第二章-滅活疫苗課件

第二章

滅活疫苗

.第二章滅活疫苗

.1疫苗活疫苗-------減毒活疫苗減毒不夠：在使用時有致病的可能性過分減毒：造成免疫原性不足或喪失，失去活疫苗的效力滅活疫苗.疫苗活疫苗-------減毒活疫苗.2傳統(tǒng)的滅活疫苗將病原體(病毒、細(xì)菌及其他微生物)經(jīng)培養(yǎng)增殖、滅活、純化處理使其完全喪失感染性具有較好的安全性保留了病原體的幾乎全部組分具有較強的免疫原性.傳統(tǒng)的滅活疫苗將病原體(病毒、細(xì)菌及其他微生物)經(jīng)培養(yǎng)增殖、3傳統(tǒng)滅活疫苗的缺點制備滅活疫苗需要大量抗原難以培養(yǎng)或尚不能培養(yǎng)的病原體（乙型、丙型和戊型肝炎病毒及麻風(fēng)桿菌等）難以制備或無法以制備危險性大的病原體（艾滋病病毒）存在較大風(fēng)險基因工程手段---新型疫苗.傳統(tǒng)滅活疫苗的缺點制備滅活疫苗需要大量抗原基因工程手段---4第一節(jié)

滅活疫苗概述及現(xiàn)況.第一節(jié)滅活疫苗概述及現(xiàn)況.5一、滅活疫苗概述

滅活疫苗：用免疫原性強的病原微生物或其代謝產(chǎn)物，接種于動物、雞胚、組織或細(xì)胞培養(yǎng)物中生長繁殖后，經(jīng)滅活處理使其失去致病力，但仍保留免疫原性而制成的生物制劑。.一、滅活疫苗概述滅活疫苗：用免疫原性強的病原微生物或其代6滅活疫苗主要成分：由細(xì)菌體或病毒顆粒組成疫苗中含有的菌體或病毒顆粒是“死”的，故又稱作死疫苗。接種途徑：通常是注射途徑進入人體后不能生長繁殖，故比較安全、穩(wěn)定需多次接種，才能產(chǎn)生比較牢固的免疫力。.滅活疫苗主要成分：由細(xì)菌體或病毒顆粒組成.7滅活疫苗細(xì)菌性滅活疫苗1886年，加熱方法滅活豬霍亂菌1896年，制備全霍亂弧菌滅活免疫原1935年，福爾馬林乙型腦炎鼠腦疫苗1937年，用雞胚生產(chǎn)流腦滅活疫苗病毒性滅活疫苗1949年，發(fā)明人體胚胎組織體外培養(yǎng)方法，使病原體的體外培養(yǎng)成為可能.滅活疫苗細(xì)菌性滅活疫苗.8二、滅活疫苗的研究現(xiàn)狀

近年的研究方向:（1）針對其不足部分，進行不斷改進和完善；（2）探索新的研制途徑。.二、滅活疫苗的研究現(xiàn)狀近年的研究方向:.9二、滅活疫苗的研究現(xiàn)狀

具體來說：（1）增強其誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)、改進疫苗免疫效果、延長持續(xù)時間；（2）選擇新的滅活劑，并探索現(xiàn)有滅活劑對病原體的作用原理，不斷研制新疫苗。.二、滅活疫苗的研究現(xiàn)狀具體來說：.10二、滅活疫苗的研究現(xiàn)狀

病毒性滅活疫苗脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗甲型肝炎流行性乙型腦炎流感細(xì)菌性滅活疫苗

.二、滅活疫苗的研究現(xiàn)狀病毒性滅活疫苗.11（1）脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗

(inactivatedpoliomyelitisvaccine，IPV)研究始于1909年，但進展緩慢。1952年，Salk用猴腎上皮細(xì)胞培養(yǎng)了三個血清型的病毒1953年，制備出IPV(又稱Salk疫苗)免疫人體，獲得較高效價的血清中和抗體中和進入血液中的脊髓灰質(zhì)炎病毒，從而防止麻痹癥的出現(xiàn)。1955年開始在美國、加拿大和歐洲國家逐漸推廣使用，取得了良好的保護效果。.（1）脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗

(inactivatedp12（1）脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗的制備猴腎細(xì)胞、人二倍體細(xì)胞或Vero細(xì)胞病毒病毒懸液滅活37°C，pH7.0，福爾馬林（1:4000）脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗12--15天皮下注射三次接種.（1）脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗的制備猴腎細(xì)胞、人二倍體細(xì)胞或Ver13（2）甲型肝炎甲型肝炎病毒(hepatitisAvirus，HAV)引起的急性傳染病，主要通過糞-口途徑傳播。病毒的體外培養(yǎng)原代恒河猴肝細(xì)胞傳代恒河猴胚腎細(xì)胞株(FRhK6)HAV滅活疫苗Havrix（美國SmithKline公司）Vaqta（美國Merck公司）AVAXIM（法國巴斯德血清和疫苗研究所）

1979年，Provost和Hilleman.（2）甲型肝炎甲型肝炎病毒(hepatitisAviru14（3）流行性乙型腦炎夏秋季，經(jīng)蚊子叮咬傳播，是人畜共患的中樞神經(jīng)系統(tǒng)傳染病。1954年，滅活疫苗在日本問世（中山株/鼠腦）1968年，中國從開始生產(chǎn)（P3株/原代倉鼠腎細(xì)胞）1988年，WHO頒布了生產(chǎn)規(guī)程。

.（3）流行性乙型腦炎夏秋季，經(jīng)蚊子叮咬傳播，是人畜共患的中樞15（4）流感由流感病毒引起的，具有高度傳染性的急性呼吸道傳染病流行病學(xué)特點:突然暴發(fā)，迅速蔓延影響面大，發(fā)病率高伴有一定的死亡率。.（4）流感由流感病毒引起的，具有高度傳染性的急性呼吸道傳染病16（4）流感流感病毒的毒粒表面的抗原變異問題血凝素(hemagglutinin，HA)神經(jīng)氨酸酶(neuramindase，NA).（4）流感流感病毒的毒粒表面的抗原變異問題.17抗原性的變異形式

-------甲型流感病毒抗原漂移亞型內(nèi)HA和/或NA不斷發(fā)生點突變突變不斷積累，使抗原位點發(fā)生構(gòu)型改變導(dǎo)致人群特異性免疫失敗導(dǎo)致流感病毒流行抗原變異指一種新HA和/或NA亞型在人群中突然出現(xiàn)，起因未明。量變質(zhì)變.抗原性的變異形式

18流感病毒抗原特點：抗原的多變性抗原的漂移存在多種亞型（1）人類對流感病毒普遍的易感性（2）不易從以往獲得的抗體，得到有效的保護導(dǎo)致因此，雖然1937年就用雞胚培養(yǎng)流感病毒獲得成功，但至今尚無十分滿意的制品。.流感病毒抗原特點：（1）人類對流感病毒普遍的易感性導(dǎo)致因此，19流感病毒疫苗長春生物制品研究所新型精制三價流行性感冒滅活疫苗臨床免疫效果評價（2000年）臨床反應(yīng)輕微（0.98%）血清抗體陽轉(zhuǎn)率99%-100%1年以上好免疫力持續(xù)時間疫苗穩(wěn)定性總反應(yīng)率：與國外同類疫苗無明顯差別，具有良好的安全性。.流感病毒疫苗長春生物制品研究所臨床反應(yīng)輕微（0.98%）血清202.細(xì)菌性滅活疫苗

致病機理、免疫機理研究長期無突破性進展因此難以進行疫苗研制，使有些疾病長期得不到有效控制。細(xì)菌本身結(jié)構(gòu)組成復(fù)雜基礎(chǔ)研究的滯后.2.細(xì)菌性滅活疫苗細(xì)菌本身結(jié)構(gòu)組成復(fù)雜.212.細(xì)菌性滅活疫苗

