醋酸甲羥孕酮的高效液相色譜測(cè)定

醋酸甲羥孕酮的高效液相色譜測(cè)定

醋氨酸鈉，又稱安宮黃酮，廣泛用于月經(jīng)不調(diào)、功能子宮出血、預(yù)備期或習(xí)慣性流產(chǎn)。片劑可用作長(zhǎng)期避孕劑，可用于治療乳腺癌和腎臟癌。對(duì)腫瘤進(jìn)行化療可以保護(hù)骨骼，降低消化反應(yīng)，抑制人類(lèi)癌的ls17171757噸細(xì)胞。1儀器和試劑1200高效液相色譜儀,6120質(zhì)譜檢測(cè)器(美國(guó)安捷倫公司);XDB-C2方法和結(jié)果2.1溶液的制備2.1.1稀土劑乙腈、二氯甲烷的1∶1混合溶液。2.1.3對(duì)照溶液的制備精密量取雜質(zhì)對(duì)照品儲(chǔ)備液5.0mL置20mL量瓶中,并用稀釋劑稀釋至刻度,混合均勻,即得。2.1.4試驗(yàn)溶液的制備精密稱取約200mg醋酸甲羥孕酮樣品置1mL量瓶中,并用稀釋劑稀釋至刻度,混合均勻,即得。2.2鉻和鉻的形成2.2.1條件1色譜柱XDB-C2.3高溫、光照、高濕破壞樣品的制備分別稱取約200mg的醋酸甲羥孕酮樣品置1mL量瓶中,分別于60℃、48000Lx紫外可見(jiàn)光、40℃、75%濕度條件下放置1周,用稀釋劑稀釋至刻度,混合均勻,得高溫、光照、高濕破壞樣品。另分別稱取約200mg醋酸甲羥孕酮樣品置2mL量瓶中,分別加入對(duì)照品溶液、1.0mL1mol·L2.4l3.7方法進(jìn)樣線性回歸分析分別精密量取雜質(zhì)對(duì)照品儲(chǔ)備液5.0,5.0,1.0,1.0,0.5mL置10,20,10,20,20mL量瓶中,用稀釋劑稀釋至刻度,混合均勻后,此溶液為L(zhǎng)5、L4、L3、L2、L1。精密量取2.0mLL1溶液置10mL量瓶中,用稀釋劑稀釋至刻度,混合均勻,此溶液作為L(zhǎng)6溶液。L1~L6溶液分別按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)樣分析,以濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),按最小二乘法進(jìn)行線性回歸,得回歸方程。對(duì)甲苯磺酸甲酯回歸方程:y=5780.6x-164.51,r=1.000,對(duì)甲苯磺酸甲酯回歸方程y=29672x-1292.6,r=0.9998,對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸甲酯在0.05~5.08uf06dg·mL2.5定量限的確定以信噪比>10為定量限,信噪比>3為檢測(cè)限。線性溶液L6即為對(duì)甲苯磺酸甲酯定量限溶液,精密量取3.0mLL6溶液置10mL量瓶中,用稀釋劑稀釋至刻度,混合均勻,此溶液對(duì)甲苯磺酸乙酯定量限溶液;分別精密量取對(duì)苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯定量限溶液5.0mL置不同10mL量瓶中,用稀釋劑分別稀釋至刻度,混合均勻,此溶液作為檢測(cè)限溶液,分別按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)樣分析。對(duì)甲苯磺酸甲酯定量限為0.10ng(S/N=14.1),檢測(cè)限均為0.05ng(S/N=4.0),對(duì)甲苯磺酸乙酯定量限為0.03ng(S/N=12.2),檢測(cè)限為0.02ng(S/N=5.3)。2.6精密度按“2.1”對(duì)照品溶液制備方法,分別配置6份精密度測(cè)試溶液,分別按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)樣分析。對(duì)甲苯磺酸甲酯峰面積的RSD為4.70%,對(duì)甲基苯磺酸乙酯面積的RSD為4.00%。2.7醋酸甲羥孕酮檢測(cè)精密量取0.7mL線性試驗(yàn)中L3、L2、L1濃度溶液分別置1mL量瓶中,每個(gè)濃度配制3份,分別精密稱定醋酸甲羥孕酮樣品200mg(批號(hào):X2-110823,對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯均未檢出),置各量瓶中,混合均勻,然后“2.2”項(xiàng)下方法分別進(jìn)樣分析,結(jié)果見(jiàn)表1。2.8流動(dòng)相aph取線性溶液L1在不同柱溫(25,30,35℃),不同流動(dòng)相A(pH為6.7,7.0和7.2)分別按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)樣分析,對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯均能有效分離,方法進(jìn)行微調(diào)時(shí)對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響,方法耐用性良好。3討論3.1雜質(zhì)檢測(cè)能力提高進(jìn)樣濃度是最直接有效增加微量基因毒性雜質(zhì)檢測(cè)能力的辦法,醋酸甲羥孕酮在三氯甲烷中極易溶解,在丙酮中溶解,在乙酸乙酯中略溶,在無(wú)水乙醇中微溶,在水中不溶3.2鉻分離條件對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯結(jié)構(gòu)上只有一個(gè)甲基的差異,為滿足同時(shí)快速分析2個(gè)物質(zhì),選擇色譜柱XDB-C3.3對(duì)甲基苯磺酸甲酯提高離子源氣體流速、干燥氣體溫度等均可以改善質(zhì)譜檢測(cè)靈敏度。本研究發(fā)現(xiàn)在相同濃度時(shí),對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯在質(zhì)譜中的信噪比有較大差異,對(duì)甲苯磺酸乙酯色譜峰的峰高明顯高于對(duì)甲苯磺酸甲酯色譜峰,這可能是由于結(jié)構(gòu)上的差異使對(duì)甲苯磺酸乙酯更易接收質(zhì)子帶電從而獲得更高的靈敏度,這方面我們將在后續(xù)的工作中深入研究。醋酸甲羥孕酮中對(duì)甲基苯磺酸甲酯,對(duì)甲基苯磺酸乙酯的LC-MS檢測(cè)方法驗(yàn)證結(jié)果表明線性、重復(fù)性、精密度、專(zhuān)屬性和系統(tǒng)耐用性好,最低檢測(cè)限為≤0.13μg·g醋酸甲羥孕酮(藥用級(jí),浙江仙琚制藥股份有限公司,批號(hào):X2-110823);對(duì)甲基苯磺酸甲酯(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,批號(hào):F1012054;純度:98.0%);對(duì)甲苯磺酸乙酯(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,批號(hào):E1012037;純度:98.0%);乙腈、二氯甲烷為色譜純;其他試劑均為分析純,去離子水。2.1.2對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密稱取對(duì)甲基苯磺酸甲酯、對(duì)甲基苯磺酸乙酯各約