免疫定性試驗(yàn)結(jié)果判讀周育洋

免疫定性試驗(yàn)結(jié)果判讀周育洋第一頁，共八十五頁，2022年，8月28日

本課件免疫定性試驗(yàn)僅指臨床通常使用的基于抗原-抗體反應(yīng)原理的試驗(yàn)抗原-抗體反應(yīng)的特點(diǎn)：*特異性*比例性*可逆性前帶（抗體多）后帶（抗原多）pH 離子強(qiáng)度第三頁，共八十五頁，2022年，8月28日抗原抗體反應(yīng)類型沉淀反應(yīng)凝集反應(yīng)可溶性抗原顆粒性抗原補(bǔ)體參于的反應(yīng)中和反應(yīng)標(biāo)記免疫熒光放射酶標(biāo)發(fā)光金標(biāo)第四頁，共八十五頁，2022年，8月28日影響抗原-抗體反應(yīng)的因素反應(yīng)物自身的因素：抗原：可溶性顆粒性細(xì)菌細(xì)胞抗體：來源濃度特異性親和力反應(yīng)環(huán)境條件：電解質(zhì)酸堿度溫度第五頁，共八十五頁，2022年，8月28日原材料-決定性抗原類型：天然（自然生成，未經(jīng)修飾） 變性（或在其它方面改變）合成（用片段和甚至是單獨(dú)的表位）純度：用于純化的方法應(yīng)盡可能的精密。為了允許較小組分的檢測，應(yīng)該有足夠的量亞型：全面性突變：抗原性改變第六頁，共八十五頁，2022年，8月28日影響因素原材料抗體類型：單克隆、混合單克隆、多克隆或單克隆-多克隆組合。非特異活性：可以來自“異常”人免疫球蛋白，包括風(fēng)濕因子和異嗜性抗體（抗-反芻類、抗-鳥類或抗-鼠類）。效價(jià)：最佳反應(yīng)的工作稀釋度。推薦的稀釋度應(yīng)該只作為起始點(diǎn)被接受。第七頁，共八十五頁，2022年，8月28日內(nèi)源性干擾因素類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、治療性抗體、自身抗體、溶菌酶、磷脂、藥物小分子、總蛋白濃度等。第八頁，共八十五頁，2022年，8月28日類風(fēng)濕因子（RF）干擾RF一般為IgM型，亦有IgG和IgA型。

RF具有與變性IgG產(chǎn)生非特異結(jié)合的特點(diǎn)。在捕獲法IgM型特異抗體的測定中表現(xiàn)最為明顯，因?yàn)榇藭r(shí)固相包被的抗體為抗人μ鏈抗體，

IgM型RF的存在可使其大量結(jié)合于固相。第九頁，共八十五頁，2022年，8月28日類風(fēng)濕因子干擾的排除稀釋標(biāo)本改變標(biāo)記抗體用變性IgG預(yù)先封閉標(biāo)本中RF測抗原,可加入還原劑如2-巰基乙醇去除RF使用特異的雞抗體IgY作為標(biāo)記或固相抗體第十頁，共八十五頁，2022年，8月28日補(bǔ)體干擾固相抗體和標(biāo)記二抗的抗體分子可發(fā)生變構(gòu)，從而其Fc段的補(bǔ)體C1q結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來，這樣C1q就成為一個中介物將二者交聯(lián)起來，從而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。固相抗體也會因?yàn)榛罨a(bǔ)體的結(jié)合，封閉抗體的抗原表位結(jié)合能力，而引起假陰性結(jié)果或結(jié)果偏低。第十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日補(bǔ)體干擾的排除56℃30min加熱可使標(biāo)本中補(bǔ)體C1q滅活使用特異的雞抗體IgY作為標(biāo)記或固相抗體第十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日自身抗體干擾自身抗體如抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等，能與其相應(yīng)靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在免疫測定方法中可干擾相應(yīng)抗原抗體的測定。為避免以上情況出現(xiàn)，可在測定前用理化方法將其解離。第十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日影響因素--反應(yīng)模式雙抗體（原）夾心法間接法競爭法競爭中和法捕獲法一步法的增強(qiáng)試劑聚乙二醇，用來增強(qiáng)抗原-抗體復(fù)合物的生成，加速非特異性液液相技術(shù)固液相技術(shù)綁定和反應(yīng)時(shí)間，但可以引起非免疫化二步法學(xué)沉淀，降低試驗(yàn)的敏感性和特異性。第十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日影響因素--信號放大系統(tǒng)顯色劑：OPD，TMB熒光：4-MUP時(shí)間分辨：稀土元素化學(xué)發(fā)光：魯米諾，吖啶酯類，AMPPD電化學(xué)發(fā)光：三甲基吡啶釕第十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日外源性干擾因素溶血、細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長、凝固不全、反復(fù)凍融。第十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日標(biāo)本溶血注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白類似過氧化物的活性，使反應(yīng)顯色。第十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日標(biāo)本被細(xì)菌污染細(xì)菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用。細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。第十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日標(biāo)本貯存時(shí)間過長標(biāo)本在2～8℃下保存時(shí)間過長，IgG可聚合成多聚體，在間接法免疫測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性。血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在

