藥理實驗課件

藥理學(xué)試驗1/57試驗一藥理試驗基礎(chǔ)知識試驗二

不一樣給藥途徑對藥品效應(yīng)影響試驗三藥品協(xié)同作用和拮抗作用試驗四戊巴比妥鈉LD50測定試驗五利尿藥對家兔尿量影響藥理學(xué)試驗

2/57試驗一藥理試驗基礎(chǔ)知識一、目1.掌握基本操作，鍛煉動手、動腦能力；2.更好地掌握藥理學(xué)基本理論知識；3.培養(yǎng)科學(xué)思維3/57二、

基本要求1.

試驗前：預(yù)習(xí)試驗內(nèi)容并復(fù)習(xí)有關(guān)理論知識；2.

試驗時⑴試驗器材要妥善保管；⑵試驗操作按步驟進行，認真觀測試驗中出現(xiàn)現(xiàn)象，實事求是地做好統(tǒng)計；⑶注意節(jié)省試驗藥品；⑷維持良好課堂紀律。3.

試驗后⑴各組同窗將試驗動物處死，試驗臺擦潔凈，將試驗方盤送回準備室；⑵值日生搞好試驗室衛(wèi)生，將死亡動物送至指定場所；⑶書寫試驗報告。4/57三、試驗報告書寫1.題目2.目標3.原理4.材料：試驗動物，器材，藥品5.辦法：用自己語言簡單扼要描述出來；6.成果：要求真實、清楚；7.討論：將試驗成果進行比較、分析；試驗中有哪些不足之處；成果異常或失敗原因；8.結(jié)論：將試驗成果進行歸納總結(jié)，應(yīng)帶有提醒性質(zhì)。5/57四、試驗設(shè)計基本標準1.隨機標準使每一試驗對象都有同等機會抽到試驗組或?qū)φ战M中，除處理原因外其他原因盡也許均衡一致，從而抵消非試驗原因影響。2.對照標準⑴組間對照：陰性對照，陽性對照，同原因不一樣水平對照；⑵本身前后對照3.

反復(fù)標準6/57五、試驗動物1.動物選擇⑴小白鼠：適用于需大量動物試驗，如某些藥品篩選，半數(shù)致死量測定。也較適用于避孕藥試驗、抗炎鎮(zhèn)痛藥試驗、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥試驗、抗腫瘤藥及抗衰老藥試驗等。⑵大白鼠：比較適用于抗炎藥品試驗，血壓測定、利膽、利尿藥試驗，也可用于進行亞急性和慢性毒性試驗。

