基因芯片技術(shù)在宮頸癌篩查中的應(yīng)用(安溪)

基因芯片技術(shù)在宮頸癌篩查中的應(yīng)用HPV與宮頸癌1

HPV基因分型檢測的臨床意義2HPV檢測后的處理3亞能HPV基因分型檢測產(chǎn)品介紹4亞能HPV基因分型檢測的臨床應(yīng)用

5主要內(nèi)容一.HPV與宮頸癌

梅艷芳2003年12月30日病故，年僅40歲

李媛媛2002年10月20日病故，年僅41歲

子宮頸癌：一個全球性的問題最常見的癌癥類型之一女性惡性腫瘤中第二位生殖道惡性腫瘤第一位新發(fā)病例：全世界50萬/年80％發(fā)生在發(fā)展中國家亞洲約占一半死亡：23.3～25萬/年流行病學(xué)特點:

發(fā)病增長的趨勢、發(fā)病趨于年輕化、發(fā)病史縮短我國宮頸癌的發(fā)病情況我國婦女患宮頸癌比例15/10萬，也是宮頸癌高發(fā)國家之一我國目前宮頸癌患者約40萬，每年新增患者15萬，居女性生殖道腫瘤首位我國宮頸癌死亡率為11.34%，居女性癌癥死亡率第二位，特別在西部地區(qū)，宮頸癌居女性癌癥死亡率之首我國宮頸癌的發(fā)病情況發(fā)病年齡：平均發(fā)病年齡:>35歲

高峰年齡:45~49歲明顯趨向年輕化小于35歲的宮頸癌患者：

70年代:1.22%→80年代:1.42%→

90年代初:5.01%→

90年代末:9.88%

（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院統(tǒng)計）宮頸癌生物學(xué)病因研究的進程HaraldzurHausen2008年諾貝爾生理學(xué)/醫(yī)學(xué)獎獲得者之一HPV與宮頸癌的關(guān)系WalboomersJM,etal.JPathol.1999Sep;189(1):12-9

人乳頭瘤病毒

（HumanPapillomaviruse,HPV）HPV病毒電鏡圖雙鏈DNA無包膜病毒環(huán)狀DNA，約8Kb病毒顆粒直徑為50～55nm依靠宿主細胞進行復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯宿主和組織特異性

HPV基因型(型別)及分類低危型：往往引起外生殖器濕疣或?qū)m頸低度病變高危型：與子宮頸癌及子宮頸上皮內(nèi)瘤變的發(fā)生相關(guān)基因型：L1基因區(qū)核苷酸序列差異性大于10%亞型:L1基因區(qū)核苷酸序列差異性為2%~10%

HPV感染途徑及臨床過程HPV感染途徑主要為性傳播和皮膚接觸傳播

HPV感染部位

復(fù)層鱗狀上皮：宮頸、外生殖器、肛周、喉、食道

HPV感染的臨床過程潛伏感染—亞臨床感染—臨床感染－HPV相關(guān)腫瘤期HPV感染與宮頸病變的自然進程正常婦女HPV暴露主要是性傳播感染幾率：70％HPV感染一過性，80％平均8個月平均6~24個月CINICINII/III無細胞學(xué)改變/HPV消除子宮頸浸潤癌機體免疫機制5－10年輔助致癌因素潛伏感染期亞臨床感染期臨床癥狀期HPV相關(guān)腫瘤期二.HPV基因分型檢測的意義（一）宮頸病變及宮頸癌的篩查HPV基因分型檢測的重要性PapsmeardiagnosisHPVstatusNegativeASCLSILTotalHPV16+20.7%7.7%30.0%20.1%HPV18+17.7%0.0%0.0%15.4%Non-HPV16,18oncogenic+1.5%6.4%4.0%1.8%OncogenicHPV–0.5%3.3%9.1%0.5%JNatlCancerInst2005;97:1072–9HPV基因分型檢測的重要性波特蘭（Portland）的一項大樣本（20810人）研究表明：≥30歲細胞學(xué)陰性的女性，在10年的前瞻性研究中，HPV16或18陽性的婦女的CIN3+的累積發(fā)病率分別為20.7%，

