抗菌和抑菌效果評價方法

抗菌和抑菌效果評價方法抗菌和抑菌效果評價方法1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了抗菌和抑菌評價方法的選擇原則和使用。本標(biāo)準(zhǔn)適用于具有抗菌和(或)抑菌功能產(chǎn)品的抗菌、抑菌效果的鑒定。2標(biāo)準(zhǔn)性引用文件以下文件對于本文件的應(yīng)用是必不行少的。但凡注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。但凡不注日期的引用文件，其最版本〔包括全部的修改單〕適用于本文件。GB15979一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)FZ/T73023抗菌針織品消毒技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)〔2023版〕衛(wèi)生部〔衛(wèi)法監(jiān)發(fā)〔2023〕282號〕3以下術(shù)語和定義適用于本文件。3.1抗菌antibacterial承受化學(xué)或物理方法殺滅或阻礙細(xì)菌生長生殖，可削減其數(shù)量以及活性的過程。3.2抑菌bacteriostasis承受化學(xué)或物理方法抑制或阻礙細(xì)菌生長生殖及其活性的過程。3.3持續(xù)抗菌作用sustainedantibacterialaction具有抗菌作用的消毒產(chǎn)品涂于物體外表，持續(xù)7d以上仍具有殺滅或阻礙細(xì)菌生長生殖作用。3.4中和劑neutralizer在殺滅微生物試驗中，用以消退試驗微生物與消毒劑的混懸液中，以及微生物外表上殘留的消毒劑，使其失去對微生物抑制和殺滅作用的試劑。評價方法的選擇原則抗菌試驗與抑菌試驗區(qū)分抗菌試驗：測定抗菌產(chǎn)品對細(xì)菌和真菌的抗菌作用，試驗過程中需要用中和劑終止殺菌作用。抑菌試驗：測定抑菌產(chǎn)品對細(xì)菌和真菌的抑菌作用，試驗過程中不需要使用中和劑終止抑菌作用。依據(jù)產(chǎn)品性能選擇適宜的評價方法抑菌效果評價方法的選擇原則抑菌類產(chǎn)品選擇抑菌效果評價方法。液體抑菌產(chǎn)品選擇懸液定量抑菌試驗，膏體或半固體凝膠類、黏稠狀抑菌產(chǎn)品選擇載體浸泡定量抑菌試驗，濕巾類或其他自身含有抑菌成分的產(chǎn)品選擇載體抑菌試驗，肥皂類固體抑菌產(chǎn)品選擇抑菌環(huán)試驗，含有可溶性抑菌成分的紡織品選擇浸漬抑菌試驗，含有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液選擇滯留抑菌試驗。抗菌效果評價方法的選擇原則抗菌類產(chǎn)品選擇抗菌效果評價方法。液體抗菌產(chǎn)品選擇懸液定量殺菌試驗，凝膠狀或膏狀抗菌產(chǎn)品選擇載體浸泡定量殺菌試驗，濕巾類或其他自身含有抗菌成分的產(chǎn)品選擇載體殺菌試驗，含有可溶性抗菌成分的紡織品選擇浸漬抗菌試驗。含有不行溶抗菌成分的紡織品、無紡布、纖維等，經(jīng)鑒別不含可溶性抗抑菌成分后，承受燒瓶振蕩試驗。含有不行溶抗菌成分的瓷磚、塑料、金屬、涂料等，承受貼膜試驗；對于涂于外表，枯燥后具有持續(xù)抗菌作用的產(chǎn)品，進(jìn)展持續(xù)抗菌試驗。評價方法抑菌效果懸液定量抑菌試驗適用范圍適用于液體抑菌制劑如衛(wèi)生洗液、抑菌噴霧劑等對微生物抑菌效果的測定。試劑、培育基及器材試驗菌株金黃色葡萄球菌〔ATCC6538〕、大腸桿菌〔8099〕、白色念珠菌〔ATCC10231〕及依據(jù)抑菌劑特定用途所用的其他菌株。