2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時(shí)間保存，應(yīng)在－70℃以下。第十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日標(biāo)本凝固不全血液采集后，離心分離血清沒有完全凝固，離出的“血清”并非為完全的血清，其中仍殘留部分纖維蛋白原，易造成假陽性結(jié)果。血液標(biāo)本采集后，應(yīng)使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?。第二十頁，共八十五頁?022年，8月28日冰凍保存標(biāo)本避免反復(fù)凍融反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。第二十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日幾個統(tǒng)計(jì)學(xué)概念第二十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日正態(tài)分布(Gaussian

distribution)當(dāng)一質(zhì)控物用同一方法在不同的時(shí)間重復(fù)多次測定，且測定數(shù)據(jù)足夠多時(shí)，如以橫軸表示測定值，縱軸表示在大量測定中相應(yīng)測定值的個數(shù)，則可得到一個兩頭低，中間高，中為所有測定值的均值，左右對稱的“鐘形”曲線，亦即正態(tài)分布，又稱高斯分布。第二十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日正態(tài)分布的基本統(tǒng)計(jì)學(xué)含義可用均數(shù)（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）和概率來說明。第二十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日重復(fù)性條件是指在短的間隔時(shí)間內(nèi)，在同一實(shí)驗(yàn)室對相同的測定項(xiàng)目使用同一方法和同一儀器設(shè)備，由相同的操作者獲得獨(dú)立的測定結(jié)果的條件。第二十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日

診斷敏感性（sensitivity

of

diagnosis）是指將實(shí)際患病者正確地判斷為陽性（真

陽性）的百分率。陽性預(yù)測值（positive

predictive

value,PPV）是指特定試驗(yàn)方法測定得到的陽性結(jié)果中真陽性的比率第二十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日診斷特異性（specificity

of

diagnosis）是指將實(shí)際無病者正確地判斷為陰性（真陰性）的百分率。陰性預(yù)示值(negativepredictivevalue,NPV)是指特定試驗(yàn)方法測定得到的陰性結(jié)果中真陰性的比率。第二十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日診斷效率（efficiency

of

diagnosis）是指能準(zhǔn)確區(qū)分患者和非患者的能力。理想測定方法的診斷效率應(yīng)為100%。第二十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日臨床免疫檢測類型第二十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日定量分析：確定被分析物的含量。產(chǎn)生一個與待測分析物的濃度相關(guān)的光譜信號，如果有已知濃度的分析物制劑做校準(zhǔn)，分析物的實(shí)際濃度就可以被確定。第三十頁，共八十五頁，2022年，8月28日定性分析

只關(guān)注分析物的有或無，而不關(guān)心有多少（定量）。又分為用肉眼和經(jīng)驗(yàn)判斷結(jié)果的純定性試驗(yàn)和用讀數(shù)儀根據(jù)CUT

