腺病毒載體工藝平臺介紹課件

源興基因藥物研發(fā)中心腺病毒載體工藝平臺介紹2023/8/221基因藥物研發(fā)中心源興基因藥物研發(fā)中心2023/8/21基因研發(fā)中心廠房及設(shè)備源興基因藥物研發(fā)中心建筑面積1900多平方米，其中符合國家GMP要求的潔凈廠房面積1600多平方米，包括原液生產(chǎn)車間、制劑生產(chǎn)車間、質(zhì)量控制實驗室以及研發(fā)實驗室。研發(fā)中心配置了NBS細胞罐、AKTA純化系統(tǒng)、高速冷凍離心機、切向流超濾系統(tǒng)、二氧化碳培養(yǎng)箱、生物安全柜、分析型HPLC系統(tǒng)、PCR儀、電泳儀、酶標儀、超聲波破碎儀、超聲波西林瓶清洗機、隧道式滅菌烘箱、液體灌裝加塞機、軋蓋機、凝膠掃描成像系統(tǒng)、超純水儀、多效蒸餾水機等儀器設(shè)備。

能夠滿足腺病毒載體藥物研發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制的要求。

2023/8/222基因藥物研發(fā)中心研發(fā)中心廠房及設(shè)備源興基因藥物研發(fā)中心2023/8/223基因藥物研發(fā)中心2023/8/23基因藥物研發(fā)中心2023/8/224基因藥物研發(fā)中心2023/8/24基因藥物研發(fā)中心2023/8/225基因藥物研發(fā)中心2023/8/25基因藥物研發(fā)中心2023/8/226基因藥物研發(fā)中心2023/8/26基因藥物研發(fā)中心2023/8/227基因藥物研發(fā)中心2023/8/27基因藥物研發(fā)中心2023/8/228基因藥物研發(fā)中心2023/8/28基因藥物研發(fā)中心2023/8/229基因藥物研發(fā)中心2023/8/29基因藥物研發(fā)中心研發(fā)中心生產(chǎn)系統(tǒng)組織圖總經(jīng)理生產(chǎn)總監(jiān)工藝開發(fā)部（10人）質(zhì)控部（5人）設(shè)備工程部（4人）物控部（3人）細胞病毒培養(yǎng)純化制劑分裝清潔輔助2023/8/2210基因藥物研發(fā)中心研發(fā)中心生產(chǎn)系統(tǒng)組織圖總經(jīng)理生產(chǎn)總監(jiān)工藝開發(fā)部質(zhì)控部設(shè)備工程研發(fā)隊伍打造了一支技術(shù)過硬的研發(fā)隊伍，能夠保證工藝水平及產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。歷經(jīng)多次新藥申報，比較熟悉新藥審評程序和規(guī)定，積累了較豐富的申報經(jīng)驗，能夠比較順利的解決有關(guān)問題。2023/8/2211基因藥物研發(fā)中心研發(fā)隊伍打造了一支技術(shù)過硬的研發(fā)隊伍，能夠保證工藝水平及產(chǎn)品管理制度建立了300多個SOP、SMP等標準程序和規(guī)章管理制度，按照GMP要求嚴格規(guī)范管理。2023/8/2212基因藥物研發(fā)中心管理制度建立了300多個SOP、SMP等標準程序和規(guī)章管理制研發(fā)中心工藝平臺研發(fā)中心工藝產(chǎn)業(yè)化平臺是通用型腺病毒載體藥物生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標準研究的藥學(xué)技術(shù)平臺，中試生產(chǎn)工藝水平達到了國內(nèi)同行業(yè)先進水平，可以在產(chǎn)量及質(zhì)量上滿足腺病毒載體藥物臨床前和臨床用樣品制備的要求。本工藝擁有自主知識產(chǎn)權(quán)，可作為腺病毒載體新藥研發(fā)及生產(chǎn)的技術(shù)基礎(chǔ)。5L細胞罐收獲物經(jīng)純化后產(chǎn)量能達到E15VP/批，注射液制劑工藝達到了小容量水針1萬支/批的生產(chǎn)能力。產(chǎn)品純度大于98%，比滴度大于3.3%，各項質(zhì)檢結(jié)果都能達到FDA對腺病毒類生物制品的質(zhì)量標準要求。2023/8/2213基因藥物研發(fā)中心研發(fā)中心工藝平臺研發(fā)中心工藝產(chǎn)業(yè)化平臺是通用型腺病毒載體藥物研發(fā)中心已完成申報臨床所需藥學(xué)研究的品種品種代號研究單位研究時間治療性重組HBV腺病毒疫苗CHB3源興2004年3月至2005年11月治療性HIV腺病毒載體疫苗H30源興2005年12月至2007年8月治療性重組腺病毒EB病毒潛伏膜抗原疫苗LMP2CDC病毒病所委托源興承擔(dān)藥學(xué)研究2007年9月至2008年10月2023/8/2214基因藥物研發(fā)中心研發(fā)中心已完成申報臨床所需藥學(xué)研究的品種品種代號研究單位研究新藥申報三方面研究內(nèi)容