存在問題：有些病原體屬于人畜共患，解決起來較為困難;消化道傳染病:疫苗誘生的局部免疫力較弱，免疫力持續(xù)時間較短，使用效果往往不好，易于重復(fù)感染;有的滅活疫苗副作用大，甚至引起嚴(yán)重后遺癥或造成死亡，可接受性極差。.2.細(xì)菌性滅活疫苗存在問題：.22（1）傷寒桿菌滅活疫苗傷寒桿菌----引起傷寒發(fā)病的主要病原1886年，英國的Wright、德國的Pfeiffer和Kolle分別制備出全菌體滅活疫苗丙酮滅活疫苗：保護率較高，但副反應(yīng)也高，難以推廣。Vi莢膜多糖疫苗：安全，但保護率又較低。.（1）傷寒桿菌滅活疫苗傷寒桿菌----引起傷寒發(fā)病的主要病原23（1）傷寒桿菌滅活疫苗新型傷寒疫苗Ty21a活疫苗口服活疫苗，保護率達(dá)96%，目前已在全世界使用;Vi莢膜多糖疫苗將傷寒桿菌培養(yǎng)后，對其Vi莢膜多糖抗原進行提純精制的一種組分疫苗制備工藝簡單，安全性好，已在全球推廣使用，目前我國多家生物制品單位均能生產(chǎn)。.（1）傷寒桿菌滅活疫苗新型傷寒疫苗.24（2）霍亂滅活疫苗霍亂弧菌引起的一種烈性傳染病1884年，F(xiàn)erran研制出霍亂疫苗（注射）保護期短，副反應(yīng)大。霍亂全菌體滅活疫苗(wholecellvaccine，WCV)霍亂WCV-霍亂毒素B亞單位(Bsubunitofcholeratoxin，CTB)對小鼠胃腸外免疫，能抵御霍亂毒素(choleratoxin，CT)2.25-3LD50的攻擊，免疫效果與CVD103-HgR減毒活疫苗相同。.（2）霍亂滅活疫苗霍亂弧菌引起的一種烈性傳染病.25（2）霍亂滅活疫苗口服B亞單位-全菌體(Bsubunit-wholecell，BS-WC)霍亂疫苗（1980’s，瑞典）疫苗的保護期：3年頭半年保護率是85%，3年后是51%。.（2）霍亂滅活疫苗口服B亞單位-全菌體(Bsubunit-26（2）霍亂滅活疫苗重組霍亂毒素B亞單位-全菌體疫苗(recombi-nantBsubunit-wholecell，rBS-WC),又稱凍干口服霍亂疫苗中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院（1997年）2000年取得國家一類新藥證書免疫保護時間：3年。獨到之處：生產(chǎn)B亞單位抗原的工程菌是大腸桿菌，較國外用霍亂減毒株工藝操作安全、方便;疫苗劑型是膠囊，較國外的水劑便于服用且價格低廉。.（2）霍亂滅活疫苗重組霍亂毒素B亞單位-全菌體疫苗(reco27（3）百日咳滅活疫苗兒童常見的呼吸道傳染病，傳染性強，臨床上主要引起痙孿性陣咳。1932年，Kendrick用羊血包姜培養(yǎng)基，經(jīng)硫柳汞滅活制備疫苗成功；1981年，純化百日咳桿菌抗原組成的無細(xì)胞百日咳疫苗（日本）優(yōu)點：青少年和成人較易接受，并有可能實施加強免疫。.（3）百日咳滅活疫苗兒童常見的呼吸道傳染病，傳染性強，臨床上28（3）百日咳滅活疫苗2001年3月，日本一個科研小組使用茶葉中的兒茶素制造無毒百日咳疫苗獲得成功，免疫功能更強，副作用更小。福爾馬林滅活的疫苗：常常引起炎癥等病癥兒茶素滅活的疫苗：不會產(chǎn)生這些副作用.（3）百日咳滅活疫苗2001年3月，日本一個科研小組使用茶葉29滅活疫苗的研究現(xiàn)狀

1.病毒性滅活疫苗脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗甲型肝炎流行性乙型腦炎流感2.細(xì)菌性滅活疫苗

傷寒桿菌霍亂百日咳3.