OFF值或域值判定結(jié)果的量值化定性試驗(yàn)。陽性結(jié)果只說明分析信號超過了分析閾值（檢測限）或cut-off值（cut-off值的設(shè)定給出了簡要的敏感性和特異性組合）。一般針對感染原和來自天然感染或免疫接種的相關(guān)抗體的相關(guān)檢測。第三十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日定性免疫檢驗(yàn)方法較多，主要有沉淀試驗(yàn)、凝集試驗(yàn)、熒光免疫試驗(yàn)、酶免疫試驗(yàn)和金標(biāo)法。其中金標(biāo)法雖然是靈敏、特異、快速、簡便、準(zhǔn)確率較高的體外診斷方法。但是仍存在不足之處，易出現(xiàn)假陽性和假陰性，尤其是國產(chǎn)的金標(biāo)試劑，所以建議采用ELISA法。第三十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日定性免疫檢測的用途篩選試驗(yàn)用來檢測全體人群或人群亞群一個特征的出現(xiàn)（如感染原或相關(guān)抗體的出現(xiàn)）。一般要求趨向二個極端：要么有高的臨床敏感性（即超過95%的臨床檢出率），檢測結(jié)果保證陰性篩選結(jié)果具有高可能性的沒有這些特征，而陽性結(jié)果可能需要做進(jìn)一步的確證試驗(yàn)；血站系統(tǒng)的傳染病篩查屬于此類。要么有高的特異性，檢測結(jié)果保證陽性篩選結(jié)果具有高可能性的具有這些特征。第三十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日診斷試驗(yàn)用來評價(jià)具有可疑給予特征（如一種感染的特殊類型）的人。敏感性和特異性應(yīng)該處于相對平衡狀態(tài)。如果此特征對治療或預(yù)后考慮很重要，那么敏感性要盡可能的高；而且后續(xù)已有準(zhǔn)確的確證試驗(yàn)，可以不需要高的特異性。感染性疾病的大多數(shù)臨床試驗(yàn)是用于診斷。第三十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日確證試驗(yàn)獲得篩選或診斷試驗(yàn)陽性結(jié)果后，增加的試驗(yàn)用于證明和確認(rèn)此人前面的陽性結(jié)果。在這種情況下，主要考慮的性能常常是特異性和陽性預(yù)測值，而不是敏感性和陰性預(yù)測值；特異性應(yīng)該超過98到99%。確證試驗(yàn)可以是非免疫化學(xué)的（如，培養(yǎng)或脫氧核糖核酸研究）或免疫化學(xué)的（包括免疫印跡和抗原或抗體中和試驗(yàn)）。如果篩選和診斷試驗(yàn)已具有高的特異性和陽性預(yù)測值，則不需要確證試驗(yàn)。第三十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日定性免疫檢驗(yàn)質(zhì)量控制第三十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日已知的弱陽性質(zhì)控:每次測定都應(yīng)至少帶一個已知的弱陽性對照，從而有助于判斷臨床標(biāo)本的檢測結(jié)果是否有效。陰性質(zhì)控:必需每次測定都必須設(shè)空白對照、陰性對照、陽性對照和弱陽性對照。第三十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日CUT

OFF值的選擇一個試驗(yàn)一般不可能有完全的（100%）敏感性、特異性或預(yù)測值。Cutoff值的選擇和來自一個檢測的結(jié)果報(bào)告，應(yīng)該考慮以下這些性能指標(biāo)哪個更重要：

（1）當(dāng)疾病是嚴(yán)重并且可治療的，應(yīng)該不能漏檢；假陽性結(jié)果不會導(dǎo)致嚴(yán)重的精神或經(jīng)濟(jì)創(chuàng)傷；不合適的治療僅有輕微的后果需要高敏感性。

（2）當(dāng)疾病是嚴(yán)重的但是不能治療；沒有疾病時(shí)具有心理或公眾健康價(jià)值；假陽性結(jié)果可能引起嚴(yán)重的精神或經(jīng)濟(jì)上的創(chuàng)傷（如HIV抗體的確證試驗(yàn)）需要高特異性。第三十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日

（3）當(dāng)不合適的治療可能導(dǎo)致嚴(yán)重后果，需要高預(yù)測值。

（4）當(dāng)疾病嚴(yán)重但是可治療，并且假陰性或假陽性結(jié)果同樣嚴(yán)重（如引起腦膜炎細(xì)菌抗原的分析）需要高符合率。

在確定這些因素的合適平衡點(diǎn)時(shí)，廠商或其它檢測的研發(fā)者應(yīng)該用來自三種人群的樣本評估檢測的性能：感染疾病的人，沒有疾病的健康人和非討論疾病患者的病人。廠商應(yīng)該標(biāo)明推薦的cut-off值是怎么定義的以及在什么樣的人群應(yīng)用。

理想狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該在自己的服務(wù)人群中確定區(qū)間和cut-off值。第三十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日純定性試驗(yàn)的質(zhì)控要求

臨床免疫純定性試驗(yàn)大都屬于CLIA’88豁免的技術(shù)（waivedtestingsites），包括免疫沉淀、凝集試驗(yàn)、標(biāo)記免疫的金標(biāo)試紙和斑點(diǎn)滲濾、免疫熒光印跡法等等。

