控制菌及螨類檢查技術-控制菌檢查方法驗證

項目九控制菌檢查及螨類檢查技術任務3控制菌檢查方法驗證知識點3控制菌檢查方法驗證步驟3控制菌檢查方法驗證當建立藥品的控制菌檢查方法時，應進行控制菌檢查方法的驗證，以確認所采用的方法是用于藥品的控制菌檢查。若藥品的組分或原檢查條件發(fā)生改變可能影響檢查結果時，檢查方法應重新驗證。驗證時，各品種向下控制菌檢查標準中規(guī)定的菌種進行選擇，驗證大腸桿菌檢查法時，采用大腸埃希菌作為驗證菌株。

控制菌檢查方法驗證步驟3.1方法驗證用標準菌株控制菌檢查要進行陽性對照，其陽性對照菌種如下。菌種的選擇以《中國藥典》附錄為準，具體如下。3.1.1大腸埃希菌(

Escherichia

coli)3.1.2金黃色葡萄球菌(

Staphylococcus

aureu)3.1.3乙型副傷寒沙門菌(

Salmonella

paratyphi)3.1.4銅綠假單孢菌(

Pseudomonas

aeruginosa)3.1.5生孢梭菌(

Clostridium

sporogenes)3.1.6白色念珠菌(

Candida

albicans)控制菌檢查方法驗證步驟3.2方法驗證用菌液制備接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型副傷寒沙門菌、銅綠假單胞的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18-24h;接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁養(yǎng)基中或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)18-24h。用0.9％無菌氯化鈉溶液制成1ml含菌數為10-100cfu的菌懸液。菌懸液在室溫下放置應在2h內使用，若保存在2～8℃可在24h內使用?？刂凭鷻z查方法驗證步驟3.3方法驗證用供試液的制備根據被檢藥品的理化特性與生物學特性，采取適宣的方法制備供試液。所用乳化劑、分散劑、中和劑或滅活劑及其用量應證明是有效的，并對微生物無毒性。供試液的制備若需用水溶加溫時，溫度不應超過45℃，時間不得超過30min。除另有規(guī)定外,常用的供試品制備方法如下。3.3.1一般供試品溶液的制備

3.3.1.1.液體供試品

取供試品10ml，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，作為供試液。油劑可加入適量的無菌聚山梨酯80使供試品分散均勻。水溶性液體制劑可用混合的供試品原液作為供試液。控制菌檢查方法驗證步驟3.3.1.2固體、半固體或黏稠液供試品

取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，用勻漿儀或其他適宜的方法，混勻，作為供試液。必要時加適量的無菌聚山梨酯80，并置水浴中適當加溫使供試品分散均勻。3.4驗證方法3.4.1試驗組：取規(guī)定量供試液及10～100cfu試驗菌加入增菌培養(yǎng)基中，按相應的控制菌檢查法進行檢查，當采用薄膜過濾法時，試驗菌應加在最后一次沖洗液中，沖洗后，取出濾膜接至增菌培養(yǎng)基中?？刂凭鷻z查方法驗證步驟3.4.2陽性對照組：取10～100cfu試驗菌加入增菌培養(yǎng)基中，按相應的控制菌檢查法進行檢查3.4.3陰性對照組：取相應的稀釋液替代供試品，按相應的控制菌檢查法進行檢查。3.5結果判斷陽性對照組應檢出試驗菌，陰性對照組應無菌生長。若試驗組檢出試驗菌，按