無針注射免疫法.滅活疫苗的研究現(xiàn)狀1.病毒性滅活疫苗.303.無針（噴射）注射器起源：美軍細(xì)菌戰(zhàn)的發(fā)明在疫苗接種的應(yīng)用：

1954年，白喉和破傷風(fēng)類毒素疫苗的大規(guī)模接種原理：通過細(xì)小、有高壓的疫苗液體流，直接注射到皮下。.3.無針（噴射）注射器起源：美軍細(xì)菌戰(zhàn)的發(fā)明.313.無針（噴射）注射器.3.無針（噴射）注射器.32無針注射法的免疫應(yīng)答效果法國和南非（共1500多人）流感滅活疫苗(Vaxigrip)Vi多糖傷寒疫苗(TyphimVi)破傷風(fēng)類毒素(Tetavax)百白破全細(xì)胞疫苗(DTCoq)甲肝滅活疫苗(Avaxim)與常規(guī)注射器在皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)等免疫途徑進行了比較。.無針注射法的免疫應(yīng)答效果法國和南非（共1500多人）.33無針注射法的免疫應(yīng)答效果評估標(biāo)準(zhǔn)血清抗體陽轉(zhuǎn)率抗體幾何平均滴度值注射部位的局部反應(yīng)結(jié)果抗白喉和抗破傷風(fēng)的陽轉(zhuǎn)率偏低其他的疫苗免疫效果均高于或與常規(guī)接種方法一致接種時的局部反應(yīng)都很小，而且都是瞬時的。.無針注射法的免疫應(yīng)答效果評估標(biāo)準(zhǔn).343.無針（噴射）注射器優(yōu)點：使用便捷，每次接種只需更換疫苗管；無需人員的專業(yè)培訓(xùn)；更好地激發(fā)機體產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答與常規(guī)肌內(nèi)注射相比，注射部位淺，但所造成的創(chuàng)面更大，而且疫苗被輸送到表皮深層，在這個部位有更多的免疫細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等)，抗原能夠更好地和這些細(xì)胞結(jié)合.3.無針（噴射）注射器優(yōu)點：.35三、聯(lián)合免疫研究現(xiàn)狀理想的疫苗：含有多種有良好免疫原性和穩(wěn)定性的抗原、生產(chǎn)成本低廉、接種途徑簡單以及一次接種能產(chǎn)生多種免疫和無毒副作用的疫苗。1991年，兒童免疫計劃(Children‘sVaccineInitiative，CVI）改進現(xiàn)有疫苗，并創(chuàng)制新的疫苗聯(lián)合免疫得到了進一步的推進。.三、聯(lián)合免疫研究現(xiàn)狀理想的疫苗：.36..37聯(lián)合疫苗的分類多聯(lián)疫苗預(yù)防不同病原體引起的傳染病百白破聯(lián)合疫苗——預(yù)防百日咳、白喉和破傷風(fēng)三種不同的傳染病多價疫苗僅預(yù)防一種病原體不同血清型引起的傳染病肺炎多糖疫苗——由代表23種不同血清型的細(xì)菌多糖組成，但只能預(yù)防肺炎球菌的感染。.聯(lián)合疫苗的分類多聯(lián)疫苗.38影響聯(lián)合免疫效果的因素聯(lián)合疫苗中各組分間的化學(xué)和物理作用可影響疫苗的免疫應(yīng)答。如佐劑、緩沖劑、貯存劑和賦形劑等通常需要重新配伍。.影響聯(lián)合免疫效果的因素聯(lián)合疫苗中各組分間的化學(xué)和物理作用可影39影響聯(lián)合免疫效果的因素多價疫苗問題較易解決，因疫苗中含有相同的成分，其中一個組分的穩(wěn)定配方通常適用于其他組分，但也需要對每一個組分做專門的測試以保證成品的理化配伍性和穩(wěn)定性?；畈《鹃g可相互干擾，如一個病毒可因激活免疫應(yīng)而產(chǎn)生干擾素從而抑制另一個病毒。.影響聯(lián)合免疫效果的因素多價疫苗.40影響聯(lián)合免疫效果的因素多聯(lián)疫苗一個組分的添加劑不一定能保證另一組分的穩(wěn)定性如：DTwcP/IPV聯(lián)合疫苗中，用于DTwcP的防腐劑硫柳汞可破壞IPV活性，故不能混裝在一個瓶中，需采用雙室注射器。DTwcP：百白破疫苗IPV：脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗.影響聯(lián)合免疫效果的因素多聯(lián)疫苗.41第二節(jié)