試劑稀釋液：0.03mol/L磷酸鹽緩沖液〔PBS〕〔pH7.2～7.4〕，培育基：金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的培育使用養(yǎng)分瓊脂培育基，白色念珠菌的培育使用沙氏瓊脂培育基。器材恒溫水浴箱、計時器、Ⅱ級生物安全柜等。試驗步驟取試驗菌24h穎斜面培育物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5.0×105CFU/mL～4.5×106CFU/mL5.0mL樣品〔依據(jù)使用說明書要求使用原液或稀釋液〕，置20℃±1℃水浴中5min后，再參與0.1mL試驗用菌懸液，快速混勻并馬上計時。待試驗菌與樣品相互作用至說明書的規(guī)定時間，分別吸取1.0mL試驗菌與樣品混合液接種2個平皿，傾注培育基。菌量無法計數(shù)時，以PBS做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個平皿，做活菌培育計數(shù)。PBS代替樣品，進(jìn)展平行試驗，作為陽性比照。陽性比照回收菌落數(shù)在1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL之間。取同批次PBS、培育基作陰性比照。全部試驗樣本和比照樣本均在36℃±1℃培育，細(xì)菌生殖體培育48h觀看最終結(jié)果；白色念珠菌培育72h觀看最終結(jié)果。試驗重復(fù)3次，計算抑菌率。抑菌率計算%100010?-=AAAX...................................(1)式中：X—抑菌率，%；A0—陽性比照組回收菌量，單位為CFU/mL；A1—試驗組回CFU/mL。5.1.1.5抑菌率≥50%～90%，判有抑菌作用；抑菌率≥90%，判有較強抑菌作用。5.1.25.1.2.1適用于膏體或半固體凝膠類、黏稠狀抑菌產(chǎn)品對微生物抑菌效果5.1.2.2載體為10mm×10mm 脫脂白平紋布片，脫脂方法依照《消毒技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》〔2023版〕進(jìn)展，使用前壓力蒸汽滅菌備用，電子天平〔d=0.01g〕，5.1.1.2。5.1.2.3操作步驟取試驗菌24h穎斜面培育物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5.0×106CFU/mL～5.0×107CFU/mL制成菌懸液備用。用微量移液器滴染10μl菌懸液于滅菌載體上，36℃±1℃烘干或室溫晾干備用。按5g/20℃±1℃水浴5min，用無菌鑷子取染菌載體，使載體完全浸沒于樣品中，馬上計時。待染菌載體與樣品相互作用至說明書的規(guī)定時間，分別取染菌載體參與5.0mLPBS1.0mL樣液，按活菌培育計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可用PBS進(jìn)展10倍系列稀釋后，再進(jìn)展活菌培育計數(shù)。取10.0g與試驗樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的比照樣品浸泡2性比照。陽性比照回收菌量為1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取同批次PBS、培育基作陰性比照。全部試驗樣本和比照樣本均在36℃±1℃培育，細(xì)菌生殖體培育48h觀看結(jié)果；白色念珠菌培育72h觀看結(jié)果。試驗重復(fù)3次，計算抑菌率。5.1.2.4抑菌率計算%100010?-=AAAX...................................(2)式中：X—抑菌率，%；A0CFU/A1CFU/片。5.1.2.5抑菌率≥50%～90%，判有抑菌作用；抑菌率≥90%，判有較強抑菌作用。