氨基甲酸酯類carbamate農(nóng)殘

氨基甲酸酯類(carbamate)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書本試劑盒僅供研究使用。1使用目的：本試劑盒用于蔬菜、水果、相應(yīng)食物、水及中毒殘留物中氨基甲酸酯類(carbamate)殘留的定量檢測(cè)。2實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔板包被有颯基甲酸酯類(carbamale)偶聯(lián)抗原，加入氨基甲酸酯類(carbamate)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離氨基甲酸酯類(carbamate)與微孔條上預(yù)包被的氨基甲酸酯類(carbamale)偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗氨基甲酸酯類(carbamate)抗體醐標(biāo)記物，用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，吸光值與樣品中氨基甲酸酯類(carbamate)含量成反比，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中氨基甲酸酯類(carbamate)的含量。3試劑盒組成預(yù)包被的氨基甲酸酯類(carbamale)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板：1塊(12孔x8條)。氨基甲酸酯類(carbamate)標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是：0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppbo抗氨基甲酸酯類(carbamate)抗體酶結(jié)合物：1瓶(6ml)。顯色液A：1瓶(6ml)o顯色液B1瓶(6ml)。終止液：1瓶(6ml),2M硫酸。樣本稀釋液：1瓶(10x,6ml),用于樣品稀釋用。濃縮洗滌液：1瓶(20x,20ml),用于洗板。說(shuō)明書一份。4需要而未提供的材料設(shè)備波長(zhǎng)450nm酶標(biāo)儀。粉碎機(jī)。筒。振蕩器。漏斗。WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。微量移液器。4.2試劑去離子水或蒸飼水。甲醇。5貯存試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存6注意事項(xiàng)6』使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。不要使用過(guò)期試劑盒。試劑盒使用前，將試劑恢復(fù)至室溫（25±2℃）,建議至少回溫2小時(shí)。標(biāo)準(zhǔn)品中含有氨基甲酸酯類（carbamate）,使用時(shí)應(yīng)特別注意，操作時(shí)應(yīng)帶手套。終止液中含有硫酸，使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用，否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用；不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。7工作液準(zhǔn)備氨基甲酸酯類（carbamate）標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb濃縮洗滌液：用蒸僧水按1:20（1+19）稀釋備用樣本稀釋液：用蒸儲(chǔ)水按1:10（1+9）稀釋備用顯色劑：己備用，避免光線直照反應(yīng)終止液：已備用8樣品處理程序（樣品在提取過(guò)程中，要嚴(yán)格按說(shuō)明書操作，提取過(guò)程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋，否則會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存）取10g粉碎的樣品,加20ml70%甲醇溶液強(qiáng)力振蕩3分鐘JIJWhatmanNo1濾紙過(guò)濾取25口1處理后的樣品，加入25例樣本稀釋液于反應(yīng)孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）9酶免分析步驟實(shí)驗(yàn)須知實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（25±2℃）,時(shí)間約2小時(shí)?；販刂潦覝兀?5±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保證回溫充分，否則影響檢測(cè)的精確度和準(zhǔn)確度。使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存請(qǐng)不要改變分析程序請(qǐng)使用精確的微量移液器操作一旦開(kāi)始，請(qǐng)不要中斷任何程序ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序，請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作為避免交叉污染，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面分析步驟預(yù)先進(jìn)行編號(hào)，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，推薦進(jìn)行雙孔檢測(cè)取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存923樣品稀釋液（10x）、濃縮洗滌液（20x）稀釋成工作液（蒸飽水或去離子水稀釋）在B0孔中加入50|jL0ppb標(biāo)準(zhǔn)品溶液在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50m的標(biāo)準(zhǔn)品溶液在各樣品孔中加入50口1樣品溶液在所有孔中加入50口1的抗氨基甲酸酯類（carbamate）抗體酶結(jié)合物輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。37C溫浴30min（溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差）甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，最后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。應(yīng)滌程序完成后，立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入509顯色液A,再加5O|J1顯色液B：輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之徹底混勻37℃溫浴1。111m孔中加入5O|J1終止液，混勻450nm下檢測(cè)吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。10結(jié)果計(jì)算定量分析所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值BO-Oppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值以氨基甲酸酯類(carbamate)濃度的對(duì)數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo)，即為氨基甲酸酯類(carbamate)濃度的對(duì)數(shù)值，求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中氨基甲酸酯類(carbamate)濃度C(ppb)由于樣品經(jīng)過(guò)了預(yù)先稀釋，因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。半定量測(cè)定目測(cè)半定量測(cè)定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。儀器半定量測(cè)定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。11特異性物質(zhì)交叉反應(yīng)氨基甲酸酯類(carbamate)100%12試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測(cè)下限為0.05ppbB0吸光度最佳值應(yīng)大于