《欽州大蠔人工苗種繁育技術(shù)規(guī)程》征求意見(jiàn)稿

ICS65.150CCSB5145代替DB45/T1084—2014TechnicalspecificationsforartificialseedlingproductionofCrassostreahongkongensis（本草案完成時(shí)間：2023-3-6）在提交反饋意見(jiàn)時(shí)，請(qǐng)將您知道的相關(guān)專(zhuān)利連同支持性文件一并附上。IDB45/T1084—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替DB45/T1084-2014《近江牡蠣苗種繁育技術(shù)規(guī)程》，與原文件相比，主要技術(shù)變化如下：——標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)修改為：“欽州大蠔苗種人工繁育技術(shù)規(guī)程”；——術(shù)語(yǔ)和定義中增加了“親貝”、“浮游幼蟲(chóng)”、“D型幼蟲(chóng)”、“殼頂幼蟲(chóng)”、“眼點(diǎn)幼蟲(chóng)”、“變態(tài)”和“稚貝”內(nèi)容；——增加了術(shù)語(yǔ)的英文名稱(chēng)，見(jiàn)3；——調(diào)整了培育池的深度，增加了池底坡度的要求，見(jiàn)5.2.2；——調(diào)整了餌料培育設(shè)施體積范圍，增加了培育容器，見(jiàn)5.3.2；——增加了親貝選擇對(duì)產(chǎn)地和體重的要求，見(jiàn)6.1；——調(diào)整了親貝促熟培育海水的鹽度要求，見(jiàn)6.2；——增加了親貝培育的日常管理要求，見(jiàn)6.4；——增加了卵液采集中水溫和洗卵的要求，見(jiàn)7.3；——調(diào)整了各時(shí)期幼蟲(chóng)的培育密度，見(jiàn)8.3；——增加了投餌藻類(lèi)種類(lèi)，見(jiàn)8.4；——?jiǎng)h除了各時(shí)期幼蟲(chóng)所需的培育天數(shù)，見(jiàn)8.5；——更換了采苗器及處理要求，見(jiàn)9.1；——調(diào)整了采苗器的投放密度，見(jiàn)9.2；——調(diào)整了附苗時(shí)間幼蟲(chóng)的大小范圍，增加了附苗條件，見(jiàn)9.3；——調(diào)整了出池貝苗的每餅附苗數(shù)量，見(jiàn)9.4.5；——增加了病害防治中對(duì)育苗池的消殺處理，見(jiàn)11；——修訂了藻類(lèi)培養(yǎng)用水和培養(yǎng)管理，見(jiàn)附錄A.3、A.4；本文件所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：DB45/T1084-2014，本次修訂為第一次修訂。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件由廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。本文件起草單位：廣西農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全服務(wù)協(xié)會(huì)、廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)科學(xué)研究院、欽州市欽南區(qū)水產(chǎn)技術(shù)推廣站、欽州市水產(chǎn)技術(shù)推廣站。本文件主要起草人：彭金霞、官俊良、韋嬪媛、何蘋(píng)萍、張興志、張立、羅麗俐、黃偉德、蘇朝捷、阮良鵬、鐘昌艷。1DB45/T1084—2022欽州大蠔人工苗種繁育技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了欽州大蠔（Crassostreahongkongensis）苗種人工繁育的場(chǎng)地條件、繁殖設(shè)施、親貝培育、人工授精與孵化、幼蟲(chóng)培育、附苗、出池苗及病害防治的技術(shù)操作要求。