高中生物實驗-DNA的粗提取和鑒定課件

課題DNA的粗提取與鑒定染色體成分蛋白質(zhì)RNA(少量)DNA提取DNA的基本思路：利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。1課題DNA的粗提取與鑒定染色體成分蛋白質(zhì)RNA(少DNA的粗提取與鑒定1．原理、方法和目的基本原理方法目的DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低溶于NaCl溶液中并稀釋①NaCl溶液為2mol/L時，DNA溶解，而部分蛋白質(zhì)發(fā)生鹽析生成沉淀，通過過濾可除去部分蛋白質(zhì)及不溶于NaCl溶液的雜質(zhì)②當(dāng)NaCl溶液稀釋至0.14mol/L時，DNA析出，過濾可除去溶于NaCl溶液的部分蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)DNA不被蛋白酶所水解加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白質(zhì)（酶的專一性）DNA不溶于酒精溶液加入冷卻酒精(95%)DNA析出，除去溶于酒精的蛋白質(zhì)DNA可被二苯胺染成藍色加入二苯胺，并沸水浴鑒定DNA高溫DNA耐高溫DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性不同：蛋白質(zhì)、DNA熱穩(wěn)定性不同。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60～80℃的高溫，而DNA在80℃以上才會變性。DNA對洗滌劑耐受性洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對DNA沒有影響。加入洗滌劑2DNA的粗提取與鑒定1．原理、方法和目的基本原理方1）不同濃度NaCl中DNA溶解度不同。

2）DNA與其他細(xì)胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，細(xì)胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。3）DNA和蛋白質(zhì)對酶耐受性不同：酶的專一性——蛋白酶水解蛋白質(zhì)。但是對DNA沒有影響。4）DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性不同：蛋白質(zhì)、DNA熱穩(wěn)定性不同。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60～80℃的高溫，而DNA在80℃以上才會變性。5）DNA和蛋白質(zhì)對洗滌劑耐受性不同：洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對DNA沒有影響。提取DNA的原理包括DNA的

兩個方面溶解性和耐受性1.DNA的粗提取實驗原理3提取DNA的原理包括DNA的2.實驗材料

①動物

雞血細(xì)胞液的優(yōu)點提醒：人和哺乳動物成熟的紅細(xì)胞中不含細(xì)胞核，也沒有DNA，不適于作為DNA提取的材料，但卻是提取血紅蛋白的理想材料。

雞血紅細(xì)胞、白細(xì)胞中都有細(xì)胞核，含大量的DNA,既經(jīng)濟又易取

②植物：洋蔥、新鮮菜花、蒜黃、菠菜等。

42.實驗材料

①動物

雞血細(xì)胞液的優(yōu)點提醒：人和哺乳3、方法與過程

1).制雞血細(xì)胞液0.1g/mL檸檬酸鈉100mL活雞鮮血180mL500mL燒杯中，玻棒攪拌，離心或靜置沉淀。離心或靜置后去掉上清液血漿血細(xì)胞53、方法與過程1).制雞血細(xì)胞液0.1g/mL檸檬酸鈉10關(guān)于DNA粗提取的實驗材料的選擇，也經(jīng)過了多次實驗結(jié)果的比較，最終選擇雞血做實驗材料的原因是什么？請回答下列問題：（1）雞血中紅細(xì)胞

，家雞屬于鳥類，新陳代謝旺盛，因而血液中

細(xì)胞數(shù)目較多，可以提供豐富的

（2）實驗前由老師制備雞血細(xì)胞液供同學(xué)們做實驗材料，而不用雞全血，主要原因是（3）生活在牧區(qū)的人們，采集羊、牛和馬血比較方便，若他們按實驗要求完成實驗步驟后，結(jié)果是

，這是因為

，

但若改用動物肝臟做實驗材料，實驗可以順利進行，這是因為

。（4）若選用動物肝臟做實驗材料，在提取之前，最好增加

程序，使組織細(xì)胞更易分離。含有完整的、成形的細(xì)胞核紅DNA量，所以一般采用雞血雞的全血包括血漿和血細(xì)胞，血漿中無DNA，全血中除掉血漿后就是濃縮的血細(xì)胞液，DNA的相對含量提高了。在實驗中很難提取到DNA哺乳動物成熟的紅細(xì)胞中無細(xì)胞核，反靠白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中的少量DNA，在實驗中很難提取到肝細(xì)胞中含有細(xì)胞核，并且肝組織容易被破壞，有利于DNA的提取若使肝組織易分離，將肝細(xì)胞剪碎、研磨是一種簡便易行的方法。6關(guān)于DNA粗提取的實驗材料的選擇，也經(jīng)過了多次實驗結(jié)果的比較提取細(xì)胞核物質(zhì)：溶解核內(nèi)DNA：在濾液中加2mol/L的NaCl溶液并攪拌，使染色質(zhì)中DNA與蛋白質(zhì)分離，DNA充分溶解，過濾(除雜質(zhì))析出DNA：DNA黏稠物再溶解：在燒杯中用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。提取較純凈的DNA：DNA的鑒定：取兩試管各加2mol/L的NaCl溶液，將DNA充分溶解于其中一試管，然后向兩試管加入二苯胺試劑，混勻沸水中加熱5min后冷卻，可發(fā)現(xiàn)DNA與試劑反應(yīng)使溶液呈現(xiàn)藍色。濾取DNA黏稠物：過濾含DNA的NaCl溶液：用兩層紗布過濾。2)實驗方法步驟：

