化妝品中吡硫翁鋅等5種去屑劑的檢測(cè)方法

附件1:化妝品中吡硫翁鋅等5種去屑劑的檢測(cè)方法（征求意見(jiàn)稿）1范圍本方法規(guī)定了測(cè)定發(fā)用類化妝品中水楊酸、叱硫翁鋅、酮康唑、氯咪巴唑和叱羅克酮乙醇胺鹽5種去屑劑的高效液相色譜法。本方法適用于發(fā)用類化妝品中水楊酸、叱硫翁鋅、酮康唑、氯咪巴唑和叱羅克酮乙醇胺鹽5種去屑劑的含量測(cè)定。2方法提要水楊酸、叱硫翁鋅、酮康唑、氯咪巴唑和叱羅克酮乙醇胺鹽5種去屑劑在230nm處有紫外吸收，以乙腈+甲醇=95+5提取化妝品中水楊酸等5種去屑劑，用高效液相色譜分離，并根據(jù)保留時(shí)間和紫外光譜圖定性，峰面積定量。本方法中各種去屑劑的檢出限、定量下限及取0.5g樣品時(shí)的檢出濃度和最低定量濃度見(jiàn)表1。表1各種去屑劑的檢出限、定量下限、檢出濃度和最低定量濃度物質(zhì)名稱水楊酸毗硫翁鋅酮康唑氯咪巴唑毗羅克酮乙醇胺鹽檢出限（ng）312435定量下限（ng）1040151020檢出濃度（％）0.0060.020.0080.0060.01最低定量濃度（％）0.020.080.030.020.04注：以上數(shù)據(jù)是使用二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm時(shí)獲取的3試劑除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為一級(jí)實(shí)驗(yàn)用水。甲醇，色譜純。乙腈，色譜純。磷酸，相對(duì)密度=1.685,w（H3PO4）=85%,優(yōu)級(jí)純。磷酸二氫鉀。乙二胺四乙酸二鈉。去屑劑標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取適量去屑劑標(biāo)準(zhǔn)品(精確至0.0001g),加85mL左右的乙腈十甲醇=95+5混合溶液，超聲，待溶解完全后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用此混合溶液定容。配成如表2所示濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，再用這種混合溶液稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配成混合標(biāo)準(zhǔn)系列。表2各去屑劑的儲(chǔ)備溶液濃度及標(biāo)準(zhǔn)系列濃度物質(zhì)名稱水楊酸吡硫翁鋅酮康唑氯咪巴唑吡羅克酮乙醇胺鹽儲(chǔ)備溶液濃度/(mg/L)400200400400500402040405080408080100標(biāo)準(zhǔn)系列濃度/(mg/L)160801601602003201603203204004002004004005004儀器和設(shè)備高效液相色譜儀，具有二極管陣列檢測(cè)器，配色譜工作站。微量進(jìn)樣器或自動(dòng)進(jìn)樣裝置。pH計(jì)。超聲波清洗器。離心機(jī)。分析天平，感量0.0001g。分析天平，感量0.001g。5分析步驟樣品預(yù)處理稱取樣品約0.5g(精確至0.001g)于50mL具塞比色管中，加入乙腈+甲醇=95+5的混合溶液至刻度，振搖，超聲提取30min,渾濁溶液可取適量5000rpm離心5min。經(jīng)0.45m濾膜過(guò)濾，濾液作為待測(cè)樣液備用。測(cè)定色譜參考條件色譜柱：C18柱，150mmx4.6mm,5^m；流動(dòng)相：乙腈+甲醇+10mmol/L磷酸二氫鉀水溶液[添加乙二胺四乙酸二鈉至（Na2EDTA）=0.5mmol/L，用磷酸調(diào)節(jié)水溶液的pH至4.0]=50+10+40；流速：1.0mL/min；檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器，通用檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；水楊酸和吡羅克酮乙醇胺鹽的測(cè)定可采用300nm；吡硫翁鋅的測(cè)定可采用340nm。柱溫：室溫。校準(zhǔn)曲線的制備在設(shè)定色譜條件下，分別取去屑劑標(biāo)準(zhǔn)系列（3.6）5^L進(jìn)行高效液相色譜分析。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)系列質(zhì)量濃度和峰面積，繪制校準(zhǔn)曲線。樣品測(cè)定在設(shè)定色譜條件下，進(jìn)5|iL待測(cè)樣液進(jìn)行高效液相色譜分析。色譜圖檢出的物質(zhì)，經(jīng)與該物質(zhì)對(duì)照品的保留時(shí)間和紫外光譜圖比較確證后，根據(jù)峰面積，從校準(zhǔn)曲線上獲取相應(yīng)組分的質(zhì)量濃度。