本文件適用于廣西行政區(qū)域內(nèi)欽州大蠔苗種的繁育生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB11607漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB/T17924地理標(biāo)志產(chǎn)品標(biāo)志通用要求SC/T9103海水養(yǎng)殖水排放要求NY/T391綠色食品產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量NY5362無(wú)公害食品海水養(yǎng)殖產(chǎn)地環(huán)境條件NY/T755綠色食品漁藥使用準(zhǔn)則3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1欽州大蠔Crassostreahongkongensis農(nóng)業(yè)部地理標(biāo)志產(chǎn)品，學(xué)名香港牡蠣（Crassostreahongkongensis隸屬于雙殼綱(Bivalvia)，珍珠貝目(Pteriodae)，牡蠣科(Ostreidae)，是Lam等學(xué)者采用線粒體基因組結(jié)合形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)從近江牡蠣（Crassostrearivularis）中分離出來(lái)的“白肉型”牡蠣。應(yīng)符合GB/T17924的規(guī)定。3.2殼高shellheight兩殼完全閉合時(shí)，由殼頂至腹緣的最大距離。3.3殼長(zhǎng)shelllength兩殼完全閉合時(shí)，由殼前端至殼后端的最大距離。3.4親貝parentshellfish可繁殖貝苗的、性腺已成熟的成貝。3.5浮游幼蟲(chóng)planktoniclarva2DB45/T1084—2022指營(yíng)浮游生活的各期幼蟲(chóng)的總稱(chēng)。3.6D型幼蟲(chóng)D-typelarva又稱(chēng)初期面盤(pán)幼蟲(chóng)。此期幼蟲(chóng)的主要特征是由殼腺分泌的貝殼包裹了全身，形成兩片側(cè)面觀像“D”字形的殼。3.7殼頂幼蟲(chóng)umbolarvaD型幼蟲(chóng)經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的發(fā)育，鉸合線開(kāi)始向背部隆起，形成殼頂?shù)挠紫x(chóng)。3.8眼點(diǎn)幼蟲(chóng)eyepointlarva雙殼貝類(lèi)幼蟲(chóng)后期，在鰓的原基背部形成一對(duì)球形的由黑色素聚集起來(lái)的感覺(jué)器官，稱(chēng)為眼點(diǎn)；是即將進(jìn)行附著生活的特征，此時(shí)的幼蟲(chóng)稱(chēng)為眼點(diǎn)幼蟲(chóng)。3.9變態(tài)metamorphosis幼蟲(chóng)面盤(pán)和眼點(diǎn)消失、出現(xiàn)次生殼、以鰓作為呼吸和濾食器官、子代從浮游生活轉(zhuǎn)變?yōu)楣讨畹纳飳W(xué)過(guò)程。3.10倒池Invertedpool將幼蟲(chóng)從一個(gè)池中收集移入另一個(gè)干凈的池中的過(guò)程。3.11采苗器Seedlingattaching供牡蠣幼體固著、變態(tài)和發(fā)育生長(zhǎng)的基質(zhì)。本技術(shù)規(guī)程采苗器規(guī)定的是水泥圓餅。3.12稚貝spat在貝類(lèi)生活史中，幼蟲(chóng)經(jīng)變態(tài)后向成體過(guò)渡的一個(gè)發(fā)育階段。主要特征是面盤(pán)完全退化，鈣質(zhì)的貝殼形成，用鰓呼吸和攝食，足部發(fā)達(dá)，營(yíng)底棲生活。4場(chǎng)地條件4.1場(chǎng)地選擇選擇毗鄰潮流暢通海域，淡水水源充足，地勢(shì)平坦，背風(fēng)向陽(yáng)，周邊3000m內(nèi)無(wú)工業(yè)、農(nóng)業(yè)及生活污染區(qū)，交通、水電、通訊方便的場(chǎng)地建設(shè)繁育場(chǎng)，其他環(huán)境條件應(yīng)符合NY5362的規(guī)定。4.2水質(zhì)要求水源應(yīng)符合GB11607和NY/T391的要求。親貝培育、人工授精與孵化、幼蟲(chóng)培育、藻類(lèi)培養(yǎng)用海水水源要求鹽度20～35，pH8.0～8.4，溶解氧5mg/L以上。5繁殖設(shè)施5.1池塘3DB45/T1084—2022親貝暫養(yǎng)、催熟池塘面積1300m2～3300m2，水深2m以上，沙泥底，平整不滲漏，排灌方便，增氧設(shè)施齊備。