滅活疫苗制備的技術(shù)要求.第二節(jié)滅活疫苗制備的技術(shù)要求.42一、滅活疫苗的設(shè)計要求

1.制備過程病原體的培養(yǎng)滅活劑和滅活方法的使用疫苗的后處理.一、滅活疫苗的設(shè)計要求1.制備過程.43（1）病原體的選擇①必需具有很強的免疫原性②具有恒定的培養(yǎng)特性和生化特性，不易變異③易于在人工培養(yǎng)基上或特定的組織或細(xì)胞中培養(yǎng)并可進行規(guī)模化生產(chǎn).（1）病原體的選擇①必需具有很強的免疫原性.44病原體的選擇④在培養(yǎng)過程中不產(chǎn)生或產(chǎn)生較小的毒性;⑤制備類毒素的菌種：在培養(yǎng)過程中能產(chǎn)生大量的典型毒素;⑥要針對不同的病原血清型選擇符合當(dāng)?shù)亓餍械木?、毒株，以保證所制造的疫苗具有良好的免疫效果.病原體的選擇④在培養(yǎng)過程中不產(chǎn)生或產(chǎn)生較小的毒性;.45滅活方法的選擇滅活方法的選擇關(guān)系到疫苗質(zhì)量的好壞滅活劑（關(guān)鍵）滅活條件滅活時間既要考慮其對疫苗抗原性的破壞作用，同時又要避免其對毒素的脫毒后又發(fā)生毒性逆轉(zhuǎn)現(xiàn)象。.滅活方法的選擇滅活方法的選擇關(guān)系到疫苗質(zhì)量的好壞.46細(xì)菌性滅活疫苗和類毒素的制備工藝.細(xì)菌性滅活疫苗和類毒素的制備工藝.47福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素研究證明:很低濃度的福爾馬林即能使外毒素完全脫毒并能保持其良好的免疫原性，表明福爾馬林是一個較為理想的脫毒劑。福爾馬林的脫毒作用較為復(fù)雜，在使用時要特別注意影響福爾馬林脫毒的四個因素.福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素研究證明:.48福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素溫度pH福爾馬林濃度毒素種類這四者相互聯(lián)系、相互影響，改變其中任何一個因素都會產(chǎn)生不同的結(jié)果，故在制備疫苗時要綜合考慮，選擇最佳的脫毒條件。.福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素溫度這四者相互聯(lián)系、相互影響，49福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素①溫度在其他因素固定的條件下溫度越高，脫毒越快脫毒溫度↓類毒化時間就會延長如需加快作用時間：必須提高福爾馬林濃度和pH。.福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素①溫度.50福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素①溫度-----視具體的疫苗種類而定一般脫毒溫度：37℃-39℃脫毒溫度≥40℃破壞外毒素的抗原性產(chǎn)生外毒素的菌種：在較低溫度下脫毒效果更好.福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素①溫度-----視具體的疫苗種51福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素②微酸條件下（pH6.3）脫毒時間很慢，需要較高的福爾馬林濃度如福爾馬林濃度較高，脫毒完成后會剩余較多的游離福爾馬林，使類毒素的脫毒過甚，損害了類毒素效力的穩(wěn)定性。.福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素②微酸條件下（pH6.3）.52福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素②堿性條件下脫毒快，可用較低的福爾馬林濃度。pH=7.2~8.6，福爾馬林濃度的使用和pH成反比。在強堿性溶液中脫毒，類毒素的抗原性損失會加大。因此，外毒素脫毒時pH很重要，通常以微堿性為最好。.福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素②堿性條件下.53福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素③福爾馬林濃度福爾馬林濃度∝脫毒速率濃度越高，脫毒時間越快，其抗原性的損失也越大。.福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素③福爾馬林濃度.54福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素④毒素的種類不同種類外毒素分子量和分子結(jié)構(gòu)不一，不同菌株要使用不同培養(yǎng)基不同的外毒素中均含有不同種類及不同濃度的含氮物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、肽類和氨基酸等，這些化合物都能與福爾馬林起作用。所以，不同外毒素在脫毒時所使用的溫度、pH和福爾馬林濃度是不一樣的.福爾馬林對外毒素脫毒的影響因素④毒素的種類.55二、病毒性滅活疫苗的設(shè)計及制備要求