5.1.35.1.3.1適用于含溶出性抑菌成分的濕巾、無紡布口罩、衛(wèi)生巾、護(hù)墊、尿布等固體類抑菌產(chǎn)品對微生物抑菌效果的測定。5.1.3.2試劑、培育基及器材見5.1.1.2。5.1.3.3試驗步驟24hPBSPBS105CFU/mL～106CFU/mL，制成菌懸液備用。用滅菌剪刀在無菌條件下將試驗樣品和比照樣品分別剪成20mm×30mm樣片備用。試驗時滴加0.1mL菌懸液。比照樣片染菌前需經(jīng)壓力蒸汽滅菌。取無菌平皿，用無菌鑷子取220℃±1℃水浴5min，在每一樣片上滴加0.1mL試驗用菌懸液，馬上計時。待試驗菌與樣片接觸作用至5.0mLPBS試管中，混勻。振蕩洗脫，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培育計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可10倍系列稀釋后，再進(jìn)展活菌培育計數(shù)。同時用與試驗樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的比照樣片2片代替試驗樣片進(jìn)展試驗，作為陽性比照，陽性比照回收菌量為1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/PBS、培育基作陰性比照。全部試驗樣本和比照樣本均在 36℃±1℃培育，細(xì)菌生殖體培育48h、白色念珠菌培育72h觀看最終結(jié)果。試驗重復(fù)3次，計算抑菌率。5.1.3.4抑菌率計算見式〔2〕。5.1.3.5結(jié)果判定抑菌率≥50%～90%，判有抑菌作用；抑菌率≥90%，判有較強抑5.1.45.1.4.1適用于含溶出性抑菌物質(zhì)，可制成直徑為5mm片狀物的固體抑菌產(chǎn)品的抑菌效果鑒定；也可用于鑒別抗抑菌樣品中是否含有可溶性抑菌物質(zhì)。試劑、培育基及器材5.1.1.2試驗步驟將試驗菌24h穎斜面培育物用 PBS洗下，稀釋至5.0×105CFU/mL～5.0×106CFU/mL備用。抑菌片的制備：溶出性固體抑菌產(chǎn)品，直接制成直徑為 5mm，厚度不超過4mm圓片〔塊〕，每4片為一組。陰性比照樣片的制備：取同種材質(zhì)不含抑菌成分的樣本，制成與試驗組大小一樣的圓片〔塊〕。用無菌棉拭子蘸取濃度為5.0×105CFU/mL～5.0×106CFU/mL試驗菌懸液，在適宜的培育基平板外表均勻涂抹3次。每涂抹1次，平板應(yīng)轉(zhuǎn)動60°，最終將棉拭子繞平板邊緣涂抹一周。蓋好平皿，置室5min。每次試驗貼放1個染菌平板，每個平板貼放4片試驗樣片，1片陰性比照樣片，共5片。用無菌鑷子取樣片貼放于平板外表，陰性比照樣片貼于平板中心位置，試驗樣片貼于四周，貼放好后，用無菌鑷子輕壓樣片，使其緊貼于平板外表。各樣片中心之間相距25mm以上，15mm36℃±1℃培育16h～18h3用游標(biāo)卡尺測量抑菌環(huán)的直徑〔包括貼片〕并記錄，測量抑菌環(huán)時，應(yīng)選均勻而完全無菌生長的抑菌環(huán)進(jìn)展，測量其直徑應(yīng)以抑菌環(huán)外沿為界。結(jié)果判定陰性比照樣片應(yīng)無抑菌環(huán)產(chǎn)生，試驗樣品抑菌環(huán)直徑＞7mm者，判為有抑菌作用；抑菌環(huán)直徑≤7mm者，判為無抑菌作用。3次重復(fù)試驗〔12個樣片〕均有抑菌作用，則判為合格。浸漬抑菌試驗適用范圍適用于溶出性抑菌織物〔如抑菌毛巾、口罩、內(nèi)衣等〕抑菌效果的測定。試劑、培育基及器材5.1.5.2.1試驗菌株見5.1.1.2.1試樣10cm以上、離布端1m以上部位，剪取直徑為5cm3份試樣分別裝于3個錐形瓶中，蓋好瓶口備用〔需用試樣數(shù)量要依據(jù)纖維類別及織物織法而定，以能吸取1mL菌液且錐形瓶中不留殘液為度〕。