分別為AlexaFluor488和YOYO1選定一個封閉的區(qū)域.3. 從Processing下拉菜單中選擇SpectralDeconvolution圖標.4. 雙擊ROI1和ROI2區(qū)域.5. 檢查處理類型設(shè)置為“Normal”并且點擊Execute按鈕.6. 獲得圖像.234圖像分析(Unmixing)基于XYL圖像中類似熒光23456記載的熒光光譜在此顯示.圖像分析

(Unmixing)II.基于使用單標樣品作參照的情形從單標記的XYL圖像中取出單個熒光光譜作為參照,進行光譜的分解并得到圖像.例:綠色熒光(AlexaFluor488)和綠色熒光(YOYO-1)雙標1. 打開一幅AlexaFluor488單標取樣的XYL圖像.2. 為AlexaFluor488選定一個封閉的區(qū)域.3. 從Processing下拉菜單中選擇SpectralDeconvolution圖標.4. 雙擊ROI1區(qū)域.5. 點擊SaveProfile圖標.6. 輸入保存的名字并且點擊OK按鈕將AlexaFluor488的光譜記載到數(shù)據(jù)庫中.7. 對于YOYO1單標,重復1-6步.23456記載的熒光光譜在此顯示.圖像分析(UnmixinUnmixedimage91011128圖像分析

(Unmixing)II.基于使用單標樣品作參照的情形此處顯示分解光譜的通道分配8. 打開一幅AlexaFluor488和YOYO1雙標的XYL圖像.9. 從Processing下拉菜單中選擇SpectralDeconvolution圖標.10. 雙擊數(shù)據(jù)庫中記載的AlexaFluor488和YOYO1圖標.11. 檢查處理類型設(shè)置為“Normal”并且點擊Execute按鈕.12. 獲得圖像.Unmixedimage91011128圖像分析(Unm2345圖像分析

(Unmixing)III. 基于只知道一定數(shù)量標記的熒光染料的情形

(BlindUnmixing)基于XYL圖像中類似熒光光譜相連的原則,通過已知的一定數(shù)量的熒光標記分解光譜并得到圖像.例:兩種類型熒光標記的樣品Unmixedimage此處顯示分解光譜的通道分配1. 打開一幅具有兩種類型熒光標記的XYL圖像.2. 從Processing下拉菜單中選擇SpectralDeconvolution圖標.3. 選中兩個檢查框用于計算.

(具有三種類型熒光標記時要選中三個檢查框.)4. 檢查處理類型設(shè)置為“Blind”并且點擊Execute按鈕.5. 獲得圖像.2345圖像分析(Unmixing)基于XYL圖像中類似熒XY或者XYZ圖像的每個通道存為TIFF格式的文件1. 右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標,選擇另存為保存該幅圖像..2. 設(shè)置Saveas類型為TIFF并保存.*存為BMP和JPEG格式也可以.12312圖像分析(保存圖像)

**********************************************************************************XY或者XYZ通道合并的圖像存為TIFF格式的文件帶有比例尺的圖像存為BMP格式的文件1. 右擊圖像管理器中顯示的圖像圖標,選擇另存為保存該幅圖像..2. 設(shè)置Saveas類型為TIFF并保存.3. 檢查要合并的通道并保存.*存為BMP和JPEG格式也可以.1. 右擊該幅圖像.2. 選擇SaveDisplay并以新的文件名保存該幅圖像.動態(tài)圖像存為AVI格式的文件1. 右擊該圖像.2. 選擇SaveasAVI并以新的文件名保存該圖像.XY或者XYZ圖像的每個通道存為TIFF格式的文件1. 右保存到CD-R2345761. 插入一張CD-R光盤.2. 點擊OK.3. 選擇文件并拖放到CD-R的窗口.4. 點擊"WritethesefilestoCD."5. 點擊Next.6. 開始刻錄.7. 點擊Finish按鈕結(jié)束.保存到CD-R2345761. 插入一張CD-R光盤.134關(guān)閉系統(tǒng)21. 選擇File/Exit,退出FV10-ASW軟件.2. 退出WindowsXP.(1) 選擇Start/ShutDown.(2) 在ShutDown窗口中,

選擇ShutDown并點擊OK