病毒病原體自身的結(jié)構(gòu)組成和生物學(xué)活性較為簡單，在考慮制備滅活疫苗時，一般將全部病毒顆粒用來作為疫苗抗原，以尋求其最佳的保護效果。.二、病毒性滅活疫苗的設(shè)計及制備要求

病毒病原體自身的結(jié)構(gòu)組56病毒性滅活疫苗的優(yōu)點①制備工藝較為成熟，免疫原的穩(wěn)定性高，培養(yǎng)的病毒含量達(dá)到要求滴度即可進行大量生產(chǎn)，較易制備多價疫苗;②由于不存在活病毒顆粒，沒有感染問題，安全性好;③保存方便，一般無需凍干保存。.病毒性滅活疫苗的優(yōu)點①制備工藝較為成熟，免疫原的穩(wěn)定性高，培57病毒性滅活疫苗的缺點①制備疫苗的毒株為強毒株，如在制備過程中滅活不徹底，極易釀成重大事故;②由于所誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)持續(xù)時間較短，需多次進行免疫接種，可能引起過敏反應(yīng);③由于需要的抗原量大、質(zhì)純，因此要求對疫苗進行濃縮和純化；.病毒性滅活疫苗的缺點①制備疫苗的毒株為強毒株，如在制備過程中58病毒性滅活疫苗的缺點④由于滅活疫苗接種不是通過自然感染途徑，一般不能誘生局部IgA免疫抗體，使外來病毒仍可侵入門戶，并在局部繁殖，保護效果不甚滿意;5由于滅活劑對病毒的抗原性有一定影響，滅活疫苗需要添加佐劑。.病毒性滅活疫苗的缺點④由于滅活疫苗接種不是通過自然感染途徑，59病毒性滅活疫苗制備工藝流程.病毒性滅活疫苗制備工藝流程.60第三節(jié)

疫苗滅活方法對機體免疫應(yīng)答的影響.第三節(jié)疫苗滅活方法對機體免疫應(yīng)答的影響.61一、滅活方法及其作用原理1.物理作用滅活

加熱紫外線.一、滅活方法及其作用原理1.物理作用滅活.62加熱滅活原理：使蛋白質(zhì)變性從而使病原體失去傳染性簡單有效56-57℃水浴1h注意:使內(nèi)容物受熱均勻不同的病原體對熱的耐受性不同.加熱滅活原理：.63紫外線照射滅活原理使病原體的DNA形成TT二聚體，無法作為模板轉(zhuǎn)錄為mRNA，不能復(fù)制子代DNA與合成蛋白，從而使病原體失去感染性。優(yōu)點在DNA、RNA水平上對病原體進行滅活，最大限度地保留了抗原的完整性和免疫原性。尚未運用于實際的疫苗生產(chǎn)滅活程度不完全，且病原體有光復(fù)活的可能。.紫外線照射滅活原理.642.化學(xué)作用滅活

滅活劑福爾馬林、丙酮、苯酚β-丙內(nèi)酯(β-propiolactone，BPL)乙烯亞胺(ethylenimine)雙乙烯亞胺(binaryethylenimine，BEl)磷酸三丁酯、乙醇、硫柳汞等。.2.化學(xué)作用滅活