另同法剪取與試樣一樣材質(zhì)但不含抑菌劑比照織物假設(shè)干，取2份分別裝于2個錐形瓶中，蓋好瓶口，121℃15min試劑和培育基0.03mol/LPBS〔pH7.2～7.4〕，肉湯培育基、養(yǎng)分瓊脂培育基、沙氏培育基。菌懸液的制備用接種環(huán)將保存的菌種以劃線法接種到養(yǎng)分瓊脂平板，36℃±1℃培育24h，取典型的菌落移種到含肉湯培育基的錐形瓶中，36℃±1℃培育24h，用肉湯對培育液進(jìn)展系列稀釋，使菌懸液的含菌量為1.0×105CFU/mL～5.0×105CFU/mL。5.1.5.3試驗步驟1mL21物上，確保其均勻分布，且錐形瓶中不留多余液，封好瓶口，以防蒸發(fā)造成細(xì)菌死亡。分別在一個盛有已接種菌懸液的試樣和比照織物的錐形瓶中參與100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細(xì)菌，分1.0mL102“0”接觸時間樣本和比照織物上的細(xì)菌數(shù)。將另一個裝有已接種菌懸液試樣的錐形瓶于36℃±1℃培育20h±2h，參與100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細(xì)菌，分別吸取1.0mL樣液或102個平皿，作為試驗組。陰性比照組，試樣不接種菌懸液，在“0”接觸時間參與100mLPBS1min取樣，接種平皿。陽性比照組，另取11mL36℃±1℃20h±2h，參與100mLPBS，置渦旋振蕩1min洗滌細(xì)菌，分別吸取1.0mL樣液或10接種2個平皿。將陰性和陽性比照樣本與試驗組樣本一并放36℃±1℃48h35.1.5.4計算抑菌率%1002/)][(C]2/)[(C?+-+=CBBACBBX或或或或(3)式中：X—抑菌率，%；ACFU/mL；B—“0”CFU/mL；C—“0”CFU/mL；假設(shè)“B”和“C”差異較大時，取較大值；假設(shè)“B”和“C”5.1.5.5試驗成立條件要求：“0”接觸時間比照織物的平均回收菌量為1×103CFU/mL～5×103CFU/mL；陰性比照顧無菌生長，陽性比照菌數(shù)比0接觸時間的菌數(shù)明顯增加。各次試驗的抑菌率均≥50%，即可判定該樣片具有抑菌作用。滯留抑菌效果試驗5.1.6.1適用范圍適用于有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液類抑菌產(chǎn)品的滯留抑菌效果鑒定。5.1.6.2試劑、培育基及試驗器材試驗菌株：金黃色葡萄球菌〔ATCC27217〕試驗產(chǎn)品:試驗品為25套按挨次編號的樣品。每套2瓶，一瓶為測試樣品，另一瓶為不含抗〔抑〕菌劑的比照樣品。不含抑菌劑的用品25瓶〔試驗調(diào)整階段用〕。胰蛋白酶大豆肉湯培育基〔 TSB〕、胰蛋白酶大豆瓊脂培育基〔TSA〕、羊血、經(jīng)脫纖維處理、0.075mol/L70%酒精、金屬筒〔直徑2.2cm、高度3cm〕、一次性接種環(huán)〔直徑4mm〕、小塑料碗〔直徑2.2cm，高2.5mm,〕、膠帶〔Darapore,3M公司生產(chǎn)〕、尼龍刮菌棒、聚乙二醇單辛基苯基醚(曲拉通X-100；Triton-X100)500mL皮膚消毒劑等。5.1.試驗步驟5.1.調(diào)整階段試驗開頭前7d至14d，受試者使用不含抗〔抑〕菌成分的香皂、洗發(fā)水和沐浴液進(jìn)展日常的洗手、洗澡，此階段持續(xù)至少7d，但不超14d。5.1.