醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)微生物實(shí)驗(yàn)室基本技能

醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)

微生物實(shí)驗(yàn)室根本技能黑龍江省疾病控制中心消毒所黑龍江省醫(yī)院感染預(yù)防與控制中心曹原報(bào)告提綱微生物實(shí)驗(yàn)室無菌操作要求中和劑、培養(yǎng)基的配制物體外表、手和空氣消毒效果監(jiān)測(cè)醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)

醫(yī)院感染：指住院病人在醫(yī)院內(nèi)獲得的感染,包括在住院期間發(fā)生的感染和在醫(yī)院內(nèi)獲得出院后發(fā)生的感染,但不包括入院前已開始或者入院時(shí)已處于潛伏期的感染。醫(yī)院工作人員在醫(yī)院內(nèi)獲得的感染也屬醫(yī)院感染。

醫(yī)院感染嚴(yán)重影響住院患者的康復(fù)，增加患者的痛苦，使死亡率上升，住院時(shí)間延長(zhǎng)，加重了社會(huì)和個(gè)人的醫(yī)療費(fèi)用負(fù)擔(dān)，給衛(wèi)生資源帶來巨大的損失。目前，感染性疾病是全球死亡的第二大原因，如果將醫(yī)院感染考慮在內(nèi)，全球范圍的感染性疾病就會(huì)成為死亡的第一位原因。

醫(yī)院消毒工作是預(yù)防和控制醫(yī)院感染，防止各類傳染性疾病傳播、維護(hù)醫(yī)療質(zhì)量和患者身心健康的重要手段。醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)的目的是減少醫(yī)院感染和由此所造成的損失，提高醫(yī)護(hù)質(zhì)量。?中華人民共和國傳染病防治法?

〔2004年12月1日起施行〕第二十一條醫(yī)療機(jī)構(gòu)必須嚴(yán)格執(zhí)行國務(wù)院衛(wèi)生行政部門規(guī)定的管理制度、操作標(biāo)準(zhǔn)，防止傳染病的醫(yī)源性感染和醫(yī)院感染。醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)確定專門的部門或者人員，承擔(dān)傳染病疫情報(bào)告、本單位的傳染病預(yù)防、控制以及責(zé)任區(qū)域內(nèi)的傳染病預(yù)防工作；承擔(dān)醫(yī)療活動(dòng)中與醫(yī)院感染有關(guān)的危險(xiǎn)因素監(jiān)測(cè)、平安防護(hù)、消毒、隔離和醫(yī)療廢物處置工作。?醫(yī)院感染管理方法?

〔2006年9月1日起施行〕第八條醫(yī)院感染管理部門、分管部門及醫(yī)院感染管理?！布妗陈毴藛T具體負(fù)責(zé)醫(yī)院感染預(yù)防與控制方面的管理和業(yè)務(wù)工作。主要職責(zé)是：〔二〕對(duì)醫(yī)院感染及其相關(guān)危險(xiǎn)因素進(jìn)行監(jiān)測(cè)、分析和反響，針對(duì)問題提出控制措施并指導(dǎo)實(shí)施；〔四〕對(duì)醫(yī)院的清潔、消毒滅菌與隔離、無菌操作技術(shù)、醫(yī)療廢物管理等工作提供指導(dǎo)；?醫(yī)院感染管理方法?

〔2006年9月1日起施行〕第十三條醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)制定具體措施，保證醫(yī)務(wù)人員的手衛(wèi)生、診療環(huán)境條件、無菌操作技術(shù)和職業(yè)衛(wèi)生防護(hù)工作符合規(guī)定要求，對(duì)醫(yī)院感染的危險(xiǎn)因素進(jìn)行控制。第十七條醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)按照醫(yī)院感染診斷標(biāo)準(zhǔn)及時(shí)診斷醫(yī)院感染病例，建立有效的醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)制度，分析醫(yī)院感染的危險(xiǎn)因素，并針對(duì)導(dǎo)致醫(yī)院感染的危險(xiǎn)因素，實(shí)施預(yù)防與控制措施。