滅活劑.65（1）福爾馬林傳統(tǒng)的滅活劑，應(yīng)用最廣泛。滅活機理：作用于病毒核酸病毒核酸中含氨基的核苷酸堿基(腺嘌呤、鳥嘌呤和胞嘧啶)發(fā)生反應(yīng)。作用于病毒殼蛋白使氨基酸或氨基酸基團暴露，引起蛋白質(zhì)變性以阻礙核酸從病毒顆粒中釋放，使病毒失去感染力。.（1）福爾馬林傳統(tǒng)的滅活劑，應(yīng)用最廣泛。.66（1）福爾馬林滅活病毒的種類：乙型腦炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、流感病毒、狂犬病毒、森林腦炎病毒、委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒、巨細(xì)胞病毒、甲型肝炎病毒和HlV等滅活細(xì)菌的種類：傷寒桿菌、短棒狀桿菌、綠版桿菌等。.（1）福爾馬林滅活病毒的種類：.67（1）福爾馬林疫苗內(nèi)殘余的福爾馬林含量較高時(1:2000)注射局部可引起疼痛使用亞硫酸氫鈉中和后可消除痛感。.（1）福爾馬林疫苗內(nèi)殘余的福爾馬林含量較高時(1:200068（2）β-丙內(nèi)酯(β-propiolactone，BPL)廣泛地應(yīng)用于多種人和動物疫苗的生產(chǎn)可能作用機理：作用于病原體的DNA和RNA，而不直接作用于蛋白。它能在機體內(nèi)完全分解為無毒性的β-羥丙酸，這是一種人體內(nèi)脂肪代謝后的產(chǎn)物，對人體和動物體無毒。.（2）β-丙內(nèi)酯(β-propiolactone，BPL69（2）β-丙內(nèi)酯（BPL）一種不穩(wěn)定的液體加熱37℃2h能自行水解為一種無毒的物質(zhì)，也可加入亞硫酸鈉停止其反應(yīng)。1984年被選作狂犬滅活疫苗的滅活劑正式使用.（2）β-丙內(nèi)酯（BPL）一種不穩(wěn)定的液體.70（2）β-丙內(nèi)酯（BPL）缺點:①本身具有致癌性，對工作人員仍有致癌作用，需要加以特殊防護;②BPL可以改變?nèi)搜灏椎鞍椎男再|(zhì)，引起人體全身性的變態(tài)反應(yīng)，因此所滅活的病毒培養(yǎng)液中不能含有人血清白蛋白.（2）β-丙內(nèi)酯（BPL）缺點:.71（3）乙烯亞胺和雙乙烯亞胺乙烯亞胺滅活原理：類似于β-丙內(nèi)酯(BPL)無論在安全性還是保持疫苗的抗原性方面都較福爾馬林更為優(yōu)越。1955年滅活噬菌體口蹄疫疫苗，己在世界范圍內(nèi)生產(chǎn)使用.（3）乙烯亞胺和雙乙烯亞胺乙烯亞胺.72（3）乙烯亞胺和雙乙烯亞胺雙乙烯亞胺（BEl）在堿性環(huán)境中由單體的乙烯亞胺結(jié)晶后形成更穩(wěn)定、更安全BEl和BPL的滅活效果比用福爾馬林幾乎高兩倍。.（3）乙烯亞胺和雙乙烯亞胺雙乙烯亞胺（BEl）.73二、病毒滅活對機體免疫應(yīng)答的影晌

不同滅活劑對不同病原體的作用機制不同，對疫苗的免疫原性影響各異，導(dǎo)致疫苗接種后不同的機體免疫應(yīng)答。一般來講，滅活疫苗所誘導(dǎo)的免疫水平較低，僅能誘導(dǎo)較低滴度的抗體水平，很難激發(fā)細(xì)胞免疫。.二、病毒滅活對機體免疫應(yīng)答的影晌

不同滅活劑對不同病原體的74二、病毒滅活對機體免疫應(yīng)答的影晌

主要原因：①滅活使病原體的蛋白質(zhì)受到破壞，有的變性失去了免疫原性;②滅活后的病原體蛋白經(jīng)過補體加工處理后，其肽段上的表位受到破壞，被抗原遞呈細(xì)胞(APC)遞呈給MHC-I類分子時，MHC-I類分子對這些表位的識別受到了限制，很難激發(fā)細(xì)胞免疫的產(chǎn)生。.二、病毒滅活對機體免疫應(yīng)答的影晌主要原因：.75不同滅活方法對疫苗免疫原性的影響Indiana型水泡性口炎病毒

（VSV）滅活方法：福爾馬林：0.00625%，4°C作用18hβ-丙內(nèi)酯：0.1%，4°C作