7/57⑶豚鼠：因其對組胺敏感，并易于致敏，故常被選用于抗過敏藥、平喘藥和抗組胺藥試驗。也常用于離體心臟、心房、腸管試驗。又因它對結(jié)核敏感，常用于抗結(jié)核病藥試驗。⑷家兔：常用于觀測研究腦電生理作用，藥品對小腸作用。由于家兔體溫變化敏感，也常用于體溫試驗，用于熱原檢查。⑸狗：狗是統(tǒng)計血壓，呼吸最常用大動物。還可利用狗做成胃瘺、腸瘺，以觀測藥品對胃腸蠕動和分泌影響。在進行慢性毒性試驗時，也常采取狗。8/572.試驗動物編號狗、兔等較大動物可用特制鋁質(zhì)號碼牌固定在頸部或耳上。大鼠、小鼠如為白色可用黃色苦味酸在不一樣體表標志上標識。9/573.麻醉藥選擇⑴局部麻醉：常采取2％普魯卡因做皮下浸潤注射，可用于局部手術(shù)。⑵全身麻醉：①吸入麻醉：可將乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩內(nèi)，利用乙醚揮發(fā)性質(zhì)，經(jīng)肺泡吸取，作用較快，適用于小鼠、大鼠短時間麻醉。②注射麻醉：常用戌巴比妥鈉和烏拉坦。10/574.動物捉拿及固定辦法⑴小白鼠右手抓住其尾部放在鼠籠蓋鐵紗網(wǎng)上，用左手拇指及食指沿其背部向前抓起頸背部皮膚，并以左手小指、無名指固定其尾部，便可將小鼠固定在手上。⑵大白鼠用右手提起尾部，放在粗糙面上，左手拇指和食指捉其頭部，其他三指夾住背腹部即可固定。11/57⑶豚鼠豚鼠性情溫和不咬人，用手握住軀干即可。⑷家兔可用一手抓住家兔頸背部皮膚，將兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿勢。在進行仰位手術(shù)操作時，可用繩帶將其四肢仰位捆綁在兔手術(shù)臺上。頭部用兔頭固定夾固定。12/575.動物給藥辦法⑴小白鼠①灌胃法(i.g.)：以左手固定小鼠后，使其腹部朝上，頸部伸直。右手持配有灌胃針頭注射器，自口角插入口腔，再從舌面沿上腭進入食道。小鼠灌胃容量一般為0.1-0.3m1／10g。②腹腔注射(i.p.)：以左手固定小鼠，辦法同灌胃，右手持注射器，取30度角將針頭從下腹部向頭端刺入腹腔。進針部位不宜過高，刺入不宜太深，以免傷及內(nèi)臟。小鼠腹腔注射量一般為0.1-0.3ml／l0g。13/57③皮下注射(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起皮膚處進針即可。④靜脈注射(i.v.)：將小鼠置于特制固定筒內(nèi)或倒置大漏斗下，讓其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或?qū)⑹笪苍?0'C熱水中浸泡半分鐘使血管擴張。左手拉尾端，右手持注射器將針頭刺入尾靜脈，推入藥液。14/57⑵家兔①灌胃：需兩人合作進行。一人取坐位用兩腿夾持兔身，左手握家兔雙耳，右手抓住兩前肢。另一人將木制開口器橫插家兔口內(nèi)，壓住舌頭并固定之。取8號導(dǎo)尿管從開口器中部小孔插入食道。插管時如誤入氣管會出現(xiàn)動物掙扎和呼吸困難。也可將導(dǎo)尿管外端浸入水中，如有氣泡吹出，表達插在氣管內(nèi)，此時應(yīng)拔管重插。當(dāng)判明導(dǎo)尿管在食道以內(nèi)后，用注射器接通導(dǎo)尿管將藥液推入。15/57②皮下、腹腔注射：給藥辦法基本上同小鼠，唯針頭可稍大，給藥量可稍多。皮下與肌內(nèi)為0.5-1.0/mg，腹腔為1.0-5.0ml/mg。③靜脈注射：將家兔置固定箱內(nèi)，撥去耳殼外緣毛，選擇一條比較顯著耳緣靜脈，用酒精棉球涂擦皮膚，使血管顯露。用左手拇指和中指捏住兔耳尖部，食指墊在兔耳注射處下面，右手持注射器，將針頭從近耳尖處刺入，當(dāng)確認針頭在血管中后，將藥液推入。16/576.動物處死：大、小鼠一般用頸椎脫臼法處死。17/57一、試驗?zāi)繕?/p>

1.觀測不一樣給藥途徑對同一藥品作用速度、強度影響；2.觀測同一藥品從不一樣途徑進入機體可產(chǎn)生不一樣作用。二、試驗材料

注射器、針頭、小鼠灌胃針頭、燒杯、一般天平、硫酸鎂溶液試驗二

不一樣給藥途徑對藥品作用影響

18/57三、試驗內(nèi)容1.觀測不一樣途徑給小白鼠使用戊巴比妥鈉后，麻醉開始時間、維持時間和麻醉深度不一樣。

[觀測指標]觀測給藥前后活動及翻正反射等情況。19/57[試驗辦法]取體重相近小白鼠3只隨機分為三組，稱其體重分別放入鐘罩內(nèi)，觀測它們正?；顒蛹胺瓷淝闆r，然后按下表給藥；觀測小白鼠用藥后反應(yīng)及活動情況，以翻正反射消失時作為麻醉開始指標。統(tǒng)計麻醉開始時間，麻醉維持時間，麻醉深度有何不一樣（用鑷子夾其后肢看其反應(yīng)）。組別處理措施灌胃組0.3%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g量灌胃肌注組0.3%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g量肌注腹注組0.3%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g量腹腔注射20/57[試驗成果]試驗成果填入下表中