?消毒管理方法?第二章消毒的衛(wèi)生要求

第四條醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)建立消毒管理組織，制定消毒管理制度，執(zhí)行國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定，定期開展消毒與滅菌效果檢測(cè)工作。第八條醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的環(huán)境、物品應(yīng)當(dāng)符合國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定。排放廢棄的污水、污物應(yīng)當(dāng)按照國家有關(guān)規(guī)定進(jìn)行無害化處理。運(yùn)送傳染病病人及其污染物品的車輛、工具必須隨時(shí)進(jìn)行消毒處理。?消毒技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)?〔2002年版〕醫(yī)院消毒是預(yù)防醫(yī)院內(nèi)感染的重要措施之一，消毒效果的監(jiān)測(cè)是評(píng)價(jià)其消毒設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)是否正常、消毒藥劑是否有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否達(dá)標(biāo)的唯一手段，因而在醫(yī)院消毒、滅菌工作中必不可少。醫(yī)院消毒效果監(jiān)測(cè)時(shí)需遵循以下原那么：監(jiān)測(cè)人員需經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，掌握一定的消毒知識(shí)，熟悉消毒設(shè)備和藥劑性能，具備熟練的檢驗(yàn)技能；選擇合理的采樣時(shí)間〔消毒后、使用前〕；遵循嚴(yán)格的無菌操作。醫(yī)院消毒滅菌效果監(jiān)測(cè)壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測(cè)紫外線消毒效果監(jiān)測(cè)醫(yī)療器械滅菌效果監(jiān)測(cè)手消毒效果監(jiān)測(cè)物體外表消毒效果監(jiān)測(cè)空氣消毒效果監(jiān)測(cè)常用消毒劑有效成分測(cè)定使用中消毒劑的監(jiān)測(cè)內(nèi)鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測(cè)透析水的監(jiān)測(cè)污水的監(jiān)測(cè)醫(yī)院消毒的質(zhì)量管理〔PDCA〕制定有一個(gè)好的消毒滅菌程序或方案〔plan，方案〕按制定的消毒滅菌程序或方案進(jìn)行操作〔do，執(zhí)行〕采取正確的方法進(jìn)行消毒效果評(píng)價(jià)、監(jiān)測(cè)〔check，檢查〕根據(jù)評(píng)價(jià)結(jié)果改進(jìn)工作〔advance，改進(jìn)〕微生物實(shí)驗(yàn)室的作用微生物實(shí)驗(yàn)室在醫(yī)院感染控制中的每個(gè)環(huán)節(jié)都起著不可無視的重要作用，包括病原菌的鑒定及耐藥譜分析、醫(yī)院感染危險(xiǎn)因素的監(jiān)測(cè)、易感人群與正常菌群監(jiān)測(cè)等。在某種意義來說，微生物實(shí)驗(yàn)室技術(shù)水平的上下，直接關(guān)系著醫(yī)院感染控制的整體水平。2003年以來國內(nèi)外相繼發(fā)生“非典〞病毒實(shí)驗(yàn)室泄露事件，說明實(shí)驗(yàn)室生物平安管理不僅關(guān)系到實(shí)驗(yàn)室工作人員的健康，更是關(guān)系經(jīng)濟(jì)開展、社會(huì)穩(wěn)定、人民群眾生命平安的大事。醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)的標(biāo)本，有些可能具有傳染性。因此，在進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)工作的過程中，無論標(biāo)本的采集或細(xì)菌培養(yǎng)等，微生物學(xué)工作者均須嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作技術(shù)及個(gè)人防護(hù)，防止雜菌污染和病原菌的擴(kuò)散，以保證醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)的質(zhì)量。