在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個方向輕輕攪拌，出現(xiàn)絲狀物；當(dāng)絲狀物不在增加時，停止加水（此時NaCl溶液的濃度相當(dāng)于0.14mol/L）。

用多層紗布過濾，含DNA的粘稠物留在紗布上。濾液中含有DNA。所得的濾液＋體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻酒精50mL，用玻棒沿一個方向輕緩攪拌，溶液中（析出）出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。利用細(xì)胞吸水破裂，細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)釋放出來，后用紗布過濾取其濾液。血細(xì)胞在蒸餾水中易吸水而導(dǎo)致細(xì)胞膜和核膜的破裂，據(jù)此可得出含核DNA的溶液。7提取細(xì)胞核物質(zhì)：溶解核內(nèi)DNA：在濾液中加2mol/L的Na鑒定不變藍——對照組溶液逐漸變藍絲狀物(DNA)實驗組圖示結(jié)果加入物質(zhì)比較均加入：①4mL二苯胺試劑②2mol/LNaCl溶液5mL鑒定時藍色的深淺與溶液中DNA的含量多少有關(guān)。自變量你能采用其他方法對DNA進行鑒定嗎？洋蔥的鱗片葉表皮細(xì)胞取少許絲狀物，置玻片中央，加1滴甲基綠溶液，絲狀物變成綠色。鑒定所用的試劑是二苯胺或甲基綠。用二苯胺須加熱。用甲基綠不用水浴加熱。8鑒定不變藍——對照組溶液逐漸絲狀物(DNA99

注意事項

①制備雞血細(xì)胞液時，要在取雞血的同時加入檸檬酸鈉，靜置后上層是血清，下層為所需要的血細(xì)胞。

②整個實驗中加入“兩次蒸餾水，三次NaCl溶液，一次酒精”

兩次加蒸餾水的目的不同，一是漲破細(xì)胞，二是稀釋溶液。

酒精最好用95%的冷酒精;

③加蒸餾水或加入酒精用玻棒攪拌時,動作要輕緩且朝一個方向。保證DNA分子的完整性。使用時注意玻璃棒不要碰到燒杯底。

④鑒定DNA時需沸水浴加熱。

⑤二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用,否則會影響鑒定的效果.二苯胺是一種有毒性的試劑,使用時注意不要讓藥液接觸到皮膚或身體的其他部位.

⑥盛放雞血細(xì)胞的容器最好是塑料容器（雞血細(xì)胞破碎后釋放的DNA，容易被玻璃容器吸附，造成提取過程中DNA的損失）

10注意事項

下圖為“DNA粗提取和鑒定”實驗的相關(guān)操作。這些操作目的正確的是 （ ） A.①是洗滌血細(xì)胞，去除血細(xì)胞表面的雜質(zhì) B.②是溶解DNA，去除不溶于酒精的雜質(zhì) C.③是溶解DNA，去除不溶于2mol/LNaCl溶液的雜質(zhì) D.④是稀釋NaCl溶液，去除不溶于低濃度NaCl溶液的雜質(zhì)

①是釋放核物質(zhì)②是提純DNA，去除溶于酒精的雜質(zhì)，④稀釋NaCl溶液，析出DNA。C11下圖為“DNA粗提取和鑒定”實驗的相關(guān)操作。這些操作目的正確甲、乙兩圖為“DNA的粗提取與鑒定”實驗中涉及的兩個操作裝置圖。相關(guān)敘述正確的是甲乙A．圖甲的燒杯和圖乙的試管中所用溶劑都為NaCl溶液，但兩者濃度不同B．圖乙試管經(jīng)少許加熱后即可觀察到一支試管中的溶液明顯變藍，另一支試管中的溶液不變藍C．圖甲操作需用玻棒迅速攪拌以使DNA成為絮狀沉淀并纏繞在玻棒上D．圖乙操作中所用的二苯胺需現(xiàn)配現(xiàn)用以達到較好的鑒定效果D12甲、乙兩圖為“DNA的粗提取與鑒定”實驗中涉及的兩個操作裝置植物細(xì)胞需要先用洗滌劑（洗發(fā)香波、沐浴液、洗潔精等）溶解細(xì)胞膜。洗滌劑可以瓦解細(xì)胞膜的原因是：洗滌液中含有十二烷基硫酸鈉和堿，它們可使細(xì)胞膜破裂，蛋白質(zhì)變性，使蛋白質(zhì)與DNA分離開來。利于DNA的釋放。動物細(xì)胞膜是不用試劑（洗滌劑）破壞的，因為動物細(xì)胞膜外面沒有細(xì)胞壁的保護，放在清水中自然的就會吸水而脹破，釋放出其中的DNA等物質(zhì)。4、植物：新鮮菜花、蒜黃、菠菜等。

13植物細(xì)胞需要先用洗滌劑（洗發(fā)香波、沐浴液、洗潔精等）溶解細(xì)胞方法步驟1、將30g香蕉或菜花切碎，放入研缽中。向研缽中加入2g氯化鈉，研磨直