5.2苗種培育車(chē)間5.2.1車(chē)間要求采用棚架或房屋結(jié)構(gòu)，要求可以調(diào)光、通風(fēng)、防雨、抗風(fēng)暴。5.2.2設(shè)施要求水泥池，用于苗種孵化及培育，面積為30m2～100m2，池深為1.5m～2.0m，半埋式，池內(nèi)角為弧形，排灌方便，池底坡度以8.0%～10.0%為宜，增氧設(shè)施齊備。5.3藻類(lèi)培養(yǎng)車(chē)間5.3.1車(chē)間要求室內(nèi)間，用于藻類(lèi)一級(jí)培養(yǎng)，要求具有調(diào)光、控溫功能；室外大棚，用于藻類(lèi)二、三級(jí)培養(yǎng)，要求具有調(diào)光、通風(fēng)、防雨、增氧功能。5.3.2設(shè)施要求一級(jí)培養(yǎng)用3L～5L的三角燒瓶，二級(jí)培養(yǎng)可用18L～50L透光塑料水桶，三級(jí)培養(yǎng)可用500L~1000L玻璃鋼桶和透光塑料桶或車(chē)間池子。6親貝培育6.1親貝選擇宜選用欽州大蠔地理標(biāo)志保護(hù)范圍海域的自然種群或原良種場(chǎng)的成貝，貝齡2.5齡～3.0齡，殼高9cm以上，體重100g以上，殼面完整、附著物少，有活力，軟體部肥滿(mǎn)，生殖腺覆蓋大部分內(nèi)臟囊。6.2培育條件培育海水鹽度15～20，水溫25℃~30℃,自然光照。池塘應(yīng)事先施植物生長(zhǎng)素進(jìn)行藻類(lèi)培養(yǎng)，水色呈黃褐色或黃綠色，透明度在30cm左右，溶解氧5mg/L以上，陰雨天氣時(shí)可增氧。6.3培育密度50個(gè)/立方米～60個(gè)/立方米。宜投喂硅藻,日投喂細(xì)胞量為1.0×105個(gè)/毫升～3.0×105個(gè)/毫升，分3次～4次投喂，輔助投喂金藻、扁藻、螺旋藻粉和雞蛋黃等，并根據(jù)親貝攝食情況調(diào)整投餌量。早晚各換水1次，每次換水量1/3~1/2，2d～3d倒池1次；采卵前3d～4d每次換水1/2，不倒池，每天吸污1次。6.5性腺檢查當(dāng)親貝性腺覆蓋整個(gè)內(nèi)臟囊，配子成熟時(shí)可用于人工育苗。4DB45/T1084—20227人工授精與孵化7.1工具準(zhǔn)備牡蠣開(kāi)殼器、吸管、載玻片、玻璃或塑料容器、篩絹網(wǎng)袋等工具用10mg/L高錳酸鉀溶液浸泡10min后，用過(guò)濾海水沖洗。7.2鑒別雌雄親貝清洗后解剖，選擇生殖腺飽滿(mǎn)的個(gè)體，用吸管取少量性腺，涂于載玻片上的水滴中，肉眼觀察呈顆粒狀散開(kāi)的為雌貝，煙霧狀散開(kāi)的為雄貝，進(jìn)一步鏡檢確定雌雄，剔除掉雌雄同體個(gè)體。親貝♀:♂=10︰1，鑒別后分別放置。7.3卵液采集先制備卵液，盆中盛放一半過(guò)濾海水，鹽度15～20，水溫25℃~30℃,將雌貝內(nèi)臟團(tuán)放入孔徑70μm～80μm的篩絹網(wǎng)袋中，在大盆中輕擠網(wǎng)袋讓卵子濾出。獲得的卵液需用500目絹網(wǎng)過(guò)濾清洗后加入過(guò)濾海水，靜置30min～60min。7.4精液采集卵液靜置時(shí)間接近結(jié)束時(shí)制備精液，盆中盛放少量過(guò)濾海水，鹽度15～20，將雄貝內(nèi)臟團(tuán)放入孔徑70μm～80μm的篩絹網(wǎng)袋中，在小盆中輕擠網(wǎng)袋讓精子濾出，鏡檢精子活力。7.5人工授精授精按親貝♀:♂=10︰1，將卵子密度調(diào)整到1×106個(gè)/升～2×106個(gè)/升，取精液加入卵細(xì)胞液中，攪拌3min～5min。7.6孵化受精卵移入孵化池中孵化，孵化密度20個(gè)/毫升～30個(gè)/毫升。受精卵入池后，加大充氣，撈取水面泡沫，定期觀察胚胎發(fā)育情況。8幼蟲(chóng)培育8.1幼蟲(chóng)收集在水溫25℃~30℃下，受精卵經(jīng)20h～24h發(fā)育至D型幼蟲(chóng)，用網(wǎng)目38μm～48μm的篩絹網(wǎng)將D型幼蟲(chóng)收集移入培育池培育。8.2培育條件8.2.1水質(zhì)條件培育用水需經(jīng)沉淀沙濾后用1mg/m3～2mg/m3乙二胺四乙酸（EDTA）處理，鹽度15～20，水溫25℃~30℃,pH8.0～8.4，溶解氧5mg/L以上。8.2.2環(huán)境條件5DB45/T1084—2022散氣石0.8個(gè)/立方米～1個(gè)/立方米，24h連續(xù)充氣，光照控制在500lx～1000lx。