藥學(xué)研究藥效研究安全評價2023/8/2215基因藥物研發(fā)中心新藥申報三方面研究內(nèi)容藥學(xué)研究2023/8/215基因藥物藥學(xué)研究主要內(nèi)容上游構(gòu)建及鑒定細胞/毒種研究及三級庫建立原液工藝研究制劑工藝研究檢測方法及質(zhì)量標準研究穩(wěn)定性研究試制三批樣品2023/8/2216基因藥物研發(fā)中心藥學(xué)研究主要內(nèi)容上游構(gòu)建及鑒定2023/8/216基因藥物細胞及毒種研究細胞檢定、傳代穩(wěn)定性研究毒種檢定、代次及遺傳穩(wěn)定性研究2023/8/2217基因藥物研發(fā)中心細胞及毒種研究細胞檢定、傳代穩(wěn)定性研究2023/8/217建細胞庫原始細胞細胞來源于ATCC主細胞庫質(zhì)量控制工作細胞庫質(zhì)量控制細胞擴增細胞擴增

2023/8/2218基因藥物研發(fā)中心建細胞庫細胞來源于ATCC質(zhì)量控制工作細胞庫建毒種庫工作種子批病毒擴增原始種子批主種子批鑒定檢測質(zhì)量控制質(zhì)量控制病毒擴增2023/8/2219基因藥物研發(fā)中心建毒種庫病毒擴增鑒定檢測質(zhì)量控制質(zhì)量控制病毒擴增2023/8原液工藝流程、參數(shù)及技術(shù)指標Sepharose6FastFlow分子篩層析回收率（3批平均）

重組腺病毒種子罐收獲物超濾濃縮液SOURCE30Q陰離子交換柱層析層析收集液原液6000RPM離心20min500K膜超濾濃縮10倍細胞種子細胞罐擴增5L罐細胞培養(yǎng)，病毒擴增：DO60%,37℃,pH7.2,耗糖40g/d接種病毒，MOI為20

H30產(chǎn)量（3批平均）

53%460ml1.1×1015VP2023/8/2220基因藥物研發(fā)中心原液工藝流程、參數(shù)及技術(shù)指標Sepharose6Fast細胞罐工藝細胞復(fù)蘇培養(yǎng)毒種制備罐細胞培養(yǎng)罐細胞染毒罐病毒培養(yǎng)純化2023/8/2221基因藥物研發(fā)中心細胞罐工藝細胞復(fù)蘇培養(yǎng)毒種制備罐細胞培養(yǎng)罐細胞染毒罐病毒培養(yǎng)細胞罐葡萄糖消耗監(jiān)控曲線圖2023/8/2222基因藥物研發(fā)中心細胞罐葡萄糖消耗監(jiān)控曲線圖2023/8/222基因藥物研發(fā)中細胞罐產(chǎn)毒濃度曲線2023/8/2223基因藥物研發(fā)中心細胞罐產(chǎn)毒濃度曲線2023/8/223基因藥物研發(fā)中心細胞罐病毒收獲曲線2023/8/2224基因藥物研發(fā)中心細胞罐病毒收獲曲線2023/8/224基因藥物研發(fā)中心純化工藝罐病毒收獲液離心超濾濃縮離子交換層析酶切分子篩層析原液2023/8/2225基因藥物研發(fā)中心純化工藝罐病毒收獲液離心超濾濃縮離子交換層析酶切分子篩層析原純化圖譜2023/8/2226基因藥物研發(fā)中心純化圖譜2023/8/226基因藥物研發(fā)中心制劑工藝流程圖病毒保存液原液半成品配制除菌分裝軋蓋燈檢貼簽包裝、貯存鋁蓋清洗、烘干膠塞滅菌西林瓶清洗、干烤檢測檢測

