遼伏蘋果類黃酮提取工藝研究

遼伏蘋果類黃酮提取工藝研究

類黃酮具有抗菌、抗寒、消炎、抗過敏、血管擴張等功效。1材料和方法1.1材料和機器(1)蘋果苗圃培養(yǎng)遼伏蘋果,于2009年7月下旬采自國家果樹種質(zhì)興城蘋果圃,冰箱中4℃下保存15天。標準品兒茶素、蘆丁,購自中國藥品生物制品檢定所,其他試劑均為分析純。(2)儀器和設備TU-1800SPC紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司),SHB-III循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司),RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠),BIOFUGEPRIMO型臺式高速離心機(ThermoElectronCorporation),KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),調(diào)速多用振蕩器(深圳天南海北實業(yè)有限公司)。1.2蘋果樣品制備取10個大小均勻的遼伏蘋果果實,清洗后擦干,將蘋果去核,切成小片,混勻,平均分成4份,分別用如下方法提取類黃酮:(1)常溫振蕩法取1份蘋果樣,用組織搗碎機勻漿1min,稱取10.00g,加入80%乙醇30mL,在往復式振蕩器上室溫(20℃)提取5h,過濾,濾液在5300r/min下離心10min,上清液35℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)3h,用甲醇移入棕色玻璃瓶中并定容至10mL,冰箱中-20℃下保存。(2)液氮冷凍研磨法取1份蘋果樣,稱取10.00g,置研缽中,加入液氮,研磨,用80%乙醇30mL移入燒杯中,混勻,放置10min,真空抽濾。濾液減壓蒸發(fā)、溶解、保存等按(1)操作。(3)勻漿法取1份蘋果樣,稱取10.00g,加入80%乙醇30mL勻漿1min,真空抽濾。濾液減壓蒸發(fā)、溶解、保存等按(1)操作。(4)超聲法取1份蘋果樣,稱取10.00g,加入80%乙醇,室溫下避光超聲提取3次。每次加10mL80%乙醇,提取時間分別為1h、30min和30min,合并提取液,真空抽濾,濾液減壓蒸發(fā)、溶解、保存等按(1)操作。1.3黃酮含量的測定參照文獻1.4檢測波長的確定以試劑空白為參比溶液,分別吸取100μg/mL兒茶素溶液、100μg/mL的蘆丁溶液和樣液各1mL,按1.3操作,定容至10mL后在波長190～900nm的光譜下進行掃描。1.5顯色穩(wěn)定實驗以試劑空白為參比溶液,取1mL樣液,按1.3操作,在2h內(nèi),每間隔10s測定510nm的吸光度。2結(jié)果與分析2.1標準品的確定由圖1可知,在整個光譜掃描區(qū)間,蘆丁和樣液顯色后吸光度變化趨勢一致,而兒茶素和樣液吸光度在190～300nm的變化趨勢差異比較明顯。因此,蘆丁作為樣液類黃酮檢測的標準品比較合理。蘆丁和樣液顯色后在260、320、510nm處均有吸收峰,但260nm和320nm處于紫外區(qū),且峰較尖銳,受干擾因素影響大,因此選擇510nm為樣品的檢測波長。2.2吸光度的下降由圖2可以看出,在體系顯色的最初22min內(nèi),樣品或標準液在510nm的吸光度迅速下降;22min后趨于穩(wěn)定,下降速率僅為每小時5%。因此,測定蘋果類黃酮含量時,應在顯色22min后盡早測定,標準曲線繪制和樣品的測定,從顯色到測定之間的時間間隔均應一致。2.34重復性與相對標準偏差4種方法提取的蘋果類黃酮含量兩兩間差異均顯著(表1)。超聲法最好,類黃酮得率為0.042%,且穩(wěn)定性良好,重復樣之間的相對標準偏差為5.3%。勻漿法次之,類黃酮得率為0.035%,穩(wěn)定性最好,重復樣之間的相對標準偏差僅為2.5%。液氮冷凍研磨法再次之,類黃酮得率為0.023%,且重復樣之間的相對標準偏差高達9.0%。常溫振蕩法最差,類黃酮得率為0.013%,重復樣之間的相對標準偏差最高(達13.3%)。3超聲法提取類黃酮法對比試驗顯示,常溫振蕩法、液氮冷凍研磨法、勻漿法、超聲法等4種方法中,超聲法是蘋果類黃酮提取的較