星狀神經節(jié)阻滯在無血預充過程中對體外循環(huán)大鼠認知功能的影響

星狀神經節(jié)阻滯在無血預充過程中對體外循環(huán)大鼠認知功能的影響

體外循環(huán)（cpb）是指將患者體內的血液引導到外，通過膜氧合器交換氣體，然后通過泵的作用將其放入體內，以維持身體的氧氣和血液循環(huán)的相對狀態(tài)。這是一種有效的持續(xù)血液動力學工具，取代了心肺環(huán)，成為臨床領域的重要工程。1材料和方法1.1大鼠分組及分組30只健康SD成年雄性大鼠，由廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供（許可證編號：SCXK桂2014-0002），體重400～450g。將大鼠隨機分為3組：假手術組（S組）、CPB組（C組）和SGB+CPB組（SC組），每組10只。S組大鼠只進行動靜脈置管，C組大鼠建立CPB模型轉流2h,SC組大鼠建立SGB后立即行CPB模型轉流2h。1.2動脈穿刺方法腹腔注射1%戊巴比妥鈉50mg/kg將大鼠麻醉后仰臥固定于手術臺上，行氣管插管，連接HX-300S動物呼吸機（成都泰盟軟件有限公司），控制潮氣量為8mL/kg，呼吸頻率為60次/min，維持呼氣末二氧化碳4.66～5.99kPa的機械通氣。CPB采用右側頸外靜脈—右側股動脈。右側頸外靜脈用22G靜脈穿刺針置管引流，右側股動脈用24G靜脈穿刺針進行灌注，尾動脈穿刺術監(jiān)測動脈血壓和血氣分析。靜脈給予400IU/kg的肝素鈉，激活全血凝固時間（activatedclottingtime,ACT）≥480s后進行CPB轉流1.3局麻和羅哌卡因注射大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉30mg/kg，在仰臥位的狀態(tài)下行SGB。在大鼠左側胸鎖關節(jié)外側0.3cm處注射0.1mL1%利多卡因進行局麻，用1mL注射器垂直進針穿刺，針尖斜面朝上，朝向足端約0.3cm時注射0.25%羅哌卡因0.5mL+1%利多卡因0.5mL。SGB成功的標志為出現(xiàn)明顯Horner綜合征，表現(xiàn)為大鼠左側眼窩內陷、瞳孔縮小、眼瞼下垂和眼裂變小。SGB成功后進行CPB模型建立。1.4酸ph值、鈉離子na分別于實驗開始前（T0）和實驗開始后1h(T1）、2h(T2）、6h(T3）、24h(T4）、72h(T5）、第7天（T6）抽取大鼠尾動脈血0.4mL，用i-STAT1血氣分析儀（美國Medtroniz公司）測量酸堿（pH）值、鈉離子（Na1.6切片制備將各組大鼠麻醉后斷頸取腦，用組織固定液固定24h后修塊，階梯式脫水，石蠟包埋，冠狀位切片，厚約5μm。HE依次染色，脫水封片，光學顯微鏡觀察大鼠海馬的組織結構。1.7尼氏染色試驗將各組大鼠腦組織的石蠟切片脫蠟后用甲苯胺藍染色，冰醋酸分化，脫水透明封片，顯微鏡觀察海馬神經元形態(tài)學特征。1.8中藥測試測試將T4～T6時間段的各組大鼠放入水迷宮中進行測試。測試開始前讓大鼠在水中自由游泳2min，找到水中平臺，若大鼠未及時找到平臺，則引導大鼠找到平臺1.9統(tǒng)計方法所有數據均采用SPSS23.0統(tǒng)計軟件進行分析。計量資料以均數±標準差（2結果2.1不同時期各組大鼠的血液生化指標的比較與S組相比，C組和SC組在T2～T3時間段的pH值、Na2.2組hb含量比較C組和SC組在T2～T5時間段的Hb的含量低于S組，且在T2時間段最低（均P<0.05）。在T2～T4時間段，C組Hb含量低于SC組，且均低于S組（P<0.05）；在T5時間段，C組和SC組Hb含量低于S組（P<0.05），見表2。2.3s組與s組p>0.05比較C組和SC組的IL-2濃度在T2～T4時間段高于S組（均P<0.05），且在T2時間段最高。在T2～T4時間段C組IL-2濃度高于SC組，且均高于S組（P<0.05），見圖1。2.4馬組織受損HE染色觀察，S組DG區(qū)的大鼠海馬細胞排列緊密而整齊；而C組大鼠海馬組織受損嚴重，細胞排列紊亂疏松、神經元彌漫性空泡變性、大量小膠質細胞浸潤、核固縮明顯；SC組的病理學改變較C組明顯緩解，細胞排列較為規(guī)則，小膠質細胞、核固縮細胞和神經元空泡變性的數量也明顯減少，見圖2。2.5c組神經元自由基型尼氏染色觀察，S組的大鼠海馬CA3區(qū)神經元排列緊密且層次清晰、結構完整且神經元中尼氏小體含量豐富；而C組神經元帶不完整、神經元缺失嚴重，且尼氏小體解體明顯；SC組神經元受損情況較C組明顯好轉，神經元排列相對規(guī)整，神經元缺失數量減少，且尼氏小體含量相對豐富，見圖3。2.6空間探索次數對逃避充壓在T4～T6時間段，C組比SC組大鼠在空間探索中象限穿越次數增加，逃避潛伏期時間延長，且兩組數值明顯高于S組（均P<0.05），見圖4。3血清il-2、mds-na表達NaIL-2作為有效的抗炎因子，主要來源于CD輔助T細胞下，從而持續(xù)低水平狀態(tài)。在無血預充的CPB中，可能反復激活了Prdm1編碼的轉錄因子B淋巴細胞激活，誘導成熟蛋白1抑制IL-2的大量產生在CPB中，無論是缺血還是炎癥均會引起細胞水腫進而導致腦水腫，最先體現(xiàn)于星形膠質細胞，表現(xiàn)為空泡樣變性。在CPB中會增加反應性的星形膠質細胞反應性的星形膠質細胞中的血管內皮生長因子，從而會破壞血腦屏障，并加速星形膠質細胞腫脹，而無血預充下的CPB會使其進一步加劇，加重腦水腫有研究表明，Morris水迷宮廣泛用于空間記憶和學習，可作為術后認知功能的檢測實驗，但運動功能缺陷不能作為水迷宮認知功能測定的混淆因素研究顯示，在無血預充的情況下進行CPB容易加重機體內環(huán)境紊亂，導致組織、器官缺血缺氧壞死，如外周末梢功能循環(huán)障礙、認知功能障礙、延長術后恢復時間甚至實驗動物死亡綜上所述，SGB可以在一定程度上穩(wěn)定大鼠在無血預充條件下進行CPB時機體的內環(huán)境，調控血漿中IL-2的表達，減輕大腦的組織細胞水腫和神經炎癥反應，改善大腦缺血缺氧的狀況，從而減少大鼠POCD的發(fā)生。將大鼠麻醉后，在右頸內靜脈處取血0.8mL，置于抗凝管中