雜環(huán)類藥物的分析-吡啶類藥物（藥物分析課件）

四、含量測定（一）氧化還原滴定法（溴酸鉀滴定法，溴量法，鈰量法和剩余碘量法）

利用異煙肼的還原性（二）非水溶液滴定法尼可剎米含量的測定:稱取該藥物，用冰醋酸為溶劑，結(jié)晶紫為指示劑，用高氯酸滴定至溶液顯藍(lán)綠色，并對滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。非水溶液滴定法

溶劑的分類質(zhì)子溶劑酸性溶劑堿性溶劑兩性溶劑非質(zhì)子溶劑偶極親質(zhì)子溶劑惰性溶劑冰醋酸丙酸乙二胺液氨甲醇乙醇二甲基甲酰胺吡啶苯氯仿原理

BH＋·A－＋HClO4→BH＋·ClO4＋HA一般方法冰醋酸作為溶劑，若滴定氫鹵酸鹽，則加5%醋酸汞的冰醋酸溶液，用高氯酸(0.1mol/L)滴定，并用空白試驗(yàn)校正。問題討論適用范圍：Kb＜10-8的有機(jī)堿鹽酸根影響：高氯酸＞氫溴酸＞硫酸＞鹽酸＞硝酸滴定劑穩(wěn)定性：溫度、貯藏條件都有影響終點(diǎn)指示方法：結(jié)晶紫指示劑，電位法（三）紫外-可見分光光度法芳雜環(huán)在紫外光區(qū)有特征吸收。（四）高效液相色譜法高效液相色譜法，在雜環(huán)類藥物的含量測定中，應(yīng)用越來越廣泛，其中80%以上是采用反相高效液相色譜法。二、鑒別試驗(yàn)（一）吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)

本反應(yīng)適用于吡啶環(huán)的α、α’位無取代基的異煙肼和尼可剎米。1.戊烯二醛反應(yīng)（k?ning反應(yīng)）尼可剎米+溴化氰H2O戊烯二醛+苯胺黃色（黃色~黃棕色）Chp

尼克剎米鑒別反應(yīng)：取本品1滴，加水50ml，搖勻，分取2ml，加溴化氰試液2ml與2.5％苯胺溶液3ml，搖勻，溶液漸顯黃色。2.二硝基氯苯反應(yīng)（Vongerichten反應(yīng)）吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯

至熔融或混合

醇制KOH紫紅色無水條件

采用本法鑒別異煙肼、尼可剎米時(shí)，需適當(dāng)處理，即將酰肼氧化成羧基或?qū)Ⅴ０匪鉃轸然筮M(jìn)行鑒別。如異煙肼鑒別：(二)酰肼基反應(yīng)※銀鏡反應(yīng)異煙肼+氨制AgNO3→Ag↓+N2↑原理：還原性：異煙肼吡啶環(huán)γ位被酰肼所取代，有較強(qiáng)的還原性，可被不同的氧化劑氧化，也可與某些含有羰基的化合物發(fā)生縮合反應(yīng)。+4AgNO3+5NH3·H2O+4Ag↓+N2↑+4NH3NO3+4H2OChp取本品約10mg，置試管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸銀試液1ml，即發(fā)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。與亞硒酸作用，可將其還原為紅色硒的沉淀

+SeO2→+N2↑+Se↓+H2O

縮合反應(yīng)酰肼基與芳醛縮合成腙，具有固定的熔點(diǎn)。+→異煙腙（黃色結(jié)晶）香草醛異煙肼Chp：異煙肼取本品約0.1g，加水5ml溶解后，加10％香草醛的乙醇溶液1ml，搖勻，微熱，放冷，即析出黃色結(jié)晶；濾過，用稀乙醇重結(jié)晶，在105℃干燥后，依法測定（附錄ⅥC），熔點(diǎn)為228～231℃，熔融時(shí)同時(shí)分解。異煙肼、尼克剎米等與無水碳酸鈉或氫氧化鈣共熱，可發(fā)生脫羧降解，并有吡啶臭味逸出。（三）分解產(chǎn)物的反應(yīng)尼克剎米：除了吡啶環(huán)上的N原子外，吡啶環(huán)β位被酰氨基取代，遇堿水解釋放二乙胺。Chp：尼可剎米取本品10滴，加氫氧化鈉試液3ml，加熱，即發(fā)生二乙胺的臭氣，能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變藍(lán)色。吡啶環(huán)結(jié)構(gòu)可與重金屬鹽類或苦味酸形成沉淀（四）沉淀反應(yīng)尼可剎米+CuSO4+2NH4SCN→草綠色沉淀+(NH4)2SO4異煙肼+CuSO4→紅棕色沉淀異煙肼+HgCl2→白色沉淀Chp：尼可剎米取本品2滴，加水1ml，搖勻，加硫酸銅試液2滴與硫氰酸銨試液3滴，即生成草綠色沉淀。異煙肼+（酸性）碘化鉍鉀→紅棕色沉淀（五）紫外吸收光譜鑒別

芳雜環(huán)在紫外光區(qū)有特征吸收

藥物溶劑λmax

(nm)

λmax

(nm)E1％異煙肼HCl(0.01mol/L)265－約420水266－378尼克剎米HCl(0.01mol/L)263－285NaOH255260840/860硝苯地平無水乙醇237333-/140尼群地平無水乙醇236353所有的原料藥都進(jìn)行紅外光譜圖的鑒別《中國藥典》2010年版收載的異煙肼、尼可剎米和硝苯地平均采用紅外分光光度法進(jìn)行鑒別，供試品的紅外吸收圖譜應(yīng)與對照圖譜一致。（六）紅外吸收光譜鑒別

第十章雜環(huán)類藥物的分析第一節(jié)吡啶類藥物

第二節(jié)吩噻嗪類藥物1.掌握吡啶類、吩噻嗪類藥物鑒別的基本原理

2.熟悉本類藥物特殊雜質(zhì)檢查的項(xiàng)目與方法

3.

