hplc法測定苯磺酸氨氯地平片劑中的果糖相關(guān)雜質(zhì)

hplc法測定苯磺酸氨氯地平片劑中的果糖相關(guān)雜質(zhì)

苯磺酸氨基丙烯酸酯（1）是二羥吡啶類鈣抗劑，能選擇性抑制鈣進(jìn)入滑膜和細(xì)胞。它對高血壓和心絞痛也有很好的治療效果。在苯磺酸氨氯地平片劑的處方研究中,筆者發(fā)現(xiàn)制劑中有一種隨著放置時(shí)間延長而含量明顯增加的雜質(zhì)(命名為雜質(zhì)Ⅰ,2),而苯磺酸氨氯地平原料在同等條件下放置則不會(huì)產(chǎn)生該雜質(zhì),故而推測該雜質(zhì)應(yīng)為苯磺酸氨氯地平與輔料相互作用所形成。文獻(xiàn)1藥品、試劑和儀器AgilentLC-MS儀,包含Agilent1200型液相色譜儀和LC/MSDSL型質(zhì)譜檢測器;Agilent1200型制備型液相色譜儀;Agilent1100型、Agilent1200型和Agilent1260型液相色譜儀。苯磺酸氨氯地平對照品(純度:99.4%,中國藥品生物制品檢定所);苯磺酸氨氯地平原料藥(浙江新賽科藥業(yè)有限公司);來自3個(gè)廠家的市售苯磺酸氨氯地平片劑,分別以片劑A、片劑B和片劑C表示(批號分別為:1203022、120213010和1205022);乳糖(常州朗生生物工程有限公司);硬脂酸鎂(安徽山河藥用輔料股份有限公司);磷酸二氫鉀和甲酸均為分析純;乙腈為色譜純;試驗(yàn)用水為重蒸水。22.1條件12.1.12分離和制備條件色譜柱:WatersSunFirePrepC2.1.2色譜柱的選擇Agilent1100型、Agilent1200型和Agilent1260型液相色譜儀所用色譜柱分別為:Kromasil100-5C2.2雜質(zhì)的分離制備將苯磺酸氨氯地平原料藥和乳糖按質(zhì)量比1∶1混合,加入少量硬脂酸鎂,在85℃、92.5%濕度的條件下放置數(shù)天,促使雜質(zhì)Ⅰ生成,并按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件對雜質(zhì)Ⅰ進(jìn)行分離制備,所得產(chǎn)物冷凍干燥,即得,其純度達(dá)99.4%。在以下質(zhì)譜條件下測定雜質(zhì)Ⅰ相對分子質(zhì)量:正離子模式,干燥氣流速為10L·min2.3雜質(zhì)校正因子的測定2.3.1求母液的配制取苯磺酸氨氯地平對照品和自制雜質(zhì)Ⅰ各10mg,置同一50mL量瓶中,加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度,再精密量取5mL置100mL量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度,即得母液。精密量取母液2、4、6、8和10mL,置于100mL量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度,作為測定校正因子所用供試溶液,分別記為1、2、3、4和5號溶液。2.3.2色譜檢測方法精密量取1～5號供試品溶液,注入液相色譜儀,按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測,記錄色譜圖(見圖3)。分別以苯磺酸氨氯地平和雜質(zhì)Ⅰ的色譜峰面積(2.3.3測定苯磺酸氨氯地平和雜質(zhì)的色譜峰面積精密量取1、3和5號供試溶液,注入液相色譜儀,分別記錄苯磺酸氨氯地平和雜質(zhì)Ⅰ的色譜峰面積,并按以下公式計(jì)算各濃度下的校正因子,結(jié)果見表2。校正因子其中,“面積2.4不同流動(dòng)相的雜質(zhì)取各廠家生產(chǎn)的苯磺酸氨氯地平片10片,置100mL量瓶中,加流動(dòng)相適量,超聲處理10min,使苯磺酸氨氯地平充分溶解,加流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,過濾,取續(xù)濾液10μL進(jìn)樣,按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測,結(jié)果均未檢出雜質(zhì)Ⅰ(見圖4)。3測定結(jié)果的對比苯磺酸氨氯地平和乳糖混合后可在鎂的催化下生成雜質(zhì)Ⅰ,此反應(yīng)即為伯胺與糖的Mailland反應(yīng)本文在測定校正因子試驗(yàn)中,平行制備了3組對照品供試溶液,分別采用3臺(tái)不同型號的HPLC儀,3根來自不同廠家的色譜柱,以消除可能由儀器、制備過程或是色譜柱帶來的誤差,使測得的校正因子更為準(zhǔn)確、耐用。由本研究結(jié)果可見,多濃度點(diǎn)法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法測得的校正因子基本一致。這2種方法各有其特點(diǎn),采用多濃度點(diǎn)法測定時(shí)所需樣品數(shù)少,測定快捷直觀,不過部分低濃度點(diǎn)的測定結(jié)果會(huì)偏差較大,需采用Grubbs檢驗(yàn)法除去這些點(diǎn);標(biāo)準(zhǔn)曲線法的測定結(jié)果取決于整體數(shù)據(jù),所得斜率應(yīng)是至少對5個(gè)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合的結(jié)果,每條曲線中即便有個(gè)別點(diǎn)偏差較大,