清眩降壓湯對自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響及腎臟保護(hù)作用

清眩降壓湯對自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響及腎臟保護(hù)作用

腎損害是高血壓最常見的靶器官損傷之一。大約18%的高血壓患者最終出現(xiàn)腎衰竭。血壓升高已成為導(dǎo)致患者進(jìn)入終末期腎疾病(ESRD)的獨(dú)立因素,因高血壓腎損害導(dǎo)致的慢性腎功能衰竭排在腎小球腎炎、糖尿病腎病之后,居第3位11.1實(shí)驗(yàn)動物及其許可證7周齡清潔級SHR(40只)、Wistar大鼠(10只),體重190~200g,購于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限公司,實(shí)驗(yàn)動物許可證號:SCXK(滬)2007-005。1.2國家政策文件血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)放射免疫分析試劑盒(北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司,批號:20080929);大鼠血管緊張素1-7(Ang1-7)酶聯(lián)免疫試劑盒(上海西唐生物科技有限公司,批號:0808252);AngⅡ免疫組織化學(xué)試劑盒(圣克魯茲生物科技公司);DAB顯色試劑(武漢博士德生物工程有限公司)。1.3g、夜交藤、生地黃、菊花、g、夜交藤清眩降壓湯顆粒劑由天麻30g、鉤藤30g、苦丁茶30g、黃芩10g、牛膝10g、杜仲10g、夜交藤30g、生地黃30g、桑葉15g、菊花15g組成,購自香港培力(南寧)藥業(yè)有限公司,諸藥混合,開水沖泡,微波爐加熱約15min至固體藥物完全溶化,制成混懸液;替米沙坦片(蘇州東瑞制藥有限公司,批號:H20061185)用純凈水制成混懸液。1.4計(jì)、物、擬物酶標(biāo)儀ELX808U(美國BIO-TEK公司);鼠尾血壓計(jì)ALC-NIBP(上海奧爾科特生物科技有限公司);光學(xué)顯微鏡YS100(Nikon);萬能研究型顯微鏡BX51(Olympus);圖像采集及分析系統(tǒng)(麥克奧迪)。1.5大鼠分組及模型評價(jià)將40只SHR依隨機(jī)數(shù)字表法分為中藥高劑量組、中藥低劑量組、替米沙坦組、模型組,每組10只。10只Wistar大鼠設(shè)為正常組。用藥劑量根據(jù)《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》1.6血清血壓檢測給藥前,單次給藥2h、6h、12h、24h,給藥3天、1周、4周、8周,分別檢測大鼠清晨血壓。采用尾套法,無創(chuàng)血壓測量分析軟件,恒溫箱加熱保持溫度38°C,可以看到規(guī)律的連續(xù)正弦波形,檢測6次,取均值,壓力檢測設(shè)定為90~230mmHg,加壓速度為“快”,半自動模式。1.7凍存麻醉的制備給藥8周后,所有大鼠用10%的水合氯醛(400mg/kg)腹腔注射麻醉,腹主動脈真空取血,凍存?zhèn)溆?。腹主動脈取血后,立即取左側(cè)腎臟,沿腎臟長軸,做冠狀切面(保留腎門),沿腎門下緣,再做橫切,取保留腎門的部分,行HE染色和免疫組織化學(xué)檢測。1.8生化指標(biāo)的檢測AngⅡ的檢測是利用液相競爭抑制原理,采用平衡法對樣品進(jìn)行測定。Ang1-7采用酶聯(lián)免疫法測定。1.9抗和抗的制備取腎組織,HE染色,光鏡觀察。微波法修復(fù)抗原,分別加一抗(1∶200)和二抗,DBA顯色,具體操作步驟按照試劑說明書進(jìn)行。二甲苯脫水,中性樹脂封片,麥克奧迪圖像采集系統(tǒng)拍照(×200),取5個(gè)視野,計(jì)算平均灰度值。1.10統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差22.1各組大鼠單次給藥和給藥后血壓比較表1、表2示,與本組給藥前比較,單次給藥后2h、6h、12h、24h和給藥3天后,各組大鼠收縮壓和舒張壓,除替米沙坦組給藥后2h均下降外(2.2連續(xù)8周給藥大鼠血壓比較表3、表4示,與本組給藥前比較,給藥第1周、4周、8周后,清眩降壓湯高、低劑量組大鼠收縮壓未見顯著下降(2.3各組清血壓藥量比較表5示,給藥后,替米沙坦組血清AngⅡ含量明顯高于清眩降壓湯高、低劑量組,與正常組含量相當(dāng)。清眩降壓湯不能升高血清Ang1-7水平,替米沙坦可以升高血清Ang1-7水平(2.4大鼠肝腎變化給藥結(jié)束后,腎臟病理組織學(xué)觀察,模型組大鼠腎小球明顯增大,腎小管明顯增粗;清眩降壓湯高、低劑量組和替米沙坦組大鼠腎小球均可見到一定程度的增大,腎小管增大不明顯。3高血壓患者臨床療效分析SHR是目前高血壓實(shí)驗(yàn)研究中最常用的模型,與人原發(fā)性高血壓發(fā)病、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸有著比較相似的特征。病證結(jié)合的動物模型對中醫(yī)藥的基礎(chǔ)研究顯得非常重要,要求該模型疾病和證候穩(wěn)定、均一、可重現(xiàn)。SHR作為自發(fā)性高血壓模型,符合疾病的穩(wěn)定和均一性,是建立病癥結(jié)合的動物模型的理想途徑。研究發(fā)現(xiàn)該型大鼠情緒較為緊張、小便偏黃量少、大便顆粒小而干、眼突明顯、心率快、痛覺敏感,綜合這些行為學(xué)特征和體征,通過觀察臨床高血壓患者表現(xiàn)的眩暈頭痛、面紅目赤、煩躁易怒、便干尿赤的特征,初步判定該動物模型早期的高血壓癥狀類似中醫(yī)學(xué)中肝火亢盛型高血壓病特征現(xiàn)代人過食肥甘厚味,損傷脾胃,引起熱盛傷陰,可發(fā)展成陰虛陽亢型高血壓臨床研究發(fā)現(xiàn),清眩降壓湯聯(lián)合西藥較單用西醫(yī)抗高血壓藥對肝腎陰虛、肝陽上亢證高血壓病患者有更好的降壓療效,且能更好地改善患者臨床癥狀、提高生存質(zhì)量和增強(qiáng)左室舒張功能。能夠改善更年期女性高血壓動態(tài)特征,其中機(jī)制可能與抑制循環(huán)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)活性有關(guān)高血壓的不良后果是導(dǎo)致心腦腎等重要臟器的損害,高血壓防治的根本目的不僅僅是控制血壓,更重要的是控制由于高血壓導(dǎo)致的靶器官損害。本研究發(fā)現(xiàn)該方劑不能降低SHR的舒張壓,但從長期的角度來看,可以控制SHR的收縮壓進(jìn)一步升高,驗(yàn)證了前期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。與模型組對比,該方劑較好地抑制了由于高血壓導(dǎo)致的腎小球和腎小管增生,其中機(jī)制可能與控制SHR收縮壓的進(jìn)