2023/8/2227基因藥物研發(fā)中心制劑工藝流程圖病毒保存液原制劑處方篩選結(jié)果從以上結(jié)果可以看出，處方Ⅰ為最優(yōu)，處方Ⅱ次之，處方Ⅲ最差，處方Ⅳ較差。于是將處方確定為處方Ⅰ。

不同處方貯存情況比較圖0.00E+005.00E+081.00E+091.50E+092.00E+092.50E+093.00E+093.50E+094.00E+094.50E+09012345678貯存時間（周）滴度（IU/ml）處方1處方2處方3處方42023/8/2228基因藥物研發(fā)中心制劑處方篩選結(jié)果從以上結(jié)果可以看出，處方Ⅰ為最優(yōu)，處方Ⅱ次之

質(zhì)量標準及檢測方法檢測項目注射液方法外觀（含可見異物）符合藥典相應(yīng)規(guī)定中國藥典三部附錄ⅤBpH值7.0－8.0中國藥典三部附錄ⅤA裝量≥1.0ml中國藥典三部附錄ⅠA鑒別試驗符合相應(yīng)的規(guī)定PCR法病毒顆粒數(shù)1.0×1011VP/ml(80-150%)UV法比滴度（IU/Vp）≥3.3%TCID50法HPLC純度≥95%HPLC法小鼠效力試驗陽性率≥60%ELISPOT法293細胞DNA殘留量≤10ng/劑量用地高辛試劑盒方法（固相斑點雜交法）牛血清白蛋白殘留量≤100ng/劑量ELISA法RCA＜1RCA/3×1010VPA549細胞檢測法（空斑法）AAV檢測不得檢出PCR法293細胞蛋白殘留量≤100ng/劑量ELISA法無菌試驗（含支原體）陰性中國藥典三部附錄ⅫA和ⅫB細菌內(nèi)毒素＜10EU/劑量中國藥典三部附錄ⅫE小鼠異常毒性試驗符合規(guī)定中國藥典三部附錄ⅫF2023/8/2229基因藥物研發(fā)中心質(zhì)量標準及檢測方HPLC純度2023/8/2230基因藥物研發(fā)中心HPLC純度2023/8/230基因藥物研發(fā)中心免疫熒光檢測2023/8/2231基因藥物研發(fā)中心免疫熒光檢測2023/8/231基因藥物研發(fā)中心

穩(wěn)定性研究試驗結(jié)果

穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明，在-80℃、-20℃和2-8℃存放9個月，本品質(zhì)量都保持穩(wěn)定，而在37℃其質(zhì)量有顯著下降。

不同溫度貯存情況圖0.00E+005.00E+081.00E+091.50E+092.00E+092.50E+093.00E+093.50E+094.00E+094.50E+090周1周2周3周4周5周6周2月3月6月9月貯存時間滴度（IU/ml）-80℃-20℃2－8℃37℃2023/8/2232基因藥物研發(fā)中心

生物制品藥學(xué)研究申報資料《藥品注冊管理辦法》藥學(xué)研究資料

7.藥學(xué)研究資料綜述。

8.生產(chǎn)用原材料研究資料：（1）生產(chǎn)用動物、生物組織或細胞、原料血漿的來源、收集及質(zhì)量控制等研究資料；（2）生產(chǎn)用細胞的來源、構(gòu)建（或篩選）過程及鑒定等研究資料；（3）種子庫的建立、檢定、保存及傳代穩(wěn)定性資料；（4）生產(chǎn)用其它原材料的來源及質(zhì)量標準。