實(shí)驗(yàn)室無菌操作要求〔1〕試驗(yàn)開始前，應(yīng)以濕式方法清潔臺(tái)面和清掃室內(nèi)地面；〔2〕實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)穿戴工作服、工作鞋、口罩、帽子，進(jìn)行無菌檢驗(yàn)時(shí)，需正確穿戴好無菌隔離衣。根據(jù)需要戴防護(hù)鏡和橡膠手套；〔3〕每吸取一次不同樣液應(yīng)更換無菌吸管，接種環(huán)〔針〕需在火焰上燒灼滅菌后，才可再次使用，也可用一次性使用的無菌吸管和接種環(huán)〔針〕；〔4〕要求無菌的試劑，如蒸餾水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、培養(yǎng)基、中和劑等，均需滅菌后使用；〔5〕無菌器材和試劑，使用前須檢查容器或包裝是否完整，有破損者不得使用。實(shí)驗(yàn)室無菌操作要求〔6〕正在使用的無菌器材和試劑不得長(zhǎng)時(shí)間暴露于生物平安柜或超凈臺(tái)中；〔7〕移液或接種時(shí)，開塞后的試管口及瓶口應(yīng)盡量靠近火焰，防止污染，試管及燒瓶應(yīng)盡量平放，切忌口部向上或長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中?！?〕重復(fù)使用的器材，使用后應(yīng)立即放入盛有消毒液的容器中，一次性使用的器材使用后應(yīng)立即放入感染性廢物收集袋中?！?〕假設(shè)不慎發(fā)生微生物培養(yǎng)物打碎或試驗(yàn)微生物其他泄漏事故時(shí)，不管是否具有致病性，均應(yīng)立即停止手中工作，對(duì)污染及可能涉及的區(qū)域進(jìn)行消毒處理?！?0〕全部試驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)對(duì)室內(nèi)環(huán)境進(jìn)行消毒處理。加強(qiáng)生物平安管理國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室感染SARS案例的主要原因包括：〔1〕實(shí)驗(yàn)人員違規(guī)操作；〔2〕管理制度內(nèi)容不全面，執(zhí)行力度不夠，監(jiān)督檢查不夠及時(shí)；〔3〕缺少嚴(yán)格、系統(tǒng)的生物平安培訓(xùn)制度，平安防范意識(shí)普遍不強(qiáng)；〔4〕生物平安柜未定期進(jìn)行檢修和評(píng)價(jià)；〔5〕實(shí)驗(yàn)室硬件環(huán)境條件長(zhǎng)期未得到明顯的改善。加強(qiáng)生物平安管理〔1〕建立完備而又詳盡的致病微生物危害文件，并組織實(shí)驗(yàn)人員認(rèn)真學(xué)習(xí)；〔2〕建立具體可行的實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)操作標(biāo)準(zhǔn)，并要求實(shí)驗(yàn)人員嚴(yán)格執(zhí)行，最大程度的減少意外發(fā)生；〔3〕提供相應(yīng)的生物平安防護(hù)。在沒有符合要求的硬件設(shè)施和設(shè)備的情況下，決不允許開展相關(guān)的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)；〔4〕建立和健全事故報(bào)告制度。要求實(shí)驗(yàn)人員一旦發(fā)生病毒泄露，應(yīng)該立即報(bào)告負(fù)責(zé)人，及早采取措施，防止致病微生物進(jìn)一步在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外擴(kuò)散。中和劑、培養(yǎng)基的配制為什么使用中和劑？中和劑：在微生物殺滅試驗(yàn)中，用以消除試驗(yàn)微生物與消毒劑的混懸液中和微生物外表上殘留的消毒劑，使其失去對(duì)微生物抑制和殺滅作用的試劑。對(duì)消毒效果進(jìn)行監(jiān)測(cè)時(shí)，在抽樣的同時(shí)會(huì)將連同剩余消毒劑一起被采集到樣品中并可能被攜帶到培養(yǎng)基或檢驗(yàn)體系內(nèi)，會(huì)對(duì)未被殺死的殘存細(xì)菌生長(zhǎng)產(chǎn)生影響，使得存活細(xì)菌檢不出，導(dǎo)致消毒效果高于實(shí)際效果或滅菌效果出現(xiàn)假陰性。所以，在對(duì)消毒劑殺菌效果進(jìn)行監(jiān)測(cè)時(shí)，必須首先設(shè)法去除剩余消毒劑，使殘存細(xì)菌脫離其影響，獲得正常的復(fù)蘇生長(zhǎng)條件，以便有效的檢驗(yàn)。常用去除剩余消毒劑的方法化學(xué)中和法：最常用的方法稀釋法：適合于濃度系數(shù)高的消毒劑過濾清洗法：適合于選不出有效的中和劑或一些中草藥消毒劑消毒效果的檢測(cè)離心清洗法：反復(fù)屢次離心，逐漸去除剩余消毒劑去除剩余消毒劑方法的有效標(biāo)準(zhǔn)可有效去除剩余消毒劑；對(duì)微生物無害，不影響損傷微生物的復(fù)蘇；不影響載體上微生物洗脫，不減少細(xì)菌回收量；對(duì)培養(yǎng)基營養(yǎng)成分不產(chǎn)生拮抗作用，不影響液體培養(yǎng)基的透明度；對(duì)培養(yǎng)病毒的細(xì)胞無害，不破壞細(xì)胞營養(yǎng)液的成分；不干擾細(xì)菌和病毒檢測(cè)方法的靈敏度。注：所有中和劑均須在0.03mol/L磷酸鹽緩沖液〔PBS〕根底上配制。中和劑的配制原那么及本卷須知先配制磷酸鹽緩沖液〔PBS，0.03mol/L，pH7.2〕無水磷酸氫二鈉2.83g磷酸二氫鉀1.36g蒸餾水加至1000ml將各成分參加到1000ml蒸餾水中，待完全溶解后，調(diào)pH至7.2～7.4；注意：去結(jié)晶水去結(jié)晶水問題磷酸二氫鈉〔Na2HPO4·12H2O〕X=7.13g〔每1000mL〕142142+12×18=2.83X去結(jié)晶水問題硫代硫酸鈉〔Na2S2O3·5H2O〕X=7.85g〔每1000mL〕158158+5×18=5X中和劑的配制原那么及本卷須知硫代硫酸鈉需去結(jié)晶水；吐溫-80易掛壁，反復(fù)沖洗干凈；滅菌溫度和時(shí)間：一般121℃、20min；不耐高溫115℃、30min；保存條件和時(shí)間：4℃冰箱半年，常溫一個(gè)月〔出現(xiàn)混濁、結(jié)晶、長(zhǎng)菌等應(yīng)放棄〕。微生物培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的分類配制培養(yǎng)基的一般程序配制培養(yǎng)基的本卷須知微生物培養(yǎng)基的配制