不一樣途徑對藥品效應(yīng)影響組別給藥措施麻醉開始時間麻醉維持時間麻醉深度灌胃組肌注組腹注組21/572.觀測同一種藥品硫酸鎂，給小白鼠肌內(nèi)注射和灌胃給藥引發(fā)作用性質(zhì)不一樣。[觀測指標]動物活動增加情況、呼吸急促、反射亢進、震顫、驚厥及死亡時間、炭末推進率等。22/57[試驗辦法]取禁食12h小鼠3只，稱重，分別標為對照組、灌胃組和肌內(nèi)注射組按下列給藥：A：對照組：灌胃給生理鹽水0.2ml/10g；B：灌胃組：灌胃給3.5％硫酸鎂溶液0.2ml/10g；C：肌內(nèi)注射組：肌內(nèi)注射給3.5％硫酸鎂溶液0.2ml/10g。23/57給藥后注意觀測動物活動情況，是否有肌肉松弛體現(xiàn)。15min后每只小鼠均灌胃給予5%炭末阿拉伯膠混懸液0.2ml。炭末灌胃后15min，將小鼠脫臼處死，剖開腹腔，取出胃腸道。剪去附著在腸管上腸系膜,將腸管不加牽引地輕輕地平鋪在玻璃板上(玻璃板上滴少許鹽水)。以幽門為起點,測量炭末在腸管內(nèi)移動距離和小腸(自幽門至回盲部)全長,計算每只小鼠炭末移動距離占小腸全長百分率，比較3組動物活動情況和胃腸炭末推進率有何不一樣。24/57[試驗成果]試驗成果填入下表中

不一樣途徑對藥品效應(yīng)影響鼠號

體重(g)

藥品及劑量

給藥途徑

動物反應(yīng)

炭末推進率（%）ABC炭末推進率計算公式：炭末移動距離（cm）

小腸推進率=

×100%

小腸全長（cm）25/57六、思考討論題

1、灌胃和腹腔注射給硫酸鎂效應(yīng)有哪些不一樣？為何？2、給藥前動物禁食12小時原因。3、為何比較炭末推進率，而非小腸全長或炭末在小腸內(nèi)推進距離？4、本次試驗成果對臨床用藥有何提醒？26/57試驗三藥品協(xié)同作用和拮抗作用［目標］觀測激動劑與拮抗劑之間互相作用［材料］兔子１只，0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%鹽酸腎上腺素注液,0.2%硝酸毛果蕓香堿注射液27/57［辦法］１、取兔放于兔固定箱內(nèi)固定，避免陽光直射眼睛，用毛剪剪去兔兩眼睫毛，然后用瞳孔量尺測量瞳孔大小，連續(xù)三次，取平均值。２、在兔左眼滴入０.2%毛果蕓香堿3滴，滴藥時用姆指和食指將下眼瞼提起,使成囊狀,再用中指壓住鼻淚管開口處,避免藥液流入鼻淚管而不起作用，再用右手滴入藥液。15分鐘后再測量瞳孔大小，連續(xù)三次，取平均值，并進行比較。28/573、滴入毛果蕓香堿20分鐘后，分別在兩眼滴入0.1%腎上腺素3滴，15分鐘后測量兩瞳孔大小，連續(xù)3次，取平均值并進行比較。4、滴入腎上腺素15分鐘后，分別于兩眼滴入0.05%硫酸阿托品注射液3滴，15分鐘后觀測兩眼瞳孔變化，并測量其大小，連續(xù)3次，并取平均值。29/57項目正常毛果蕓香堿腎上腺素阿托品瞳孔大小左眼

右眼

［統(tǒng)計］

［討論題］從試驗成果中如何說明藥品協(xié)同作用和拮抗作用？30/57試驗四戊巴比妥鈉LD50測定一、毒理學(xué)試驗辦法1.急性毒性試驗：一次性大劑量給予藥品后觀測藥品作用；2.慢性毒性試驗：長期連續(xù)數(shù)次給予中、小劑量藥品，觀測動物某些器官慢性受損程度；3.特殊毒性試驗：致癌，致畸，致突變，過敏反應(yīng)等。31/57二、LD50測定目標與原理目標：通過試驗學(xué)習(xí)測定LD５０辦法、步驟和計算過程，理解急性毒性試驗常規(guī)辦法。LD50是指使一群體動物中半數(shù)死亡劑量，是衡量藥品毒性大小指標，是評價藥品優(yōu)劣主要參數(shù)。理解藥品單次給藥或短時間內(nèi)數(shù)次給藥后動物所產(chǎn)生毒性反應(yīng)及其嚴重程度，為臨床安全用藥及監(jiān)測提供一定參照。32/57LD50測定辦法很多，較為常用有改良寇氏法、簡化概率單位法、序貫法、孫瑞元點斜法和Bliss-Finney法。本試驗介紹成果較精確、計算簡便、可計算出所有有關(guān)參數(shù)改良寇氏法及及計算機應(yīng)用程序中Bliss-Finney法。33/57三、詳細試驗(以戊巴比妥鈉為例)