8.3培育密度前期（殼高140μm以?xún)?nèi)）3個(gè)/毫升～5個(gè)/毫升，中期（殼高140μm～280μm）2個(gè)毫升～3個(gè)/毫升，后期（殼高280μm以上）1個(gè)/毫升～2個(gè)/毫升。8.4投餌管理藻類(lèi)培養(yǎng)見(jiàn)附錄A。幼蟲(chóng)培育前期用金藻或小球藻投喂，中后期增加角毛藻和扁藻混合投喂。投餌量根據(jù)水中幼蟲(chóng)密度、幼蟲(chóng)胃飽滿(mǎn)度和水中剩餌多寡靈活掌握，以適量多次為好，每天2次～3次。8.5水質(zhì)管理D型幼蟲(chóng)入池1d～2d內(nèi)采用逐日加水，第3d起用網(wǎng)目48μm篩絹網(wǎng)箱換水，每天1次～2次，每m～280μm）3/5，眼點(diǎn)幼蟲(chóng)期（280μm～340μm）100%。每隔3d～5d倒池一次。養(yǎng)殖海水排放應(yīng)符合SC/T9103的規(guī)定。9附苗9.1采苗器選擇及處理采用厚1.5cm～2cm、直徑5cm～6cm的水泥圓餅，7個(gè)～8個(gè)/串，餅間距8cm～10cm，10串/捆，垂直吊放，根據(jù)育苗池深度確定采苗器長(zhǎng)度，末端離池底10cm～20cm為宜。采苗器經(jīng)浸泡，反復(fù)沖洗后，用20mL/m3的次氯酸鈉溶液浸泡18h～24h，硫代硫酸鈉（Na2S2O3）中和至無(wú)氯，排掉浸泡海水再用淡水沖洗干凈待用。9.2采苗器投放密度根據(jù)幼蟲(chóng)密度，每立方米水體垂直吊放水泥圓餅串30捆～40捆。9.3附苗時(shí)間當(dāng)幼蟲(chóng)殼高達(dá)到300μm～320μm，眼點(diǎn)幼蟲(chóng)比例達(dá)30%以上且部分出足時(shí)，收集幼蟲(chóng)并移入已投放采苗器的水池中。9.4附苗管理9.4.1附苗環(huán)境條件附苗池光照0lx～500lx，附苗初期微充氣，眼點(diǎn)幼蟲(chóng)固著完成24h后加大充氣量。9.4.2幼蟲(chóng)密度0.5個(gè)/毫升～1.0個(gè)/毫升。9.4.3投喂管理日投喂單胞藻，附苗前期投餌密度為1.0×105個(gè)/毫升～2.0×105個(gè)/毫升，稚貝期可增加投餌量。6DB45/T1084—20229.4.4水質(zhì)管理附苗初期水位應(yīng)不低于采苗器，采用流水方式換水。固著完成24h后，可加大換水量。養(yǎng)殖海水排放應(yīng)符合SC/T9103的規(guī)定。9.4.5出池附苗完成后7d～10d，當(dāng)貝苗附著量達(dá)到30個(gè)/餅～50個(gè)/餅時(shí)，即可出池。10.1規(guī)格殼高1.0mm～2.0mm。10.2質(zhì)量肉眼可見(jiàn)苗體明顯，大小均勻，固著牢固。規(guī)格合格率≥90%；數(shù)量合格率≥95%；傷殘死亡率≤10.3運(yùn)輸采用常溫干運(yùn)法，途中采取防曬、防風(fēng)干、防雨、防磨擦等措施，一般運(yùn)輸時(shí)間控制在8h以?xún)?nèi)。11病害防治預(yù)防為主，防治結(jié)合。每次倒池?fù)Q水，使用10mg/L的高錳酸鉀溶液對(duì)育苗池進(jìn)行消毒，育苗過(guò)程中可添加1mg/m3～2mg/m3土霉素等抗菌素進(jìn)行細(xì)菌性病害預(yù)防。藥物使用應(yīng)符合NY/T755的規(guī)定。7DB45/T1084—2022（資料性）藻類(lèi)培養(yǎng)A.1藻種海水單胞藻，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)季節(jié)選用適于培養(yǎng)的藻種，一般采用金藻、小球藻、角毛藻、扁藻。A.2培養(yǎng)液硅藻類(lèi)培養(yǎng)液各元素濃度為N∶P∶Si∶Fe=10∶1∶1∶0.1，其他藻類(lèi)培養(yǎng)液各元素濃度為N∶P∶Fe=10∶1∶0.1。A.3培養(yǎng)用水保種及一級(jí)培養(yǎng)用水要加熱煮沸徹底消毒，密封冷卻待用。二級(jí)培養(yǎng)用水經(jīng)沙濾、500目篩絹袋過(guò)濾煮沸維持3min～5min；如水質(zhì)較好，二級(jí)培養(yǎng)用水也可采用有效氯30ppm的漂白粉或漂白片消毒。三級(jí)培養(yǎng)用水采用有效氯30ppm的漂白粉或漂白片消毒8h以上，曝氣后待用，使用前再用硫代硫酸鈉（N