清洗階段清洗階段共3d，受試者每天用有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液類樣品清洗一側(cè)前臂,用比照樣品清洗另一側(cè)前臂，清洗過程如下:先清洗左臂，用水溫為35℃～37℃的流淌水潤濕前臂內(nèi)側(cè)；取樣液3mL60s；用流淌的清水沖洗前臂15s,不要搓擦；用紙巾沾干前臂，不要搓擦；用不含抑菌成分的比照樣品重復(fù)以上步驟清洗右臂；按上面所描述的試驗步驟每日清洗前臂3次，每次間隔至少1h，在最終一次清洗之后，需記錄好時間，在12h之后,進(jìn)展滯留效果檢測。在第9次清洗前臂以后，受試者不能洗澡、淋浴或洗凈前臂，直到試驗完畢。5.1.試驗階段最終一次清洗后的12h或24h，將在受試者每只前臂上劃出一個試驗區(qū)，對試驗區(qū)進(jìn)展接種、封包和回收存活細(xì)菌,具體步驟如下:將金黃色葡萄球菌〔ATCC27217〕33物接種于胰蛋白大豆肉湯培育基〔TSB〕中，在36℃±1℃的條件下培育20h±2h。然后用TSB適當(dāng)稀釋菌懸液，使菌懸液濃度約為108CFU/mL～109CFU/mL。接種:在受試者的每只前臂中間部位〔不要在手腕和肘皺褶處〕，用帶有印墨直徑為3.00cm的玻璃量筒扣在皮膚上，劃分出一個試驗區(qū)。使用加樣器取10μL上述菌懸液，接種于前臂試驗區(qū)〔菌落數(shù)為106CFU/試驗區(qū)～107CFU/試驗區(qū)〕，用一次性接種環(huán)，把接種物涂4mm～5mm封包:細(xì)菌接種后馬上用小塑料碗扣于染菌區(qū)上面，再用膠帶將小塑料碗固定在皮膚上，記錄封包的時間?；厥沾婊罴?xì)菌:接種后2h±5min對前臂上接種的區(qū)域進(jìn)展取樣。將金屬筒放置于試驗區(qū)中間部位，不要接觸到蓋有印墨的邊緣。將1mL含0.1%Triton-X100的0.075mol/L內(nèi)，用尼龍刮菌棒刮洗金屬筒罩住區(qū)域內(nèi)的皮膚60s,將筒內(nèi)液體吸移1mL含0.1%TritonX-1000.075mol/L磷酸鹽緩沖液，對該區(qū)域內(nèi)的皮膚進(jìn)展其次次刮洗30s，將其次次擦洗的液體，注入含第一次刮洗液體的試管中。試驗區(qū)試驗后的消毒處理:對抑菌樣品組清洗后的試驗區(qū)采樣之后，需用70%的酒精對試驗區(qū)進(jìn)展消毒。然后對無抑菌成分的比照組清洗后的試驗區(qū)以同樣方法進(jìn)展采樣、消毒。試驗完畢后，用皮膚消毒劑對兩只前臂進(jìn)展消毒處理，處理后清水沖洗，擦干，再涂少量的抗生素軟膏。接種與培育:對每一個取樣進(jìn)展接種，以0.0375mol/L磷酸鹽緩沖液對樣品進(jìn)展100.1mL接種于2個含5%羊血的TSA平板外表，用玻璃彎棒涂勻，在36℃±1℃的培育箱中培育48h±4h,計數(shù)菌落數(shù)。以試驗同批次的稀釋液、培育基等分別設(shè)陰性比照。5.1.6.4抑菌率的計算%100?-=ABAX...................................(4)式中：X--抑菌率%A--比照平均菌落數(shù),單位為CFU/試驗區(qū)B--試驗平均菌落數(shù),單位為CFU/試驗區(qū)5.1.6.5判定標(biāo)準(zhǔn)各次試驗陰性比照菌無菌生長。試驗不得少于16人次，抑菌率均≥50%，可判定該產(chǎn)品在規(guī)定的5.2懸液定量殺菌試驗5.2.1.1適用范圍適用于液體抗菌產(chǎn)品〔如液體抗菌液、抗菌噴霧劑等〕對微生物5.2.1.2中和劑(用PBS配制)，其它見5.1.1.2。5.2.1.3菌懸液配制取試驗菌24h穎斜面培育物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5.0×105CFU/mL～4.5×106CFU/mL菌懸液備用。