對于FDA等批準(zhǔn)家庭使用的技術(shù)，只要求檢測裝置有內(nèi)對照，檢測結(jié)果滿足說明書規(guī)定即可；

對于需要經(jīng)驗(yàn)來判定結(jié)果的技術(shù)仍需在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，均有質(zhì)控的要求，但國際上無具體操作的規(guī)定和資料。第四十頁，共八十五頁，2022年，8月28日

根據(jù)顯色或發(fā)光直接判定陰陽性的技術(shù)，如金標(biāo)試紙，美國CDC在“CLIA’88豁免的HIV抗體快速檢測的質(zhì)量保證指南<2007年版>”中要求：除檢測裝置的內(nèi)對照外，每檢測日或分析批，應(yīng)使用弱陽性和陰性外對照作為質(zhì)控。無判定標(biāo)準(zhǔn)，一般理解為陰、陽性質(zhì)控的檢測結(jié)果分別為陰性和陽性即表明在控，相反則為失控。

根據(jù)滴度或稀釋度判定陰陽性的技術(shù)，如凝集試驗(yàn)，使用弱陽性和陰性外對照質(zhì)控，陽性質(zhì)控結(jié)果在均值上下一個滴度或稀釋度以及陰性質(zhì)控結(jié)果為陰性即為在控，否則視為失控。第四十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日失控原因分析

失控信號的出現(xiàn)受多種因素的影響，包括質(zhì)控物、試劑、儀器、操作以及質(zhì)控規(guī)則本身等等。一旦出現(xiàn)失控信號，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該仔細(xì)地分析原因、查找根源，不要拘泥于推薦的程式化的步驟進(jìn)行，而應(yīng)該根據(jù)誤差的來源和當(dāng)批工作的實(shí)際開展排查工作。

偶然誤差造成的失控，首先考慮有無工作條件的變化，如新的質(zhì)控物、新的試劑、儀器故障、人員變動、操作程序變化等等；其次查找儀器校準(zhǔn)、環(huán)境因素（水質(zhì)、溫濕度）等原因。

系統(tǒng)誤差造成的失控，首先考慮質(zhì)控物或試劑原因，其次查找儀器校準(zhǔn)問題，再次分析操作程序、環(huán)境因素等原因。第四十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日失控處理

實(shí)驗(yàn)室在確定失控原因后，應(yīng)有針對性地采取糾正措施；對重復(fù)或系統(tǒng)性出現(xiàn)的失控原因需引入預(yù)防措施，必要時(shí)還應(yīng)修改程序文件或作業(yè)指導(dǎo)書。

對于失控批的患者標(biāo)本應(yīng)根據(jù)不同情況采取相應(yīng)的重測方案：陽性失控，重測所有陰性標(biāo)本；陰性失控，重測所有陽性標(biāo)本。第四十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日判讀實(shí)例（1）梅毒試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室檢查第四十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日TPTreponema

palidum

subsp.palidum蒼白密螺旋體蒼白亞種

梅毒(syphilis)是一種疾病，我們只是做相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室檢查，對結(jié)果的解釋必須結(jié)合病史和患者的臨床情況。第四十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日現(xiàn)實(shí)意義

梅毒感染率逐年增加，2005年在所有甲乙類傳染病僅次于肺結(jié)核、乙型肝炎、痢疾、淋病居第五位。和艾滋病、淋病、肺結(jié)核等呈復(fù)合感染。梅毒感染率逐年增加，不容忽視假陽性率也很高陽性率：大樣本輸血員

0.58%低危人群（病員）

1.52%~1.61%其中﹥50歲者占53.3%~62.3%陽性率3.02%~3.15%我們怎么應(yīng)答

： 供血與受血者，手術(shù)，創(chuàng)傷性檢查，院內(nèi)感染控制

。（婚檢）必查項(xiàng)目。第四十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)室診斷（病原體1）

