細(xì)菌內(nèi)毒素測定技術(shù)-細(xì)菌內(nèi)毒素檢查前準(zhǔn)備工作

知識點(diǎn)2：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查前準(zhǔn)備工作一、器具試驗所用的器皿需經(jīng)處理，以去除可能存在的外源性內(nèi)毒素。常用的方法是在250℃干烤至少60分鐘，也可采用其他確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的適宜方法。若使用塑料器械，如微孔板和與微量加樣器配套的吸頭等，應(yīng)選用標(biāo)明無內(nèi)毒素并且對試驗無干擾的器械。試驗操作過程應(yīng)防止微生物的污染。

知識點(diǎn)2：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查前準(zhǔn)備工作一、器具試驗所用的器皿需經(jīng)處理，以去除可能存在的外源性內(nèi)毒素。常用的方法是在250℃干烤至少60分鐘，也可采用其他確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的適宜方法。若使用塑料器械，如微孔板和與微量加樣器配套的吸頭等，應(yīng)選用標(biāo)明無內(nèi)毒素并且對試驗無干擾的器械。試驗操作過程應(yīng)防止微生物的污染。

知識點(diǎn)2：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查前準(zhǔn)備工作二、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET水的要求）：凝膠法細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水系指內(nèi)毒素含量小于0.015EU/ml的滅菌注射用水。光度測定用的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，其內(nèi)毒素的含量應(yīng)小于0.005EU/ml。

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三、供試品溶液的制備

某些供試品需進(jìn)行復(fù)溶、稀釋或在水性溶液中浸提制成供試品溶液。一般要求供試品溶液的pH在6.0—8.0的范圍內(nèi)。對于過酸、過堿或本身有緩沖能力的供試品，需調(diào)節(jié)被測溶液（或其稀釋液）的pH，可使用酸、堿溶液或適宜的緩沖液調(diào)節(jié)pH。酸或堿溶液須用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水在已去除內(nèi)毒素的容器中配制。緩沖液必須經(jīng)過驗證不含內(nèi)毒素和干擾因子。知識點(diǎn)2：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查前準(zhǔn)備工作

四、內(nèi)毒素限值的確定細(xì)菌內(nèi)毒素的量值和細(xì)菌內(nèi)毒素的限值（L）為保證用藥安全，給每一種藥物規(guī)定了相應(yīng)的限值（L），只要低于該限值，按照規(guī)定給藥途徑即為安全。1EU與1個內(nèi)毒素國際單位(IU)相當(dāng)。知識點(diǎn)2：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查前準(zhǔn)備工作

藥品、生物制品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值(L)一般按下式確定：

L=K/M

式中，L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值；K為人每千克體重每小時最大可接受的內(nèi)毒素劑量；M為人用每千克體重每小時的最大供試品劑量。知識點(diǎn)2：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查前準(zhǔn)備工作

哺乳動物對細(xì)菌內(nèi)毒素有一定的耐受能力，因此不必要求藥物絕對不含內(nèi)毒素，只要不超過一定限度就不會引起熱原反應(yīng)。為保證用藥安全，給每一種藥物規(guī)定了相應(yīng)的限值(L)，只要低于該限值，按照規(guī)定給藥途徑即為安全。內(nèi)毒素檢查的目的就是確定藥品內(nèi)毒素值是否低于限值。限值的確定有兩種方式，即從藥典中查詢和根據(jù)公式計算。各國藥典規(guī)定做細(xì)菌內(nèi)毒素檢查項的品種都可在藥典正文中查到相應(yīng)的限值。知識點(diǎn)2：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查前準(zhǔn)備工作五、最大有效稀釋倍數(shù)的確定（MVD）

最大有效稀釋倍數(shù)是指在試驗中供試品溶液被允許達(dá)到稀釋的最大倍數(shù)（1一MVD），在不超過此稀釋倍數(shù)的濃度下進(jìn)行內(nèi)毒素限值的檢測。用下式來確定MVD：

MVD=cL/λ

式中：L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值；

c為供試品溶液的濃度；

λ為在凝膠法中鱟試劑的標(biāo)示靈敏度，或是在光度測定法中所使用的標(biāo)準(zhǔn)曲線上最低的內(nèi)毒素濃度。知識點(diǎn)2：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查前準(zhǔn)備工作【例】最小有效稀釋濃度(MVC)的計算設(shè)鱟試劑的靈敏度為0.25EU/ml，即λ=0.25EU/ml，枸櫞酸的內(nèi)毒素限值L為0.51U/mg（IU與EU等同），計算其最小