復配高效的蝦源農(nóng)藥防治模擬稻田環(huán)境的研究

復配高效的蝦源農(nóng)藥防治模擬稻田環(huán)境的研究

1、水泥池試驗該實驗于2011年4月22日正式進行。日本蝦被購買在沙沙口的水產(chǎn)市場。作為實驗材料，選擇活體和壯體的個體作為實驗材料，體重約10克。選用4個規(guī)格約為1平方米的水泥池,水深約10㎝,模擬稻田養(yǎng)殖環(huán)境,每池放入一定量小浮萍和水花生,在水池角落放入適量泥土,泥土堆稍高于水面。每池放入蝦20~25只,試驗分為4組,試驗組3個,對照組1個,試驗天數(shù)10天,在試驗池子中分別加入芐·丁、芐·乙、氯吡·甲磺隆。在對照組的池子不施加任何除草劑。2、模擬稻田環(huán)境的水池配藥:用分析天平準確稱取除草劑“芐·乙”0.07g,“芐·丁”0.2g,“氯吡·甲磺隆”0.04ml。將稱出的藥品分別轉(zhuǎn)移至3個250ml容量瓶中加水溶解,然后置于三個大燒瓶中,拿去實驗基地。施藥方法:將配好的藥品均勻的灑入模擬稻田環(huán)境的水池中。為使藥物能均勻的撒入,邊攪拌邊撒。濃度:“芐·丁”:0.15g/m2;“芐·乙”:0.05g/m2;“氯吡·甲磺隆”:0.03ml/m2。3、養(yǎng)殖基礎設施管理預試期暫養(yǎng)7d,便于蝦適應模擬稻田環(huán)境。正試期蝦的管理和預試期相同,每天下午五點投喂一次,投喂池蝦體重的8%~12%,喂養(yǎng)飼料為黃鱔混合飼料,養(yǎng)殖水源為養(yǎng)殖池水,預試期換水2次,每次換水1/3,水溫在18~21℃,施藥后不換水,隔2天加一次水,使水深保持在10cm左右,對照組和實驗組管理均相同。4、肝臟組織勻漿制備每池隨機取三只原鰲蝦,在冰盤中活體解剖,剔除附著物,取出全部肝胰臟、胃和腸道,用生理鹽水清洗胃和腸道內(nèi)容物,濾紙吸干表面水分,將肝胰臟、胃和腸道樣本分別稱重,然后剪碎,一起加入5倍體積(w/v)的預冷雙蒸水(4℃),低溫條件下使用玻璃勻漿器制成勻漿后,勻漿液用高速冷凍離心機4500r/min,4℃離心15min。取上清液(即粗酶液),用于測定蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活力(保存于-18℃低溫冰箱)。5、分散劑濃度的測定—消化酶測定測定持續(xù)10d,隔天測一次。⑴脂肪酶活力測定:采用25%聚乙醇烯橄欖油為底物的標準氫氧化鈉溶液滴定法。取4ml聚乙醇烯乳化液置于試管中,37℃水浴預熱5min,加入0.05ml酶液,密封搖勻,迅速倒入比色皿中比色,在波長420nm處讀取吸光度值A1。將此比色液倒入原試管中置37℃水浴10min,同上法比色再讀取吸光度值A2。以0.1mol/L磷酸緩沖液(PH=7.2)緩沖液按相同步驟處理作空白對照。取底物緩沖液4ml加入0.9%氯化鈉0.05ml,于420nm下讀取吸光度值As,相當于標準管0.454mmol/L的濃度的吸光度值。計算公式:(U/g)=[(A1-A2)/10]×(As/待測液蛋白濃度)⑵蛋白酶活力測定:采用酪蛋白為底物的福林—酚試劑顯色法。0.5%酪蛋白溶液2ml置于試管中。在30℃水浴鍋中預熱5min后加入預熱過(30℃,5min)的酶液1ml,立即計時,反應10min后,從水浴鍋中取出,并立即加入10%三氯乙酸3ml,放置15min后,濾紙過濾。同另作一對照管,取酶液1ml,先加3mL10%三氯乙酸,再加0.5%酪蛋白溶液2ml,在30℃下保溫10min,再放置15min后過濾。另取3只試管編號,分別加入樣品濾液,對照濾液和水各1ml,再分別加入0.55mol/L碳酸鈉溶液5ml,福爾馬林試劑1ml,混勻。在30℃下顯色15min,加水的試管作空白管。680nm波長處比色,以對照管較零,讀取測定管光密度,由標準曲線回歸方程算出反應的酪氨酸微克數(shù)。在37℃下,每min水解干酪素產(chǎn)生lμg酪氨酸作為一個酶活力單位(μg/min)。計算公式:⑶淀粉酶活力測定:采用淀粉—碘法。在對照管和測定管中分別加入5.0mL0.04%的可溶性淀粉溶液,在37℃水浴中預熱5min,在測定管中加入酶液0.lml混勻后再和對照管一起置于37℃水浴中反應7.5min,加入0.01N碘應用液5.0m1,用蒸餾水稀釋至50ml,用660nm波長比色,以蒸餾水校正光密度到零,讀取各管光密度讀數(shù)。在37℃下,30min內(nèi)100m1酶液中的淀粉酶能完全水解淀粉l0mg時為一個淀粉酶單位。計算公式:淀粉酶活力單位/100ml=(對照管光密度-測定管光密度)/對照管光密度×2/10×30/7.5×100/0.1=(對照管光密度-測定管光密度)/對照管光密度×800。6、克氏原鰲蝦對4種分子制劑的敏感性能施用除草劑后隨時間對克氏原鰲蝦消化酶活性的影響差異顯著,在同一天,三種不同的除草劑對克氏原鰲蝦消化酶活性的影響差異顯著,表明除草劑在蝦體內(nèi)的分布、激活和解毒等過程比較復雜,即使是同一種蝦對于同一種除草劑的敏感性也是各不相同的;不同蝦由于生理條件不同,對同一種除草劑的敏感性各不相同。從總體來看,氯吡·甲磺隆與另外兩種除草劑差異顯著,在解剖的過程中蝦肝臟由黃色變?yōu)楹诤稚w粒狀,且少數(shù)肝臟出現(xiàn)腐爛狀,施藥后焦躁不安,浮出水面,表明甲磺隆對其生理影響較明顯,甲磺隆對消化酶的影響變化起伏也較大。氯吡·甲磺隆為抑制幾丁質(zhì)合成的特異性除草劑劑,有一定的滲透能力,藥效能持續(xù)一個月左右,一般認為蝦前腸和后腸的內(nèi)壁有幾丁質(zhì)層覆蓋,對藥劑只起溶解和微弱吸收作用,唯有中腸內(nèi)壁沒有幾丁質(zhì)層(且長度占消化道總長度的60%),而甲磺隆為抑制幾丁質(zhì)合成的特