5.2.1.4中和劑鑒定試驗5.2.1.4.1分組15.0mL中和劑+0.1mL菌懸液→培育2〔0.5mL抗菌劑+4.5mL〕+0.1mL菌懸液→培育第35.0mL稀釋液+0.1mL菌懸液→培育第45.2.1.4.21組：取5.0mL中和劑，置20℃±1℃水浴中10min0.1mL勻，作用10min，用中和劑做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度分別吸1.0mL2第24.5mL0.5mL置20℃±1℃10min0.1mL混勻，作用10min，用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度分1.0mL235.0mLPBS，置20℃±1℃10min，參與0.1mL試驗菌懸液，混勻，作用10min，用PBS做101.0mL接種2第4組：分別吸取稀釋液〔PBS〕1.0mL15mL～20mL，作為陰性比照5.2.1.4.3第1、2、3組有相像量試驗菌生長，且菌量在1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL；計算組間菌落數(shù)誤差率，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過15%；第4組無菌生長，否則，說明試劑有污染，應(yīng)更換無污染的試劑重進(jìn)展試驗。試驗重復(fù)3次，每次試驗均應(yīng)符合以上要求。5.2.1.5試驗步驟取無菌試管，先參與5.0mL抗菌劑〔說明書規(guī)定的使用濃度〕，置20℃±1℃水浴中5min后，再參與0.1mL試驗用菌懸液，快速混勻并馬上計時。待試驗菌與抗菌劑相互作用至各預(yù)定時間〔以說明書規(guī)定時間為T，時間分別為0.5T，T，1.5T〕，0.5mL試驗菌與抗菌4.5mL各管試驗菌與抗菌劑混合液經(jīng)中和劑作用 10min后，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培育計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可用PBS進(jìn)展10倍系列稀釋后，再進(jìn)展活菌培育計數(shù)。同時用PBS代替消毒液，進(jìn)展平行試驗，作為陽性比照。陽性比照1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL。取同批次稀釋液、中和劑、培育基作陰性比照。全部試驗樣本和比照樣本均在36℃±1℃培育，對細(xì)菌生殖體培育48h觀看最終結(jié)果；對白色念珠菌需培育72h觀看最終結(jié)果。試驗重35.2.1.6%100?-=ABAX...................................(5)式中：X—殺菌率，%；ACFU/mL；B—試驗組回收菌量，單位為CFU/mL。5.2.1.7結(jié)果判定說明書規(guī)定時間的殺菌率≥90%，判有抗菌作用；說明書規(guī)定時間的殺菌率≥99%，判為較強抗菌作用。載體浸泡定量殺菌試驗5.2.2.1適用范圍適用于粘稠狀〔半固體〕抗菌產(chǎn)品如抗菌洗手液、抗菌沐浴露、抗菌凝膠、膏狀抗菌產(chǎn)品等對微生物抗菌效果的鑒定。試劑、培育基及器材中和劑〔PBS配制〕，其它見5.1.2.2。染菌載體制備取試驗菌24h穎斜面培育物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5×106CFU/mL～5×107CFU/mL制成菌懸液備用。用微量移液器滴10μl，36℃±1℃烘干或室溫晾干備用。中和劑鑒定試驗試驗分組15.0mL中和劑+染菌載體→培育第2組：〔含抗菌劑的載體+5.0mL〕+染菌載體→培育35.0mL4組：稀釋液+中和劑+培育基→培育試驗步驟依據(jù)試驗分組，預(yù)備試管和平皿，依次進(jìn)展編號。