培養(yǎng)基：是指用人工方法，將細(xì)菌等微生物生長(zhǎng)繁殖所需要的營養(yǎng)物質(zhì)按比例混合，調(diào)節(jié)PH，高壓滅菌而成的營養(yǎng)混合物。培養(yǎng)基的分類1.按照營養(yǎng)組成和用途分類根底培養(yǎng)基營養(yǎng)培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)基2.按照培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分：液體、固體和半固體1.按照營養(yǎng)組成和用途分類1〕根底培養(yǎng)基：含有一般細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需要的根本營養(yǎng)成分，營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂等；2〕營養(yǎng)培養(yǎng)基：在根底培養(yǎng)基中參加血液、血清、生長(zhǎng)因子等特殊成分，供營養(yǎng)要求較高和需要特殊生長(zhǎng)因子的細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)基，如血液瓊脂培養(yǎng)基；1.按照營養(yǎng)組成和用途分類3)選擇性培養(yǎng)基：在根底培養(yǎng)基中參加抑菌劑，抑制非目的菌生長(zhǎng)，選擇性的促進(jìn)目的菌生長(zhǎng)，從而將其從混雜的標(biāo)本中別離出來。如：SS瓊脂培養(yǎng)基；1.按照營養(yǎng)組成和用途分類4)鑒別培養(yǎng)基：在根底培養(yǎng)基中參加某些特定底物,如糖、苷、醇類、氨基酸、蛋白質(zhì)等和指示劑，用以測(cè)定細(xì)菌的生化反響，區(qū)分不同細(xì)菌種類的培養(yǎng)基；5)增菌培養(yǎng)基：多為液體培養(yǎng)基，如葡萄糖肉湯、GN肉湯等，特別適用于病原菌含量少的標(biāo)本，因增菌培養(yǎng)基一般含有抑菌劑，具有選擇抑制作用，提高標(biāo)本中含量較少的目的菌的檢出率；6)厭氧培養(yǎng)基：專供厭氧菌的別離、培養(yǎng)和鑒別用的培養(yǎng)基。2、按照物理狀態(tài)分類1〕液體培養(yǎng)基：可用于大量細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖，但必須種入純種細(xì)菌，如肉湯培養(yǎng)基；2〕固體培養(yǎng)基：參加1.5~2.0%瓊脂，用于細(xì)菌的別離和純化、鑒定及藥敏試驗(yàn)等，在試管中可制成斜面用于菌種的短期保存；3〕半固體培養(yǎng)基：參加0.3~0.5%瓊脂，用于觀察細(xì)菌的動(dòng)力，保存菌種等。配制培養(yǎng)基的一般程序