17.7%，而其他高危型陽性的婦女，CIN3+的累積發(fā)病率僅僅為1.5%。結(jié)論：將HPV16，18從其他高危型區(qū)分出來，能鑒定具有最高CIN3+風(fēng)險的婦女㈡對ASCUS的分流

2006consensusguidelinesformanagementofwomenwithabnormalcervicalcancerscreeningtestswww.AJOG.ORGEuropeanguidelinesforqualityassuranceincervicalcancerscreening:recommendationsforclinicalmanagementofabnormalcervicalcytology,part1.Cytopathology2008,19,342–354（三）宮頸病變及治療后的隨訪（1）2006consensusguidelinesforthemanagementofwomenwithcervicalintraepithelialneoplasiaoradenocarcinomainsitu.www.AJOG.org（三）宮頸病變及治療的隨訪(2)GynecolOncol2005;99(Suppl3):7–11.CancerTreatRev2004;30:205–11.BritishJournalofCancer(2001)84(6),796–801（三）隨訪后的評估（3）基因分型檢測可以從根本上明確患者是相同基因型的持續(xù)感染還是不同基因型的反復(fù)感染同一高危型HPV持續(xù)感染風(fēng)險更高KjaerSK,vandenBruleAJ,PaullG,etal.BMJ2002;325:572.㈣指導(dǎo)HPV疫苗的研究及使用

HPV基因型的分布具有地理差異性現(xiàn)有HPV疫苗都為預(yù)防性疫苗，HPV16、18、6、11型注射疫苗前做HPV分型檢測非常必要疫苗注射后效果確定離不開分型檢測BaoYP,LiN,SmithJS,QiaoYL,ACCPABmembers.IntJGynecolCancer2007;17:1-9.（五）為HPV相關(guān)課題研究提供方向

應(yīng)用HPVDNA基因分型檢測在各地區(qū)進行HPV流行病學(xué)調(diào)查研究。HPV不同基因型在致癌能力的比較研究。宮頸病變與HPV多重感染的關(guān)系探討。HPV基因型與宮頸癌組織病理學(xué)的對應(yīng)關(guān)系研究。三.HPV檢測后的處理最佳篩查及處理方案HPV檢測的處理

HPV感染的治療目前沒有任何藥物能夠完全治療HPV感染,都不是直接作用或消滅HPV的，效果有限目前的治療方針就是“治病”即“治毒”，治療HPV感染造成的宮頸上皮內(nèi)瘤變，就是幫助病人來清除HPV感染三階梯診斷：HPV+細胞學(xué)→陰道鏡檢→組織學(xué)診斷正確認(rèn)識和對待HPV感染（一）

①HPV感染較為常見，特別是30歲以前性活躍時期②多數(shù)HPV感染是“一過性”的，并不引致宮頸病變③只有少數(shù)持續(xù)性感染才會引發(fā)宮頸病變④從HPV感染、到CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ到浸潤癌需5～10年⑤引致宮頸癌的是高危型HPV，低危型HPV感染極少引發(fā)宮頸癌；⑥HPV（+）只說明是一種感染，并非是一種疾?、邲]有HPV感染就不會得宮頸癌⑧HPV感染主要是通過性傳播，但不排除其他途徑⑨HPV感染不能作為性生活復(fù)雜、混亂的指征正確認(rèn)識和對待HPV感染（二）四.亞能HPV基因分型產(chǎn)品介紹HPV基因分型檢測試劑盒國食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2008第3400994號人乳頭瘤病毒分型基因芯片檢測系統(tǒng)專利號：ZL200410037617.7亞能HPV基因分型技術(shù)原理