DFM暗視野顯微鏡找Tp：病灶組織液、腫大淋巴結(jié)穿刺液。§Tp呈白色發(fā)光，運(yùn)動快速，開塞鉆樣旋轉(zhuǎn)?！靻未侮栃月剩?0%，多灶取樣，連續(xù)檢查?！熳⒁獍踩雷o(hù)。第四十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)室診斷（病原體2）DFAT直接熒光抗體檢查Tp：§病灶組織液、腫大淋巴結(jié)穿刺液。涂片、干燥、丙酮固定?！霧ITC─抗Tp單抗染色，熒光顯微鏡檢查?！熳⒁獍踩Ｗo(hù)。第四十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)室診斷（病原體3）PCR核酸檢查：敏感性差異大，不能區(qū)分T.pallidum亞種。已建立一些新方法（如MGB-TaqMan探針熒光定量PCR），需廣泛驗(yàn)證。第四十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)室診斷（血清學(xué)）非密螺旋體抗體試驗(yàn)（nontreponemal

antibody

tests,NTrAT）:測抗類脂抗體（反應(yīng)素regain）。其靶抗原是宿主細(xì)胞被螺旋體感染后釋放的類脂（lipoidal）物質(zhì)、螺旋體釋放的自身脂蛋白樣物質(zhì)（lipoprotein-like

material）和心磷脂（cardiolipin）密螺旋體抗體試驗(yàn)（treponemal

antibody

tests,TrAT）：測抗Tp特異抗體。

其

靶抗原是Tp的Nichols株的純化處理物。第五十頁，共八十五頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)室診斷（NTrAT）NTrAT：VDRL（

venereal

diseaseresearch

laboratory）RPR（rapid

plasma

reagin）3）USR（unheated

serum

reagin）4）TRUST（toluidine

red

unheated-serum

test）第五十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日

NTrAT：抗原為心磷脂、膽固醇、卵磷脂按適當(dāng)比例配制的乙醇溶液1）VDRL：待測血清加熱滅活，顯微鏡觀察。）USR：血清不加熱顯微鏡觀察。）RPR：抗原染成黑色，血清不加熱，肉眼觀察。4）TRUST：抗原染成紅色，血清不加熱，肉眼觀察。第五十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)室診斷（TrAT）★TPHA

（

T.pallidum

hemagglutination

assay）★TPPA（T.pllidum

particle

agglutination

assay）★金標(biāo)記免疫層析★ELISA-TP★FTA-ABS（fluorescent

Tp-antibody

absorption）★FTA-ABS-DS（FTA-ABS

double

staining）★免疫印跡試驗(yàn)第五十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日TrAT：抗原為梅毒螺旋體Nichols株特異抗原。TPHA：Nichols株超聲或SDS提取抗原，包被甲醛、鞣酸處理的SRBC,遇血清中抗體血凝。血清用Reiter株，牛、羊RBC，正常兔血清和兔睪丸提取物吸收。TPPA：染成紅色明膠顆粒包被抗原。試劑盒中未配吸收劑。ELISA：純化或重組T.pallidum抗原（15000、17000、42000、47000）包被，間接法或雙抗原夾心法。未配吸收劑。第五十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日（4）FTA-ABS:Nichols株制片，丙酮固定，待測血清用含Reiter株吸收劑吸收。FITC-抗人IgG（

IgM）示蹤。FTA-ABS-DS：同上，第一次熒光染色用四甲基異硫氰酸羅達(dá)明標(biāo)記的抗人IgG；第二次熒光染色用FITC標(biāo)記抗

Tp抗體。免疫印跡（WB）：Nichols株純化抗原SDS-PAGE，電轉(zhuǎn)印至NC膜或PVDF膜，待測血清不吸收，與膜上抗原反應(yīng)，再與酶標(biāo)抗人IgG反應(yīng)，顯色。（7）金標(biāo)記免疫層析：膜條上包被純化的Tp抗原，待測血清不吸收，與膜端金標(biāo)抗人IgG結(jié)合后層析至測試區(qū)與Tp抗原結(jié)合，出現(xiàn)呈色條帶。第五十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日梅毒血清學(xué)試驗(yàn)敏感性與特異性試驗(yàn)特異性敏感性一期

二期

潛伏三期VDRL78（74~87）10095（88~100）71（37~94）98（96~99）RPR86（77~100）10098（95~100）73（36~96）98（93~99）100

95（88~100）99USR

80（72~88）TRUST

85（77~86）

10098（95~100）——99（98~99）NTrAT第五十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日試驗(yàn)敏感性特異性一期二期

