月季花藥培養(yǎng)(公開(kāi)課)01647

課題2月季的花藥培養(yǎng)花中皇后月季又稱“月月紅”，自然花期5至11月，開(kāi)花連續(xù)不斷，通常扦插就可以成活。

知識(shí)回顧單倍體育種的過(guò)程？花藥離體培養(yǎng)（N）單倍體植株（N）秋水仙素處理，使染色體數(shù)加倍植株（2N）正常植株（2N）花的結(jié)構(gòu)花托花萼花瓣雄蕊花藥花絲雌蕊柱頭花柱子房花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉（一）被子植物的花粉發(fā)育1雄蕊一、基礎(chǔ)知識(shí)2花粉的概念:由花粉母細(xì)胞經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂形成的單倍體的生殖細(xì)胞.被子植物花粉的發(fā)育過(guò)程小孢子母細(xì)胞減數(shù)分裂4個(gè)小孢子(小孢子四分體時(shí)期)小孢子(單核居中期)小孢子(單核靠邊期)小孢子生殖細(xì)胞核+花粉管細(xì)胞核有絲分裂（花粉粒的雙核期）生殖細(xì)胞將再進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣的花粉在成熟時(shí)，含有一個(gè)花粉管細(xì)胞核和兩個(gè)精子。例題：兩個(gè)精子和花粉管細(xì)胞核的基因型是否相同？③4個(gè)小孢子減數(shù)分裂有絲分裂4個(gè)花粉管細(xì)胞核4個(gè)生殖細(xì)胞核有絲分裂8個(gè)精子1花粉母細(xì)胞2NNNN雌蕊的結(jié)構(gòu)知識(shí)擴(kuò)展（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化愈傷組織花藥中的花粉脫分化分化叢芽再分化叢芽誘導(dǎo)生根體細(xì)胞胚（胚狀體）：在組織培養(yǎng)過(guò)程中，某些細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過(guò)程亦與合子胚類似原因：培養(yǎng)基中的激素種類及濃度配比煙草花藥培養(yǎng)胚狀體發(fā)育途徑部分花藥通過(guò)胚狀體途徑形成小植株愈傷組織轉(zhuǎn)接種到再生培養(yǎng)基愈傷組織分化形成再生植株水稻花藥培養(yǎng)愈傷組織發(fā)育途徑部分花藥產(chǎn)生愈傷組織接種在平板上的水稻花藥1、材料的選擇不同植物的誘導(dǎo)成功率不同.

同一植物的不同生理狀況也對(duì)誘導(dǎo)成功率有直接的影響.（一般選月季的初花期）合適的花粉發(fā)育期（單核居中期與靠邊期之間）2、培養(yǎng)基的組成（MS培養(yǎng)基+不同比例的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)激素）此外，植株生長(zhǎng)條件、材料低溫預(yù)處理、接種密度等(三)、影響花藥培養(yǎng)的主要因素注意：選擇最合適的花粉發(fā)育時(shí)期:單核期①不選擇單核期之前花藥原因：花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎；②不選擇單核期之后花藥原因：花瓣開(kāi)始松動(dòng)，給材料消毒帶來(lái)困難困難；③挑選單核期花藥方法：應(yīng)當(dāng)選擇完全未開(kāi)放的花蕾，微生物少，易消毒。實(shí)驗(yàn)操作一、材料的選取二、材料的消毒三、接種和培養(yǎng)（一）材料選取

2、通過(guò)鏡檢來(lái)確定是否處于適宜的發(fā)育期。方法：醋酸洋紅法(將染色體染成紅色)

焙花青-鉻礬法(花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色)。1、從花藥看：月季的初花期從花粉看：?jiǎn)魏似?/p>

從花蕾看：完全未開(kāi)放的花藥（載玻片上）→1%的醋酸洋紅1滴→用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核被染成紅色）花藥（在卡諾氏固定液中處理20min）→取出，置于載玻片上→焙花青－鉻礬溶液染色→蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核被染成藍(lán)黑色）月季花藥培養(yǎng)時(shí)的花粉粒最好是（）A、四分體時(shí)期B、二核或三核花粉粒C、單核期C（二）材料的消毒5、無(wú)菌水沖洗3～5次

花藥的外面有花萼、花瓣保護(hù)，通常處于無(wú)菌狀態(tài)1、花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精浸泡30秒2、無(wú)菌水清洗3、無(wú)菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中2～4分鐘（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來(lái)困難？答：花瓣松動(dòng)后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來(lái)困難。

為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來(lái)困難？討論：（三）接種和培養(yǎng)

1滅菌后花蕾，要在

下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。

3通常每瓶接種花藥

，溫度控制在

左右，

。幼小植株形成后才

。

2在剝離花藥時(shí)，要盡量

（否則接種后，容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織），同時(shí)還要徹底

，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。一般經(jīng)過(guò)20-30天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開(kāi)裂，長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。

4進(jìn)一步鑒定和篩選：常常會(huì)出現(xiàn)染色體倍性的變化無(wú)菌條件不損傷花藥去除花絲7-10個(gè)25℃不需要光照需要光照主要原因是花粉管核和生殖核融合造成的課題成果評(píng)價(jià)一選材是否恰當(dāng)二無(wú)菌技術(shù)是否過(guò)關(guān)三接種是否成功1.答：

F2代紫色甜玉米的基因型組成可能為Aasusu或AAsusu。如果運(yùn)用常規(guī)育種方法，將F2代中的紫色甜玉米與白色甜玉米（aasusu）進(jìn)行測(cè)交，可以選擇出基因型為AAsusu純種紫色甜玉米。但這種方法比較繁瑣，耗時(shí)也較長(zhǎng)，需要至少三年的選種和育種時(shí)間。如果利用花藥培養(yǎng)的技術(shù)，在F1代產(chǎn)生的花粉中就可能有Asu的組合，再將花粉植株進(jìn)行染色體加倍，就可以直接得到紫色甜玉米的純合體（AAsusu）。這種方法可以大大縮短育種周期。課本P40練習(xí)

2、植物組織培養(yǎng)技