［材料］1.動物：小白鼠(體重18-22g，雌雄各半，試驗前禁食12h)2.器材：注射器、鼠籠、天平、計算器等。3.藥品：戊巴比妥鈉34/57[試驗辦法]1、預(yù)試驗：①摸索劑量范圍：根據(jù)經(jīng)驗或文獻找出動物100%及0%死亡劑量，即上下限劑量（Dm,Dn）。對于無毒性參照資料藥品，一般先配制最大濃度藥劑，然后按等比關(guān)系（如2：1）稀釋成多種劑量，辦法是每組取2∽10只小鼠，按估計劑量給藥，假如全死則減少劑量，假如全活則增加劑量，進而確定出Dm,Dn。35/57②確定組數(shù)、計算各組劑量：組數(shù)（G）：5-8組各組劑量：各組劑量要按等比級數(shù)排列，按下列公式求出公比r:按公比求各組劑量：D1，D2，D3，D4，D5，……，Dm其中D1=Dn=最小劑量，D2=D1·r，D3=D2·r，……Dm=Dn-1·r③配制等比稀釋溶液：要求各小鼠給藥容積同樣，0.1ml/10g∽0.2ml/10g，按下列公式計算濃度：36/572、正式試驗①分組編號：隨機將小鼠分為五組，每組10只，♀♂各半。②給藥：分別將配制好等比稀釋液按0.2ml/10g由ip給藥。③觀測統(tǒng)計：給藥后觀測并統(tǒng)計中毒癥狀，30分鐘后統(tǒng)計各組死亡小鼠數(shù)。37/57[試驗成果]

全班成果匯總，計算硝酸士寧LD50、LD50可信限和可信限率。①成果處理試驗資料按下表列出：

受試物劑量對數(shù)劑量動物數(shù)死亡率概率單位LD50（mg/kg）(X)(只)(%)(Y)及置信限(95%)

1234538/57②計算辦法計算LD50及95%可信限：LD50=lg–1[Xm－i(∑P－0.5)]Xm=最大劑量對數(shù)值i=相鄰兩組比值對數(shù)（lgr）P=各組死亡率∑P=各組死亡率總和LD5095%平均可信限=LD50±4.5LD50·SX50其中SX50為LD50標準誤其中n=各組動物數(shù)ΣP2=各組死亡率平方總和39/57[注意事項]藥品稱量、配制及給藥精確程度是本試驗成功是否關(guān)鍵。1.試驗過程中給藥劑量一定要精確。2.注意觀測中毒癥狀及其發(fā)生時間、死亡時間。［討論題］什么叫ＬＤ５０？測定ＬＤ５０意義和根據(jù)是什么？40/57試驗五利尿藥對家兔尿量影響一、利尿藥1.定義：是作用于腎臟，增加電解質(zhì)和水排出，使尿量增多藥品。2.分類：根據(jù)利尿藥作用部位，可分為高效、中效和低效利尿藥3.呋塞米為高效利尿藥⑴利尿作用特點⑵作用機制⑶臨床應(yīng)用⑷不良反應(yīng)41/57二、利尿藥試驗辦法1.動物選擇可用大白鼠、小白鼠、家兔、貓和狗，其中以大白鼠較為常用。2.試驗辦法⑴代謝籠試驗法：適用于大、小白鼠；⑵直接自輸尿管或膀胱搜集尿液：適用于較大動物（家兔、貓、狗）。42/57三、詳細試驗[目標]1.理解急性利尿試驗辦法；2.觀測速尿?qū)β樽硗美蜃饔?。[材料]1.動物：家兔2.器材：兔手術(shù)臺、量筒、注射器、手術(shù)器械3.藥品：25％烏拉坦，1％速尿43/57[辦法]1.麻醉：取家兔一只，稱重，耳緣i.v.25％烏拉坦4ml/kg；注意：注射速度要遲緩，隨時觀測角膜反射，反射消失即停頓注射。2.水負荷：麻醉后i.g.給自來水40ml/kg；注意：避免灌至氣管，將灌胃管外端浸入水中，若有氣泡立即拔出。3.手術(shù)：背位固定后剪去下腹部毛