9.原液或原料生產(chǎn)工藝的研究資料，確定的理論和實驗依據(jù)及驗證資料。

10.制劑處方及工藝的研究資料，輔料的來源和質(zhì)量標準，及有關(guān)文獻資料。

11.質(zhì)量研究資料及有關(guān)文獻，包括參考品或者對照品的制備及標定,以及與國內(nèi)外已上市銷售的同類產(chǎn)品比較的資料。

12.臨床試驗申請用樣品的制造和檢定記錄（連續(xù)3批）。

13.制造和檢定規(guī)程草案，附起草說明及檢定方法驗證資料。

14.初步穩(wěn)定性研究資料。

15.直接接觸制品的包裝材料和容器的選擇依據(jù)及質(zhì)量標準。2023/8/2233基因藥物研發(fā)中心生物制品藥學(xué)研究申報資料《藥品注冊管理辦法》2023/8/2樣品試制條件要求《藥品注冊現(xiàn)場核查管理規(guī)定》☆臨床試驗用藥物應(yīng)當(dāng)在符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的車間制備。制備過程應(yīng)當(dāng)嚴格執(zhí)行《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。☆樣品的原始批生產(chǎn)記錄與申報資料工藝一致。☆必須通過藥監(jiān)局現(xiàn)場核查。2023/8/2234基因藥物研發(fā)中心樣品試制條件要求《藥品注冊現(xiàn)場核查管理規(guī)定》2023/8/2腺病毒產(chǎn)品藥學(xué)研究的核心生產(chǎn)工藝的可放大性及穩(wěn)定性樣品必須用具有規(guī)模放大性、可穩(wěn)定批量生產(chǎn)的工藝制備檢驗方法經(jīng)過驗證產(chǎn)品質(zhì)量必須通過中檢所復(fù)核2023/8/2235基因藥物研發(fā)中心腺病毒產(chǎn)品藥學(xué)研究的核心生產(chǎn)工藝的可放大性及穩(wěn)定性2023腺病毒產(chǎn)品藥學(xué)研究的關(guān)鍵點★建立毒種產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用標準和評估方法比滴度

SFDA要求腺病毒制品比滴度≥3.3%。

產(chǎn)量單細胞產(chǎn)量是否適合產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。

通過毒種構(gòu)建和工藝優(yōu)化來解決?！锝①|(zhì)量標準★按照GMP條件試生產(chǎn)

如樣品試制所需的原輔料、直接接觸藥品的包裝材料等是否具有合法來源（如供貨協(xié)議、發(fā)票、出入庫憑證等）及質(zhì)量合格證明（如檢驗報告）……★三批注冊抽檢樣品及臨床研究用樣品必須通過中檢所檢驗合格。2023/8/2236基因藥物研發(fā)中心腺病毒產(chǎn)品藥學(xué)研究的關(guān)鍵點★建立毒種產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用標準和評估方