潛伏

三期FTA-ABS84（70~100

）

10010097（94~100）FTA-ABS-DS80（69~90）10010096—98（97~100）TPHA76（69~90）100

97（97~100）

9499（98~100）TPPA80（86~100）—96（95~100）100

10097（97~100）…………99（98~100）ELISA-IgG

………………注：無分期資料TrAT第五十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日梅毒實(shí)驗(yàn)室檢查難點(diǎn)

本屬包括4種對人致病和至少6種對人不致病的密螺旋體。Tp和其它該屬螺旋體在形態(tài)學(xué)上無法區(qū)別；核酸雜交試驗(yàn)DNA同源性≧

95%；已知的基因序列高度一致性；蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及與某些單克隆抗體反應(yīng)幾乎相同。

因此，只能依靠對人和實(shí)驗(yàn)動物的致病譜來加以區(qū)別。第五十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日螺旋體的分類及致病性螺旋體種類屬種 疾

病 傳播方式或媒介Ⅰ疏螺旋體（Borrelia）伯氏疏螺旋體回歸熱螺旋體萊姆病

硬蜱流行性回歸熱

體虱赫姆疏螺旋體

地方性回歸熱

軟婢奮森疏螺旋體

多種口腔感染

條件致病短螺旋體（Brachyspira）脊螺旋體（Cristispira）細(xì)絲體

（Leptonema）鉤端螺旋體病接觸疫水Ⅴ鉤端螺旋體（Leptospira）問號鉤端螺旋體雙曲鉤端螺旋體Ⅵ小蛇形螺旋體（Serpulina）Ⅶ

螺旋體

（Spirochaeta）Ⅷ

密螺旋體（Treponema）

梅毒螺旋體

梅毒性傳播雅司螺旋體品他螺旋體 品他病地方性螺旋體

地方性梅毒雅司病粘膜損傷皮膚損傷皮膚損傷第五十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日梅毒螺旋體結(jié)構(gòu)（1）長6~20μm,直徑90~180nm，有

6~14個規(guī)則螺旋，兩端尖直。（2）外膜：有三層，含蛋白質(zhì)、類脂、糖，有抗原性，對溶菌酶抵抗，對脂溶劑、SDS敏感。第六十頁，共八十五頁，2022年，8月28日（3）胞質(zhì)微絲：有外鞘及內(nèi)核心，含大量蛋白質(zhì)（4）菌體：圓柱形，包括細(xì)胞壁、胞質(zhì)膜、胞質(zhì)。（5）周質(zhì)鞭毛：附著于菌體兩端2~3條或4~6條。第六十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日（6）基因組（Nichols株1.131×106bp，1998年）（7）抗原：特異性耐熱多糖抗原（多糖--

RNA），非特異性心磷脂、類脂抗原，特異性不耐熱蛋白質(zhì)，包括MW（

15.5~190.0×103）的16種，其中15500、17000、42000、47000有特異性。第六十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日血清學(xué)試驗(yàn)假陽性原因（一）其他的人類宿主相關(guān)螺旋體口腔螺旋體（齒齦間隙牙菌斑）參與齒齦炎、牙周病。皮膚相關(guān)螺旋體（外陰部皮脂腺分泌物）。腸道螺旋體（結(jié)腸、直腸、糞便）參與腹瀉等腸病。第六十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日血清學(xué)試驗(yàn)假陽性原因（二）NTrAT

TrAT自身免疫病++瘧

疾免疫接種++--皮

膚

病++結(jié)

核+-麻

風(fēng)++靜脈注射毒品+-病毒感染+-心血管病++第六十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日NTrATTrAT熱妊性病娠+++-HIV感染+-+--+其他性傳播病老

年

人多

次

輸

血+--+++++Lyme

病地方性密螺旋體病技術(shù)誤差原因不明++第六十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷注意事項(xiàng)安全防護(hù)。血清學(xué)試驗(yàn)陽性只提示檢出相應(yīng)抗體。

加強(qiáng)專業(yè)知識學(xué)習(xí)，結(jié)合臨床病史、病癥綜合分析。改進(jìn)技術(shù)，TrAT要吸收處理。第六十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日吸收處理

在進(jìn)行TrAT試驗(yàn)時(shí)，待測血清都應(yīng)先用非致病性密螺旋體的Reiter株的提取物或超聲處理材料和Nichols株培養(yǎng)體兔睪丸提取物、兔血清等進(jìn)行吸收。