調(diào)配熔化矯正pH

過濾分裝滅菌保存配制培養(yǎng)基的一般程序1.調(diào)配：在三角燒瓶中參加少量的蒸餾水，準(zhǔn)確稱取培養(yǎng)基，混懸于其中，再以剩余的水沖洗瓶壁；2.溶化：在電爐上溶解，應(yīng)隨時(shí)攪拌，注意防止外溢；3.矯正pH值：一般培養(yǎng)基矯正pH至7.2～7.6，亦有需酸性或堿性的培養(yǎng)基，矯正時(shí)應(yīng)比實(shí)際需要的pH高0.1～0.2；4.過濾澄清：液體培養(yǎng)基，常用濾紙過濾；固體培養(yǎng)基，加熱溶化后趁熱以兩層紗布中間夾脫脂棉過濾；配制培養(yǎng)基的一般程序5.分裝：根底培養(yǎng)基：一般常分裝于三角燒瓶?jī)?nèi)，滅菌后待用；瓊脂斜面：分裝量約為試管的1/4，滅菌后趁熱放置斜面，長(zhǎng)度2/3；半固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基：分裝量約為試管長(zhǎng)度的1/3；瓊脂平板：將滅菌或加熱融化后的固體培養(yǎng)基，冷至50℃左右，以無菌操作傾注無菌平皿內(nèi)，平皿內(nèi)徑為9cm，傾注培養(yǎng)基13～15mL，輕搖平皿，使培養(yǎng)基平鋪于平皿底部，凝固后備用。注意：傾注培養(yǎng)基時(shí)，切勿將平皿蓋全部翻開，以免空氣中的塵埃及細(xì)菌落入。6.滅菌：壓力蒸汽滅菌法和過濾除菌法〔含因加熱易破壞的物質(zhì)〕；7.保存：4℃冰箱或冷暗處。配制培養(yǎng)基的本卷須知最好用中性硬質(zhì)玻璃器皿；加熱時(shí)間不宜過長(zhǎng)，溫度不宜過高，培養(yǎng)基加熱煮沸后，應(yīng)補(bǔ)足失水；保持澄清，分裝不宜超過容器的2/3；試管口和三角燒瓶口應(yīng)用普通棉花制成的棉塞，再用牛皮紙包好；SS、SF、BS等不需高壓。中和劑、培養(yǎng)基的配制本卷須知配制記錄：配制編號(hào)、濃度、名稱、配制時(shí)間、有效期、保存條件、配制者；質(zhì)量控制：每瓶〔包裝〕粘貼化學(xué)指示膠帶，滅菌器內(nèi)放置化學(xué)指示卡，并記錄；壓力蒸汽滅菌時(shí)間:指的是滅菌平臺(tái)時(shí)間，不包括升溫和降溫時(shí)間。物體外表消毒效果監(jiān)測(cè)醫(yī)院內(nèi)物體外表包括病房和醫(yī)護(hù)辦公室內(nèi)的桌、椅、凳、床具、櫥柜、門及門把手、窗戶及窗臺(tái)、水池和廁具等，同時(shí)也包括輔助科室的工作臺(tái)面、儀器外表等物體外表。1.采樣時(shí)間：在消毒處理后進(jìn)行采樣。2.采樣方法：用5cm×5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體外表，采樣面積≥100cm2，連續(xù)采樣4個(gè)，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液(常用含0.5%硫代硫酸鈉+0.1%吐溫80的PBS〕的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。門把手等不規(guī)那么物體外表用棉拭子直接涂擦采樣。物體外表消毒效果監(jiān)測(cè)3.檢測(cè)方法：(1)細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)：將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個(gè)平皿，內(nèi)參加已溶化的45℃～48℃的營養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。物體外表消毒效果監(jiān)測(cè)采樣結(jié)果計(jì)算方法：平皿上菌落的平均數(shù)×稀釋倍數(shù)物體外表細(xì)菌菌落總數(shù)(cfu/cm2)＝───────────────采樣面積〔cm2〕小型物體外表的結(jié)果計(jì)算，用cfu/件表示。舉例：平皿上菌落數(shù)〔10，8〕，結(jié)果為：9.0×10/100=0.9(cfu/cm2)(2)致病菌檢測(cè)：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌、沙門氏菌檢測(cè)。物體外表消毒效果監(jiān)測(cè)4.結(jié)果判定：Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出致病菌〔金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、溶血性鏈球菌〕為消毒合格；Ⅲ類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出致病菌〔金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌〕為消毒合格；Ⅳ類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出致病菌〔金黃色葡萄球菌、大腸桿菌〕為消毒合格；母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體外表不得檢出沙門氏菌。物體外表消毒效果監(jiān)測(cè)5.本卷須知：①采集樣本要有足夠的數(shù)量且具有代表性，如層流潔凈手術(shù)室，選擇具有代表性采樣地點(diǎn)〔如手術(shù)臺(tái)、治療車、無影燈把手等〕；②采樣時(shí)，棉拭子處于濕潤狀態(tài)，如處于飽和狀態(tài)可將多余的采樣液在采樣管壁上擠壓去除。禁止使用干棉拭子采樣。手消毒效果監(jiān)測(cè)醫(yī)務(wù)人員手的消毒是預(yù)防和控制醫(yī)院感染的重要環(huán)節(jié)，醫(yī)務(wù)人員的手在傳染病的傳播和醫(yī)院內(nèi)感染的傳播和流行過程中起著重要的傳播媒介作用，所以手的科學(xué)合理消毒不僅是醫(yī)院管理的重要環(huán)節(jié)，也是醫(yī)務(wù)人員的必修課。手的消毒有其特殊性，因?yàn)槭值钠つw污染更為嚴(yán)重，傳播的時(shí)機(jī)更多，消毒更加困難。手消毒效果監(jiān)測(cè)手的污染特點(diǎn)：受工作性質(zhì)影響，首先是工作環(huán)境污染物越多，手污染越嚴(yán)重；手上攜帶細(xì)菌種類與其工作環(huán)境有關(guān)；手上攜帶致病菌群與醫(yī)院感染的發(fā)生有密切關(guān)系。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，國內(nèi)一個(gè)在臨床一線工作的醫(yī)生或護(hù)士，每天接觸不同病人和不同帶菌物品均在50次以上，如果能按規(guī)定洗手，將大大減少交叉污染和交叉感染。手消毒效果監(jiān)測(cè)1.采樣時(shí)間：接觸病人、從事醫(yī)療活動(dòng)前進(jìn)行采樣2.采樣方法：被檢人五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面積約30cm2)，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10ml

