木蝴蝶配方顆粒中木蝴蝶苷b和黃芩苷的含量測(cè)定

木蝴蝶配方顆粒中木蝴蝶苷b和黃芩苷的含量測(cè)定

木槿是紫穗科植物的木槿或偶氮（l.）和泰康的干燥成熟種子。它首先被記錄在云南南部的草本植物上，原名數(shù)千張紙?！侗静菥V目》最初被稱為木槿。它又甜又甜，具有潤(rùn)肺、咽喉、疏肝、胃的作用。木蝴蝶的化學(xué)成分以黃酮及其苷類為主,黃酮苷類主要有木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黃芩苷等活性成分。2010年版《中國(guó)藥典》一部收載了木蝴蝶苷B的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定,文獻(xiàn)中多以黃芩苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為指標(biāo)對(duì)木蝴蝶進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià);文獻(xiàn)報(bào)道采用HPLC法測(cè)定了木蝴蝶提取物中木蝴蝶苷A的質(zhì)量分?jǐn)?shù);文獻(xiàn)報(bào)道了HPLC法測(cè)定木蝴蝶藥材中黃芩素和白楊黃素的質(zhì)量分?jǐn)?shù);另有HPLC法測(cè)定木蝴蝶藥材中木蝴蝶苷A和木蝴蝶苷B質(zhì)量分?jǐn)?shù)的報(bào)道,而對(duì)木蝴蝶配方顆粒的研究則較少。木蝴蝶配方顆粒是木蝴蝶飲片經(jīng)水提取后制粒而成,供臨床調(diào)配組成復(fù)方湯劑使用,具有免煎易服、水沖即溶、攜帶方便、劑量準(zhǔn)確等特點(diǎn)。目前6家試點(diǎn)生產(chǎn)企業(yè)對(duì)木蝴蝶配方顆粒的質(zhì)量控制僅限于性狀和鑒別,并沒(méi)有建立其有效成分的含量控制方法。本文在參考文獻(xiàn)[13-14]的基礎(chǔ)上,采用HPLC法同時(shí)測(cè)定木蝴蝶配方顆粒中木蝴蝶苷B和黃芩苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù),為木蝴蝶配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供參考。1儀器和試劑盒1.1紫外分離器Agilent1260高效液相色譜儀(G1311C泵,G1314B紫外檢測(cè)器,Chemstation工作站);BS110S萬(wàn)分之一天平(德國(guó)賽多利斯公司);ABT220-5DM十萬(wàn)分之一電子天平(德國(guó)KERN公司);CQ-25-6超聲波清洗器(上海音波聲電科技公司)。1.2日性酰精、木1.木蝴蝶苷B(批號(hào):111915-201202)、黃芩苷(批號(hào):110715-201117,質(zhì)量分?jǐn)?shù)以91.7%計(jì)),均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;麥芽糊精(河南鑫源食品有限公司,批號(hào):F1207005);木蝴蝶配方顆粒(廣東一方制藥有限公司,批號(hào):1107143、1111055、1211151);甲醇、乙腈為色譜純,水為超純水,其他試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1流動(dòng)相及洗脫溶液色譜柱:VenusilASBC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:A為甲醇,B為乙腈,C為0.3%(體積分?jǐn)?shù),下同)H3PO4溶液,按表1程序進(jìn)行梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng):280nm,流速:0.8mL/min,柱溫:30℃。2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取木蝴蝶苷B對(duì)照品12.54mg,置200mL容量瓶中,加50%甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻即得每1mL含62.7μg的木蝴蝶苷B對(duì)照品溶液;精密稱取黃芩苷(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為91.7%)對(duì)照品11.74mg,置250mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻即得每1mL含43.06232μg的黃芩苷對(duì)照品溶液。2.3超聲減失取木蝴蝶配方顆粒適量,研細(xì),取約0.1g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%(體積分?jǐn)?shù),下同)甲醇50mL,密塞,稱定質(zhì)量,超聲處理(功率200W,頻率25kHz)30min,放冷,再稱定質(zhì)量,用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過(guò)。取續(xù)濾液,即得。2.4陰性樣品溶液的制備取麥芽糊精約0.1g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇50mL,同“2.3”項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。