人類X小體Y小體檢測(cè)專家講座

試驗(yàn)九人類X小體、Y小體檢測(cè)人類X小體Y小體檢測(cè)專家講座第1頁(yè)一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)掌握X小體、Y小體玻片標(biāo)片制作方法，繪制X小體、Y小體形態(tài)特征及所在部位。判定個(gè)體性別，為深入研究人類染色體畸變與疾病關(guān)系提供基礎(chǔ)方法、為遺傳病臨床診療提供參考。人類X小體Y小體檢測(cè)專家講座第2頁(yè)二、試驗(yàn)原理1949年Barr和Bertran在研究貓間期神經(jīng)細(xì)胞時(shí)，發(fā)覺(jué)雌貓?bào)w細(xì)胞核膜邊緣有一個(gè)可被堿性染料染色小體而雄貓沒(méi)有。以后發(fā)覺(jué)人類正常女性口腔上皮、陰道上皮、皮膚、羊水等細(xì)胞中都有一個(gè)這么小體，繼而有些人深入發(fā)覺(jué)全部哺乳動(dòng)物雌體細(xì)胞中都有一樣一個(gè)小體。普通認(rèn)為這種小體是兩個(gè)X染色體中一個(gè)在間期發(fā)生異固縮形成，故而將其稱為X小體，X染色質(zhì)，又稱為Barr小體。Barr小體出現(xiàn)在哺乳動(dòng)物雌性個(gè)體細(xì)胞細(xì)胞核膜邊緣，這主要是因?yàn)檫@條染色體處于失活狀態(tài)所致，Morishima等利用放射性標(biāo)識(shí)方法證實(shí)了失活狀態(tài)性染色體與其它異染色質(zhì)（heterochromatin）一樣，在DNA復(fù)制時(shí)總落后于其它常染色質(zhì)，且大多出現(xiàn)在核膜邊緣。性染色質(zhì)數(shù)目是X染色體數(shù)減1。故能夠依據(jù)X小體有沒(méi)有、數(shù)目來(lái)判定胎兒性別和性別畸形。Y小體是人類男性體細(xì)胞中Y染色體長(zhǎng)臂末端顯現(xiàn)明亮小體，是由螢光染料染色后顯示螢光所致。因而稱為Y小體或Y染色質(zhì)。亦可依據(jù)Y小體有沒(méi)有、數(shù)目判定胎兒性別和性別畸形

人類X小體Y小體檢測(cè)專家講座第3頁(yè)三、試驗(yàn)材料

口腔粘膜（男女）、發(fā)根細(xì)胞（女）。

人類X小體Y小體檢測(cè)專家講座第4頁(yè)四、試驗(yàn)器具和藥品

1.器具：普通顯微鏡、熒光顯微鏡、恒溫水浴鍋、載玻片、蓋玻片、鑷子、牙簽、濾紙、紗布等。2.藥品：95%乙醇、乙醚、改良?jí)A性品紅、鹽酸喹吖、Macllvaine氏緩沖液、石蠟。人類X小體Y小體檢測(cè)專家講座第5頁(yè)五、試驗(yàn)步驟

人類X小體Y小體檢測(cè)專家講座第6頁(yè)1．X小體觀察

取材:受檢驗(yàn)者用水漱口數(shù)次，盡可能除去細(xì)菌和食物殘?jiān)?；用潔凈牙簽從口腔兩?cè)頰部刮取粘膜，第一次刮取物棄去，將第二次、第三次刮取物涂在潔凈載玻片上。固定:滴加固定液（95%乙醇:乙醚=1:1或直接用乙醇）固定20～30min，空氣干燥。染色制片:滴加1～2滴改良品紅于室溫下染色10～20min（勿使干燥），加上蓋片，墊上濾紙用手指輕輕加壓即可。鏡檢：低倍鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)核膜完整，細(xì)胞不重合，無(wú)核固縮細(xì)胞；并在高倍或油鏡下觀察。若使用女性發(fā)根細(xì)胞，需選取帶有毛囊頭發(fā)（約2cm長(zhǎng)），再加一滴染液后加上蓋玻片，灑精燈上微熱，靜置5min，后蓋一濾紙壓片。

人類X小體Y小體檢測(cè)專家講座第7頁(yè)人口腔X小體人類X小體Y小體檢測(cè)專家講座第8頁(yè)X小體形狀人類X小體Y小體檢測(cè)專家講座第9頁(yè)2.Y小體觀察

取材固定：

染色制片：制好涂片放入固定液（1份95%乙醇和1份乙醚）固定15～30min；95%乙醇處理20min；0.5%二鹽酸喹吖水溶液染色10min，自來(lái)水1min，然后加1～2滴MacIlvaine氏緩沖液（pH5.4～8.0），覆以蓋片。熒光顯微鏡檢驗(yàn)：用低倍鏡，再用高倍鏡或油鏡觀察。整個(gè)細(xì)胞發(fā)出熒光者不計(jì)。

人類X小體Y小體檢測(cè)專家講座第10頁(yè)六、試驗(yàn)結(jié)果

1.X小體：油鏡下可見(jiàn)X小體為一致密濃染小體。輪廓清楚，約1um，常附著于核膜邊緣或靠邊內(nèi)側(cè)，其形態(tài)有三角形、卵形、扁平形等。正常女性間期細(xì)胞核中X小體百分比約30%～50%，男性中則偶然可見(jiàn)（2%），且不經(jīng)典。人類X小體Y小體檢測(cè)專家講座第11頁(yè)六、試驗(yàn)結(jié)果

2．Y小體：熒光顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞核中有發(fā)亮熒光小體，直徑0.3～0.5um，正常情況下Y小體出現(xiàn)率為25～50%，正常女性無(wú)，性異常者，如核型為47，XYY個(gè)體，可見(jiàn)兩個(gè)Y小體。

人類X小體Y小體檢測(cè)專家講座第12頁(yè)七、作業(yè)及思索題1.統(tǒng)計(jì)X小體頻率，畫(huà)2～3個(gè)經(jīng)典細(xì)胞，示X小體形態(tài)和所處部位。2.計(jì)算出現(xiàn)Y小體細(xì)胞頻率。3.什么是劑量賠償效應(yīng)？4