了解本類藥物的含量測定方法

吡啶類喹啉類托烷類吩噻嗪類苯駢二氮雜卓類雜環(huán)類藥物有機(jī)酸酯雜環(huán)類藥物共性:

合成藥物中所占比例最多的一大類藥物多為五元環(huán)或六元環(huán),單雜環(huán)或稠雜環(huán)

雜環(huán)結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定,不易開環(huán),其性質(zhì)受雜原子種類、數(shù)目、位置影響雜環(huán)上取代基性質(zhì)較活潑,常用于分析含氮雜環(huán),根據(jù)其堿性的強(qiáng)弱選擇分析手段第一節(jié)吡啶類藥物

一、結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)

含有N原子的六元單環(huán)異煙肼、尼克剎米和硝苯地平異煙肼Isoniazid異煙肼與其它抗結(jié)核藥聯(lián)合，適用于各型結(jié)核病的治療異煙肼單用適用于各型結(jié)核病的預(yù)防

αβγ開環(huán)反應(yīng)酰肼基結(jié)構(gòu)具有較強(qiáng)的還原性，可與不同的氧化劑反應(yīng)可以和含有羰基的化合物發(fā)生縮合反應(yīng)尼克剎米Nikethamide用于中樞性呼吸抑制及循環(huán)衰竭，對苯巴比妥類藥的解救效力較好?？捎糜诎⑵愃幬锶鐔岱戎卸荆瑖?yán)重傳染病所致的呼吸衰竭的解救

酰胺基堿性可水解，生成NH(C2H5)2↑,用于鑒別硝苯地平Nifedipine1．心絞痛：變異型心絞痛；不穩(wěn)定型心絞痛；慢性穩(wěn)定型心絞痛2．高血壓（單獨(dú)或與其它降壓藥合用）。

二氫吡啶環(huán)：見光易分解苯硝基：具有還原性（二）主要化學(xué)性質(zhì)1.弱堿性吡啶環(huán)上的氮為堿性氮原子，吡啶環(huán)的pKb值為8.8（水中）。尼可剎米除了吡啶環(huán)上氮外，β位上被酰氨基取代。酰氨基化學(xué)性質(zhì)不甚活潑，但遇堿水解后釋放出具有堿性的二乙胺，故可以進(jìn)行鑒別。

2．還原性異煙肼的吡啶環(huán)γ位上被具有還原性酰肼取代，可被氧化劑氧化，可與含羰基的化合物發(fā)生縮合反應(yīng)。

3．吡啶環(huán)的特性異煙肼和尼可剎米的吡啶環(huán)α、α’位未取代，而β或γ位被羧基衍生物所取代；硝苯地平的吡啶環(huán)β、β’位被甲酸甲酯所代，其吡啶環(huán)可發(fā)生開環(huán)反應(yīng)。

三、有關(guān)物質(zhì)檢查

一、異煙肼中游離肼的檢查

異煙肼不穩(wěn)定，游離肼即可能在原料中引入，又可能在貯藏過程中降解誘變劑和致癌物1、TLC

：供試品溶液：取本品，加水制成每1ml中含100mg的溶液。對照溶液：取硫酸肼加水制成每1ml中含0.08mg（相當(dāng)于游離肼20μg）的溶液。吸取供試品溶液與對照溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以異丙醇－丙酮(3:2)為展開劑展開。檢視噴以乙醇制對二甲氨基苯甲醛試液，15min后檢視。在供試品主斑點(diǎn)前方與硫酸肼斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上，不得顯黃色斑點(diǎn)。雜質(zhì)限量：0.02%2、比濁法J.P（14）采用樣品中加水楊醛的乙醇溶液觀察混濁的方法來控制游離肼的限量。此法專屬性差，因異煙肼(慢)和硫酸肼均生成腙而析出沉淀。3、差示分光光度法吸光度A在0.2-0.8范圍內(nèi)誤差最小。超出此范圍，如高濃度或低濃度溶液，其吸光度測定誤差較大。尤其是高濃度溶液，更適合用差示法。

一般分光光度測定選用試劑空白或溶液空白作為參比，差示法則選用一已知濃度的溶液作參比。該法的實(shí)質(zhì)是相當(dāng)于透光率標(biāo)度放大。高吸收法在測定高濃度溶液時(shí)使用。選用比待測溶液濃度稍低的已知濃度溶液作標(biāo)準(zhǔn)溶液，調(diào)節(jié)透光率為100%。低吸收法在測定低濃度溶液時(shí)使用。選用比待測液濃度稍高的已知濃度溶液作標(biāo)準(zhǔn)溶液，調(diào)節(jié)透光率為0。

最精密法是同時(shí)用濃度比待測液濃度稍高或稍低的兩份已知溶液作標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別調(diào)節(jié)透光率為0或100%。具體做法

可在456nm波長處測定并計(jì)算二者的差示吸收度ΔA456，同時(shí)以對照品比較法計(jì)算游離肼含量。

肼異煙肼+對-二甲氨基苯甲醛黃色縮合物對-二甲氨基苯甲醛連氮(λmax=456nm有最大吸收)形成的縮合產(chǎn)物對-二甲氨基芐叉(于λmax=456nm波長處無吸收)具體測定法：對照品溶液：硫酸肼CR＝1μg/ml5ml+丙酮λmax=456nm測A1+對-二甲氨基苯甲醛(ΔA456＝A2－A1)ΔAR5mlλmax=456nm測A2

供試品溶液：異煙肼