含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。手消毒效果監(jiān)測(cè)3.檢測(cè)方法：(1)細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)：將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個(gè)平皿，內(nèi)參加已溶化的45℃～48℃的營養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。采樣結(jié)果計(jì)算方法：平皿上菌落的平均數(shù)×稀釋倍數(shù)細(xì)菌總數(shù)(cfu/cm2)＝────────────────30×2舉例：平皿上菌落數(shù)〔10，8〕，結(jié)果為：9.0×10/60=1.5(cfu/cm2)(2)致病菌檢測(cè)：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌、沙門氏菌檢測(cè)。手消毒效果監(jiān)測(cè)4.結(jié)果判定：Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；Ⅲ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；Ⅳ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門氏菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。

手消毒效果監(jiān)測(cè)5.本卷須知：①對(duì)化學(xué)殺菌因子消毒的效果監(jiān)測(cè)，采樣液應(yīng)為含經(jīng)鑒定合格的中和劑的洗脫液。假設(shè)對(duì)非化學(xué)因子消毒效果監(jiān)測(cè)，那么不必加中和劑。②所采樣本應(yīng)及時(shí)檢測(cè)，室溫下存放不得超過2小時(shí)；4℃冰箱存放不得超過4小時(shí)?？諝庀拘ЧO(jiān)測(cè)空氣是許多疾病的傳播媒介，由于空氣中微生物是以氣溶膠形式存在，顆粒小、可隨氣流運(yùn)動(dòng)，因此，空氣傳播疾病的特點(diǎn)是傳播速度快，涉及面廣，控制困難，后果嚴(yán)重?？諝庵械牟≡⑸锊粌H可造成醫(yī)院內(nèi)感染，而且可以污染其他物品甚至診療器具，引起醫(yī)院內(nèi)感染?？諝庀拘ЧO(jiān)測(cè)醫(yī)院室內(nèi)空氣中含微生物數(shù)量過高對(duì)醫(yī)院感染的發(fā)生會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重影響，WHO調(diào)查顯示，手術(shù)室空氣中含菌量與切口感染成正相關(guān)。當(dāng)空氣細(xì)菌含量在1000~1800cfu/m3時(shí)，手術(shù)后感染率明顯增高；假設(shè)降低至180cfu/m3以下時(shí)，感染的危險(xiǎn)性明顯降低。我國醫(yī)院感染那么是以呼吸道感染率最高，這可能與我國醫(yī)院內(nèi)環(huán)境空氣中微生物含量居高不下有密切關(guān)系。手術(shù)室、新生兒室、產(chǎn)房等重點(diǎn)科室的空氣污染的控制應(yīng)成為醫(yī)院感染管理中特別關(guān)注的部門?？諝庀拘ЧO(jiān)測(cè)