吸收目的：除去待測血清中可能存在的與其它非梅毒螺旋體抗原產(chǎn)生交叉反應(yīng)的抗群、抗屬或抗科的特異抗原或抗體。

TPHA試驗(yàn)還應(yīng)用超聲處理的綿羊和牛紅細(xì)胞吸收以吸除嗜異性抗體。即使如此，試驗(yàn)的特異性仍只能達(dá)99%左右。第六十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷第六十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷（新圖解）?有不潔性史有病損者（下疳、皮疹、淋巴穿刺液）DFM\DFAT\PCR陽性確診治療陰性無病損者（血清、血漿）滴定（評估療效、再感染）TrATNTrAT（篩選）陽性

陰性陽性陰性假陽性2周后復(fù)檢繼續(xù)陰性排除第六十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日判讀實(shí)例（2）HCV抗體的實(shí)驗(yàn)室檢測報(bào)告第七十頁，共八十五頁，2022年，8月28日

對丙肝的認(rèn)識時(shí)間不長（1989年），世界各地感染率相差很大，英國5/萬，開羅卻高達(dá)26%。全世界至少有2億感染者，急性感染者中有20%-30%不通過治療也能

在2-26周內(nèi)，完全清除病毒，達(dá)到臨床痊愈，不再復(fù)發(fā)。在血透患者中，體內(nèi)丙肝抗體水平可能很低甚至無法檢出，隨著時(shí)間推移，也可能存在反復(fù)。第七十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日

用化學(xué)發(fā)光法或酶聯(lián)免疫法檢測丙肝抗體，屬于初篩試驗(yàn)。方法本身存在一定的假陽性或假陰性，陽性結(jié)果中有2-3%不是真的感

染丙肝；高危人群（如長期血透者）陰性結(jié)果中有3-5%卻是真的感染了丙肝。在疾病

不同階段這就要求臨床需根據(jù)患者實(shí)際情況，持續(xù)跟蹤檢查，才能正確診治病人。而丙肝的確認(rèn)試驗(yàn)是條帶免疫印跡法，由于試劑昂貴，約2000元/測試，并未應(yīng)用于臨床實(shí)踐。第七十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日

HCV抗體的出現(xiàn)不能確定是當(dāng)前感染還是既往感染。HCV抗體的確認(rèn)和NAT&ALT對HCV感染的醫(yī)療評估、咨詢和減少不必要的醫(yī)療花費(fèi)與心理傷害有著積極而深遠(yuǎn)的意義。第七十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日HCV抗體不能常態(tài)確認(rèn)的原因未建立標(biāo)準(zhǔn)

不了解篩查和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)的性能及結(jié)果的意義確認(rèn)實(shí)驗(yàn)成本非常之高第七十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日HCV感染的實(shí)驗(yàn)室檢測方法#篩查試驗(yàn)測抗原，測抗體ELISACLIAGIA#確認(rèn)試驗(yàn)免疫印跡試劑（Chiron

RIBA*

HCV3.0）NAT第七十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日初篩實(shí)驗(yàn)的報(bào)告衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心建議：

除確認(rèn)試劑用陰性和陽性表示外，其余都用有反應(yīng)性或無反應(yīng)性表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

在做ELISA或CLIA時(shí)，對有反應(yīng)性結(jié)果的

標(biāo)本雙孔復(fù)試。任意一孔有反應(yīng)性，則標(biāo)本被認(rèn)為有重復(fù)反應(yīng)性篩查實(shí)驗(yàn)結(jié)果被認(rèn)為有反應(yīng)性。第七十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日

對HCV抗體的測試應(yīng)包括抗體篩查實(shí)驗(yàn)和對有重復(fù)反應(yīng)性標(biāo)本的更特異確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。

要根據(jù)篩查實(shí)驗(yàn)的S/CO比值選擇確認(rèn)實(shí)驗(yàn)路徑。不同人群有不同的S/CO判讀標(biāo)準(zhǔn)。第七十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日高危人群（吸毒、肝病、性病等） 其中低S/CO比值占2.4～4.9%低危人群（無償獻(xiàn)血者、軍人、醫(yī)務(wù)工作者）其中低S/CO比值占21.5～33.5%★并且他們的假陽性率達(dá)35%第七十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日國外試劑ELISA法中S/CO≥3.8CLIA 法中S/CO

≥

8.0或時(shí)可預(yù)測≥95%的真陽性結(jié)果第七十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日國產(chǎn)ELISA試劑華美

S/CO

≥

6.0新創(chuàng)