THANKYOU2023/8/2237基因藥物研發(fā)中心2023/8/237基因藥物研發(fā)中心

1、最孤獨的時光，會塑造最堅強的自己。

2、把臉一直向著陽光，這樣就不會見到陰影。

3、永遠不要埋怨你已經(jīng)發(fā)生的事情，要么就改變它，要么就安靜的接受它。

4、不論你在什么時候開始，重要的是開始之后就不要停止。

5、通往光明的道路是平坦的，為了成功，為了奮斗的渴望，我們不得不努力。

6、付出了不一定有回報，但不付出永遠沒有回報。

7、成功就是你被擊落到失望的深淵之后反彈得有多高。

8、為了照亮夜空，星星才站在天空的高處。

9、我們的人生必須勵志，不勵志就仿佛沒有靈魂。

10、拼盡全力，逼自己優(yōu)秀一把，青春已所剩不多。

11、一個人如果不能從內(nèi)心去原諒別人，那他就永遠不會心安理得。

12、每個人心里都有一段傷痕，時間才是最好的療劑。

13、如果我不堅強，那就等著別人來嘲笑。

14、早晨給自己一個微笑，種下一天旳陽光。

15、沒有愛不會死，不過有了愛會活過來。

16、失敗的定義：什么都要做，什么都在做，卻從未做完過，也未做好過。

17、當(dāng)我微笑著說我很好的時候，你應(yīng)該對我說，安好就好。

18、人不僅要做好事，更要以準確的方式做好事。

19、我們并不需要用太華麗的語言來包裹自己，因為我們要做最真實的自己。

20、一個人除非自己有信心，否則無法帶給別人信心。

21、為別人鼓掌的人也是在給自己的生命加油。

22、失去金錢的人損失甚少，失去健康的人損失極多，失去勇氣的人損失一切。

23、相信就是強大，懷疑只會抑制能力，而信仰就是力量。

24、那些嘗試去做某事卻失敗的人，比那些什么也不嘗試做卻成功的人不知要好上多少。

25、自己打敗自己是最可悲的失敗，自己戰(zhàn)勝自己是最可貴的勝利。

26、沒有熱忱，世間便無進步。

27、失敗并不意味你浪費了時間和生命，失敗表明你有理由重新開始。

28、青春如此華美，卻在煙火在散場。

29、生命的道路上永遠沒有捷徑可言，只有腳踏實地走下去。

30、只要還有明天，今天就永遠是起跑線。

31、認真可以把事情做對，而用心卻可以做到完美。

32、如果上帝沒有幫助你那他一定相信你可以。

33、只要有信心，人永遠不會挫敗。

34、珍惜今天的美好就是為了讓明天的回憶更美好。

35、只要你在路上，就不要放棄前進的勇氣，走走停停的生活會一直繼續(xù)。

36、大起大落誰都有拍拍灰塵繼續(xù)走。

37、孤獨并不可怕，每個人都是孤獨的，可怕的是害怕孤獨。

38、寧可失敗在你喜歡的事情上，也不要成功在你所憎惡的事情上。

39、我很平凡，但骨子里的我卻很勇敢。

40、眼中閃爍的淚光，也將化作永不妥協(xié)的堅強。

41、我不去想是否能夠成功，既然選了遠方，便只顧風(fēng)雨兼程。

42、寧可自己去原諒別人，莫等別人來原諒自己。

43、踩著垃圾到達的高度和踩著金子到達的高度是一樣的。

44、每天告訴自己一次：我真的很不錯。

45、人生最大的挑戰(zhàn)沒過于戰(zhàn)勝自己！

46、愚癡的人，一直想要別人了解他。有智慧的人，卻努力的了解自己。

47、現(xiàn)實的壓力壓的我們喘不過氣也壓的我們走向成功。

48、心若有陽光，你便會看見這個世界有那么多美好值得期待和向往。

49、相信自己，你能作繭自縛，就能破繭成蝶。

50、不能強迫別人來愛自己，只能努力讓自己成為值得愛的人。

51、不要拿過去的記憶，來折磨現(xiàn)在的自己。

52、汗水是成功的潤滑劑。

53、人必須有自信，這是成功的秘密。

54、成功的秘密在于始終如一地忠于目標。

55、只有一條路不能選擇――那就是放棄。

56、最后的措手不及是因為當(dāng)初游刃有余的自己

57、現(xiàn)實很近又很冷，夢想很遠卻很溫暖。

58、沒有人能替你承受痛苦，也沒有人能搶走你的堅強。

59、不要拿我跟任何人比，我不是誰的影子，更不是誰的替代品，我不知道年少輕狂，我只懂得勝者為。

60、如果你看到面前的陰影，別怕，那是因為你的背后有陽光。

61、寧可笑著流淚，絕不哭著后悔。

62、覺得自己做得到和做不到，只在一念之間。

63、跌倒，撞墻，一敗涂地，都不用害怕，年輕叫你勇敢。

64、做最好的今天，回顧最好的昨天，迎接最美好的明天。

65、每件事情都必須有一個期限，否則，大多數(shù)人都會有多少時間就花掉多少時間。

66、當(dāng)你被壓力壓得透不過氣來的時候，記住，碳正是因為壓力而變成閃耀的鉆石。

67、現(xiàn)實會告訴你，不努力就會被生活給踩死。無需找什么借口，一無所有，就是拼的理由。

68、人生道路，絕大多數(shù)人，絕大多數(shù)時候，人都只能靠自己。

69、不是某人使你煩惱，而是你拿某人的言行來煩惱自己。

70、當(dāng)一個人真正覺悟的一刻，他放棄追尋外在世界的財富，而開始追尋他內(nèi)心世界的真正財富。

71、失敗并不意味你浪費了時間和生命，失敗表明你有理由重新開始。

72、人生應(yīng)該樹立目標，否則你的精力會白白浪費。

73、山澗的泉水經(jīng)