1.采樣時(shí)間：在消毒處理后與進(jìn)行醫(yī)療活動(dòng)之前期間進(jìn)行采樣。2.采樣方法：平板暴露法①布點(diǎn)方法：室內(nèi)面積≤30m2，設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角線3點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)布點(diǎn)部位距墻壁1m處；室內(nèi)面積＞30m2，設(shè)4角及中央5點(diǎn)，4角的布點(diǎn)部位距墻壁1m處。②采樣方法：將普通營養(yǎng)瓊脂平板〔直徑為9cm〕放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度為距地面0.8m～1.5m，采樣時(shí)將平板蓋翻開，扣放于平板旁，暴露5min，蓋好立即送檢?？諝庀拘ЧO(jiān)測(cè)3.檢測(cè)方法：平板暴露法結(jié)果計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)〔cfu/m3〕=50000N/〔A×T〕式中A為平板面積〔cm2〕；T為平板暴露時(shí)間〔min〕；N為平均菌落數(shù)〔cfu〕。舉例：平皿上菌落數(shù)〔3，2，1〕結(jié)果為：50000×2/〔3.14×4.52×5)=314.5(cfu/m3)平板暴露法簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)，但只能采集到10μm左右的大粒子?？諝庀拘ЧO(jiān)測(cè)4.結(jié)果判定：Ⅰ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/m3(或0.2cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤200cfu/m3(或4cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；Ⅲ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤500cfu/m3(或10cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。5.本卷須知采樣前，關(guān)好門、窗，在無人走動(dòng)的情況下，靜止10min進(jìn)行采樣。醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)〔GB50333-2002〕1.術(shù)語：(1)潔凈手術(shù)部：由潔凈手術(shù)室、潔凈輔助用房和非潔凈輔助用房組成的自成體系的功能區(qū)域；(2)浮游法細(xì)菌濃度：簡(jiǎn)稱浮游菌濃度。在空氣中隨機(jī)采樣，對(duì)采樣培養(yǎng)基經(jīng)過培養(yǎng)得出菌落數(shù)〔CFU〕，代表空氣中的浮游菌數(shù)，個(gè)/m3；(3)沉降法細(xì)菌濃度：簡(jiǎn)稱沉降菌濃度。用直徑90mm培養(yǎng)皿在空氣中暴露30min，蓋好培養(yǎng)皿后經(jīng)過培養(yǎng)得出的菌落數(shù)〔CFU〕，代表空氣中可以沉降下來的細(xì)菌數(shù)，個(gè)/皿；1.術(shù)語(4)手術(shù)區(qū)：需要特別保護(hù)的手術(shù)臺(tái)及周圍區(qū)域。Ⅰ級(jí)手術(shù)室的手術(shù)區(qū)是指手術(shù)臺(tái)兩側(cè)邊至少各外推0.9m、兩端至少各外推0.4m后〔包括手術(shù)臺(tái)〕的區(qū)域；Ⅱ級(jí)手術(shù)室的手術(shù)區(qū)是指手術(shù)臺(tái)兩側(cè)邊至少各外推0.6m，兩端至少各外推0.4m后〔包括手術(shù)臺(tái)〕的區(qū)域；Ⅲ級(jí)手術(shù)室的手術(shù)區(qū)是指手術(shù)臺(tái)四邊至少各外推0.4m后〔包括手術(shù)臺(tái)〕的區(qū)域。Ⅳ級(jí)手術(shù)室不分手術(shù)區(qū)和周邊區(qū)；(5)周邊區(qū)：潔凈手