一種多因素聯(lián)合構(gòu)建慢性缺血性肢體疼痛模型的方法

一種多因素聯(lián)合構(gòu)建慢性缺血性肢體疼痛模型的方法

嚴(yán)重的四肢缺血（cpi）是周圍血管阻塞疾?。╬epopsis，paod）的最終階段。其特點是難治性疼痛和組織損傷，以及缺血性休息疼痛、潰瘍和傷口，以及缺乏動脈供血的血液動力學(xué)基礎(chǔ)。選擇恰當(dāng)?shù)闹w缺血性模型開展研究，是推動肢體缺血發(fā)展機制研究和創(chuàng)新治療手段過程中必不可少的重要環(huán)節(jié)。目前現(xiàn)有模型存在明顯不足，針對慢性缺血性疼痛這一疼痛類疾病尚未有較好的動物造模方法?，F(xiàn)有缺血類動物模型側(cè)重于關(guān)注血管損傷帶來的疾病狀態(tài)，而非慢性缺血引起的疼痛狀態(tài)，存在與臨床疾病不符以及手術(shù)帶來額外損傷等問題。因此，本研究使用O型圈通過將SD大鼠下肢近膝關(guān)節(jié)處小壓力值緩慢加壓，觀察患側(cè)大鼠足跖PWTs、足跖厚度、足跖皮溫和足跖局部血流情況等指標(biāo)，以期探索一種新型的慢性缺血性肢體疼痛模型，便于后續(xù)研究。1材料和方法1.1材料表面1.1.1實驗動物飼養(yǎng)16只6周齡SPF級雄性SD大鼠，體重(180±20)g。購自中國科學(xué)院上海實驗動物中心【SCXK(滬)2018-0006】，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心飼養(yǎng)【SYXK(浙)2018-0012】。飼養(yǎng)期間給予嚙齒類動物標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料(由實驗動物中心提供)及自由飲水，12h循環(huán)燈光，恒定濕度，室溫(23±2)℃。本實驗所有操作均符合中華人民共和國《實驗動物管理調(diào)條例》，本實驗所有操作均符合浙江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物管理與倫理委員會實驗倫理學(xué)要求(倫理審批號:IACUC-20190715-03)。1.1.2儀器、試藥和儀器異氟烷(生產(chǎn)廠家:魯南貝特制藥有限公司;批號:64170901)。RFP-WX1801壓力測量儀(生產(chǎn)廠家:宇博智能科技有限公司;型號:601，量程:005N);薄膜壓力感應(yīng)器(型號:RFP-601，量程500g);激光多普勒血流灌注成像儀(生產(chǎn)廠家:帕瑞醫(yī)療科技有限公司;型號:1100047s);醫(yī)用紅外體溫計(生產(chǎn)廠家:速爾康有限公司;型號:PC868);游標(biāo)卡尺(生產(chǎn)廠家:上海美耐特實業(yè)有限公司;型號:MNT-150);麻醉劑空氣泵(生產(chǎn)廠家:瑞沃德有限公司;型號:C9M01-002);氧氣流量計(生產(chǎn)廠家:瑞沃德有限公司;型號:C5D01-062);橡皮圈1.2N型(內(nèi)徑10mm，寬度5mm、橡皮圈2.2N型(內(nèi)徑12mm，寬度5mm)。1.2方法1.2.1模型制備方法慢性缺血性肢體疼痛(chronicischemia-inducedlimbpain,CILP)大鼠模型制備方法為:如圖1所示，清醒狀態(tài)下，實驗大鼠用布套固定，將橡皮圈套于大鼠左后肢股部，橡皮圈下緣距離膝關(guān)節(jié)約1cm處作為固定施加壓力點(局部備皮后，用記號筆標(biāo)記固定點)。按照表1所列具體參數(shù)施以加壓處理模擬人體肢端慢性缺血。1.2.2處理組將CILP組給予相應(yīng)造模處理;假模型組僅使用橡皮圈(做剪斷處理)疏松地系于相同部位，其余處理與CILP組相同。1.2.3檢測時間點主要檢測實驗大鼠足跖PWTs、足跖厚度、足跖皮溫和足跖局部血流情況，具體檢測時間點見實驗流程圖(見圖2)。(1)PWTs檢測:分別于造模前，加壓后D(2)足跖厚度:分別于造模前，加壓后D(3)足跖皮溫:分別于造模前，加壓后D(4)足跖血流:分別于造模前，加壓后D1.3統(tǒng)計分析本研究中所有數(shù)據(jù)采用SPSS21.0軟件進行統(tǒng)計分析。符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差2結(jié)果2.1各組大鼠疼痛程度的變化加壓前(D2.2各組大鼠足厚度的變化加壓前(D2.3各組大鼠足部的溫度變化加壓前(D2.4壓壓過期法于橡皮圈束縛結(jié)束30min內(nèi)行多普勒檢測。加壓前(D進一步觀察了大鼠在橡皮圈加壓(束縛期)、加壓后(束縛后)不同時點的足跖平均血流量變化情況，結(jié)果如圖7所示，加壓30min時患側(cè)足跖平均血流量明顯減小呈低灌注狀態(tài)，肉眼可見足跖呈現(xiàn)瘀血狀。加壓后10min，大鼠患側(cè)足跖平均血流量呈現(xiàn)短暫的充盈，提示患側(cè)肢體于加壓后存在缺血再灌注現(xiàn)象。3肢體活檢動物模型肢體缺血性模型是研究嚴(yán)重肢體缺血甚至外周動脈疾病的基礎(chǔ)，能夠模擬臨床肢體缺血疾病的癥狀和體征，為肢體缺血疾病的研究提供科學(xué)依據(jù)。由于嚴(yán)重肢體缺血發(fā)病機制復(fù)雜、多樣，因此需要各種具有臨床針對性的理想的肢體缺血動物模型。在現(xiàn)有的動物模型中，制備方法上存在動脈結(jié)扎法、動脈期收縮法、骨折后固定法、誘導(dǎo)血管栓塞法以及加壓止血帶法，方法上較為多樣，尚未有統(tǒng)一定論。模型中存在手術(shù)制備的模型為動靜脈結(jié)扎法上述模型中，針對血管性疾病如血管栓塞綜上所述，對大鼠進行長時間后肢小壓力值緩慢加壓可成功建立模型，能夠廣泛應(yīng)用于嚴(yán)重肢體缺血類慢性下肢缺血性疼痛類疾病，對嚴(yán)重下肢缺血等疾