2.5色譜條件測(cè)定分別精密吸取木蝴蝶苷B對(duì)照品、黃芩苷對(duì)照品、陰性樣品溶液及木蝴蝶配方顆粒供試品溶液各10μL,分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,結(jié)果理論板數(shù)按木蝴蝶苷B峰計(jì)算應(yīng)不低于2000,陰性樣品無(wú)干擾,見(jiàn)圖1。2.6木蝶苷b和麻黃苷a回歸方程分別精密吸取木蝴蝶苷B、黃芩苷對(duì)照品溶液1、2、4、8、12、16、20μL,分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,記錄峰面積,以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行回歸處理。得木蝴蝶苷B和黃芩苷的回歸方程分別為Y=1.991×103X+5.875(r=0.9995);Y=3.331×103X+1.264(r=0.9997)。表明木蝴蝶苷B進(jìn)樣量在0.0627~1.2540μg、黃芩苷進(jìn)樣量在0.0431~0.8612μg呈良好線性關(guān)系。2.7測(cè)定木聚糖酸峰面積取同一批木蝴蝶配方顆粒供試品溶液(批號(hào):1211151),按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)測(cè)定6次,分別記錄木蝴蝶苷B和黃芩苷峰面積。結(jié)果木蝴蝶苷B峰面積的RSD值為0.16%,黃芩苷峰面積的RSD值為0.10%,表明儀器精密度較好。2.8測(cè)定木聚糖酸酯及其衍生物的含量取同一批號(hào)供試品溶液(批號(hào):1211151),分別于0、2、4、8、12、24h,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄木蝴蝶苷B和黃芩苷峰面積,木蝴蝶苷B峰面積的RSD值為0.24%,黃芩苷峰面積的RSD值為0.28%。表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.9下方法制備供試品溶液取同一批(批號(hào):1211151)木蝴蝶配方顆粒,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,平行操作6份,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果得到木蝴蝶苷B和黃芩苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為33.76、17.21mg/g,其RSD分別為1.31%、1.33%,表明方法重復(fù)性良好。2.10供試品溶液取已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)(木蝴蝶苷B質(zhì)量分?jǐn)?shù)33.76mg/g,黃芩苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)17.21mg/g)的木蝴蝶配方顆粒(批號(hào):1211151)0.05g,共6份,精密稱定,分別加入木蝴蝶苷B對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為62.7μg/mL)25mL、黃芩苷對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為43.06232μg/mL)20mL,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表2。2.11木聚糖復(fù)合制劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)定取3批(批號(hào)分別為1107143、1111055、1211151)木蝴蝶配方顆粒,分別按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,以外標(biāo)法計(jì)算制劑中木蝴蝶苷B的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為40.86、40.58、33.96mg/g,黃芩苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為15.09、14.99、17.19mg/g。3提取時(shí)間的選擇在供試品溶液制備方法考察時(shí),比較了超聲提取與加熱回流提取的效果,發(fā)現(xiàn)超聲提取效果優(yōu)于加熱回流提取;試驗(yàn)過(guò)程中比較了甲醇、70%甲醇、30%甲醇、水作為溶媒的提取效果,發(fā)現(xiàn)70%甲醇作為溶劑時(shí)所測(cè)得的木蝴蝶苷B和黃芩苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高,因此選擇70%甲醇作為提取溶媒;還考察了不同提取時(shí)間的影響,比較了20、30、50min的提取效果,確定提取時(shí)間30min為宜。試驗(yàn)對(duì)甲醇-H3PO4、甲醇-醋酸、乙腈-H3PO4、甲醇-乙腈-H3PO4等多個(gè)流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行了考察,結(jié)果表明,甲醇-乙腈-0.3%(體積分?jǐn)?shù))H3PO4溶液梯度洗脫能使相鄰成分的分離度達(dá)到要求,且色譜圖基線平穩(wěn)、色譜峰形良好。本試驗(yàn)采用HPLC法同時(shí)測(cè)定木蝴蝶配方顆粒中木蝴蝶苷B、黃芩苷質(zhì)量分?jǐn)?shù),方法簡(jiǎn)便快捷、重復(fù)性好,為木蝴蝶配方顆粒的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。結(jié)果顯示,木蝴蝶配方顆粒