（PCR-反向點雜交法）一次雜交反應(yīng)可以檢測多種靶序列PCR技術(shù)特點-高度的靈敏性PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的

35輪循環(huán)，擴增量理論上達235個拷貝（680億?。┓聪螯c雜交法－高特異性、高通量

一種斑點雜交技術(shù)固定化探針而不是靶序列，故名“反向”一次雜交即可檢測多種靶序列亞能HPV基因分型試劑盒性能指標(biāo)靈敏度：

≥1.0×103copies/mL準(zhǔn)確性：98%以上特異性：98%以上重復(fù)性：98%以上穩(wěn)定性：有效期內(nèi)完全能滿足以上指標(biāo)檢測通量：同時分型檢測23種HPV基因型

18種高危型：16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，83，MM45種低危型：6，11，42，43，44HPV基因分型檢測的適用人群三年以上性行為或21歲以上有性行為的女性宮頸病變及宮頸癌患者治療后的隨訪尖銳濕疣患者新生兒咽喉部HPV感染導(dǎo)致的疣體組織起始年齡：經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)：25-30歲經(jīng)濟欠發(fā)達地區(qū)：35-40歲高危人群：起始年齡應(yīng)相應(yīng)提前終止年齡:65歲以上危險性低亞能HPV基因分型檢測流程標(biāo)本采集及注意事項受檢前須知：1、月經(jīng)來潮后10～18天為最佳檢查時間2、檢查前3天內(nèi)不要做陰道沖洗，不要陰道內(nèi)用藥3、檢查前24h內(nèi)不要行性生活樣品保存：室溫下放置時間不超過12h，4℃保存不超過7天，-20℃保存不超過3個月結(jié)果判讀HPV16HPV6,52陰性樣本單一感染多重感染

五.亞能HPV基因分型檢測的臨床應(yīng)用

WORLDHEALTH ORGANISATIONMONDIALEORGANIZATION ELASANTE

CENTREINTERNATIONALDERECHERCHESURLECANCERINTERNATIONALAGENCYFORRESEARCHONCANCER(IARC)

PrevalencesurveysofhumanpapillomavirusinfectionandcervicalneoplasiainChina

中國婦女人乳頭瘤病毒感染和子宮頸癌的流行病學(xué)調(diào)查

（ICE/92/3-3CHN，2004）參加單位：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所/腫瘤醫(yī)院流行病學(xué)研究室北京大學(xué)深圳醫(yī)院婦產(chǎn)科廣東省深圳市婦幼保健院廣東省深圳市南山區(qū)計劃生育局世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究所(IARC)，法國里昂

選用亞能生物技術(shù)（深圳）有限公司開發(fā)的HPV基因分型檢測試劑浙江省45409例HPV機會性篩查報告07年1月1日～08年3月31日，浙江省內(nèi)11地市144所醫(yī)院進行機會性宮頸HPV-DNA篩查HPV-DNA檢測－基因芯片法（亞能生物）共檢測45409例，其中HPV（+）10574例，占23.3%浙江省婦科HPV感染流行病學(xué)調(diào)查協(xié)作組浙江省衛(wèi)生廳基金項目機會性篩查45409例HPV總陽性率為23.2％，其中有高危型的占84.2%單一亞型感染占61.8％多重HPV感染比例38.20%多重感染：2-3種HPV基因型感染為主，比例29.42%

高危型排序16>58>33>18>52

流行病學(xué)數(shù)據(jù)

年齡段（歲）HPV陽性比≤206.56％21－3038.93％31－4031.01％41－5016.76％51－604.94％61－701.50％>700.3％中華婦產(chǎn)科雜志,2009,44(8):023-027其他論文(200余篇)HumanpapillomavirusinfectioninwomeninShenzhenCity,People’sRepublicofChina,apopulationtypicalofrecentChineseurbanisation.IntJCancer.2007Sep15;121(6):1306-1311Humanpapillomavirusesinfectionsinwomenwithclinicalgynecologicdiseasesins