15.0mL20℃±1℃水浴5min，參與1片染菌載體，作用10min，取出菌片放入5.0mL中和劑試管內(nèi)，作用10min后，置渦旋振蕩器上振蕩1min或在手掌上用力振打80次，將試驗菌洗下，用中和劑做10倍系列稀釋后，選擇適宜稀釋1.0mL2第2組：取5.0mL1片沾有抗菌樣本的載體，混勻，置20℃±1℃水浴作用10min制成中和產(chǎn)物。再用無菌鑷子取1片染菌載體，浸于中和產(chǎn)物中作用10min后，用無菌鑷子取出染菌載體移入含5.0mL10min，振蕩，將試驗菌洗下，用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0mL235.0mLPBS20℃±1℃水浴5min，參與110min，取出菌片放入5.0mLPBS作用10min后，振蕩，將試驗菌洗下，用PBS做101.0mL2第4組：分別吸取稀釋液〔PBS〕與中和劑各1.0mL于同一無菌15～20mL，培育觀看。結(jié)果判定第1、2和3組有相像量試驗菌生長，且菌量在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。計算組間菌落數(shù)誤差率，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過15%。第4組無菌生長,否則，說明試劑有污染，應(yīng)更換無污染的3次，每次試驗均應(yīng)符合以上要求。試驗步驟按5g/片的量稱取抗菌樣品于無菌平皿內(nèi)，置20℃±1℃水浴5min，用無菌鑷子取染菌載體，使載體完全浸沒于抗菌樣品中，馬上計時。待染菌載體與抗菌劑相互作用至各預(yù)定時間〔以說明書規(guī)定時間為T，時間分別為0.5T，T，1.5T〕，分別取染菌載體參與5.0mL中和劑試管中，混勻。經(jīng)中和劑作用10min后，振蕩，將試驗菌洗下，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培育計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可用PBS進(jìn)展系列10倍稀釋后，再進(jìn)行活菌培育計數(shù)。取與試驗樣品同質(zhì)材料不含抗菌成分的比照樣品代替抗菌樣品浸2作為陽性比照。陽性比照回收菌量為1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取同批次稀釋液、中和劑、培育基作陰性比照。全部試驗樣本和比照樣本均在36℃±1℃培育，細(xì)菌生殖體培育48h觀看結(jié)果；白色念珠菌培育72h觀看結(jié)果。試驗重復(fù)3次，計算5.2.2.6%100?-=ABAX...................................(6)式中：X—殺菌率，%；ACFU/片；B—試驗樣本回收菌量，單位為CFU/片。5.2.2.7結(jié)果判定說明書規(guī)定時間的殺菌率≥90%，判有抗菌作用；說明書規(guī)定時間的殺菌率≥99%，判有較強抗菌作用。載體殺菌試驗5.2.3.1適用范圍適用于添加有殺菌劑的衛(wèi)生濕巾或可溶性抗菌物質(zhì)的載體類產(chǎn)品5.2.3.2試劑、培育基及器材中和劑〔PBS配制〕，其它見5.1.1.25.2.3.3菌懸液配制及樣片制備取試驗菌 24h穎斜面培育物用 PBS洗下，用 PBS稀釋至1.0×105CFU/mL～9.0×105CFU/mL，制成菌懸液備用。用無菌剪刀將抗菌產(chǎn)品和材質(zhì)一樣但不含抗菌成分的比照樣品分別剪成20mm×30mm樣片備用。試驗時滴加0.1mL菌懸液。比照樣片染菌前需經(jīng) 121℃15min滅菌處理。 5.2.3.4中和劑鑒定試驗5.2.3.4.1試驗分組15.0mL中和劑+染菌比照樣片→培育2〔