若待測(cè)溶液中去屑劑成分的質(zhì)量濃度超過(guò)了校準(zhǔn)曲線線性范圍的上限，需對(duì)待測(cè)溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋。6平行實(shí)驗(yàn)按以上步驟，做兩份樣品的平行測(cè)定。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不大于這兩次測(cè)定值的算術(shù)平均值的10%。7計(jì)算DxpxVW（去屑劑）= X10-4式中：w（去屑劑）——化妝品中去屑劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；p——從校準(zhǔn)曲線上查得的待測(cè)樣液中去屑劑的質(zhì)量濃度，mg/L；V——樣品定容體積，mL；m——樣品用量，g；D——稀釋倍數(shù)（不稀釋則取1）。8回收率和精密度經(jīng)多家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，5種去屑劑的加標(biāo)回收率在88.5%?109.4%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在

0.2%?3.8%之間。9干擾排除對(duì)于有干擾的樣品，測(cè)定水楊酸和吡羅克酮乙醇胺鹽時(shí)建議檢測(cè)波長(zhǎng)調(diào)整為300nm,定吡硫翁鋅時(shí)檢測(cè)波長(zhǎng)調(diào)整為340nm。10色譜圖000圖1不同檢測(cè)波長(zhǎng)下去屑劑標(biāo)準(zhǔn)色譜圖1：水楊酸；2：吡硫翁鋅；3：酮康唑；4：氯咪巴唑；5：吡羅克酮乙醇胺鹽化妝品中吡硫翁鋅等5種去屑劑的檢測(cè)方法起草說(shuō)明為進(jìn)一步完善化妝品中禁限用物質(zhì)檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)體系，加強(qiáng)化妝品中禁限用物質(zhì)的監(jiān)督管理，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局于2011年6月委托中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境與健康相關(guān)產(chǎn)品安全所開(kāi)展化妝品中去屑劑砒硫翁鋅檢測(cè)方法建立和驗(yàn)證工作，現(xiàn)就起草工作有關(guān)情況說(shuō)明如下：1起草的必要性中國(guó)健康教育協(xié)會(huì)頭皮健康研究中心的數(shù)據(jù)顯示：中國(guó)60%以上成年人的頭皮都不同程度地存在健康問(wèn)題！選擇去屑香波是人們解決這一問(wèn)題廣泛使用的方法。市場(chǎng)調(diào)研表明，水楊酸、叱硫翁鋅（簡(jiǎn)稱ZPT）、叱羅克酮乙醇胺鹽（商品名Octopirox）、氯米巴唑（商品名甘寶素）和酮康唑是市場(chǎng)上去屑香波及其他去屑產(chǎn)品的主要去屑劑，其中叱硫翁鋅是使用頻率最高的去屑劑。《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）規(guī)定作為去屑劑使用時(shí)，化妝品中水楊酸的最大允許濃度為2%（駐留類產(chǎn)品）和3%（淋洗類產(chǎn)品）；叱硫翁鋅為1.5%；叱羅克酮乙醇胺鹽為0.5%（駐留類產(chǎn)品）和1%（淋洗類產(chǎn)品）；氯米巴唑?yàn)?.5%；而酮康唑?yàn)榻贸煞??！痘瘖y品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）已收錄了水楊酸、叱羅克酮乙醇胺鹽、氯咪巴唑和酮康唑4種去屑劑的檢測(cè)方法，但尚無(wú)ZPT的檢測(cè)方法。因此在現(xiàn)有的《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）去屑劑檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上，建立化妝品中叱硫翁鋅去屑劑的檢測(cè)方法，對(duì)維護(hù)消費(fèi)者的健康和權(quán)益具有重要意義。2起草依據(jù)及文獻(xiàn)（1）《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）（2）化妝品及其原料中禁限用物質(zhì)檢測(cè)方法驗(yàn)證技術(shù)規(guī)范（3）肖子英，中國(guó)香波市場(chǎng)，日用化學(xué)品科學(xué)，2001,24（2）：11?13.（4）李彤，洗發(fā)類化妝品的刺激性研究，環(huán)境與健康雜志，2001,18（6）：364?366.（5）王萍，李潔，張曉鳴，反相高效液相色譜法測(cè)定香波中一種新型去屑止癢劑的含量，中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2003,37（3）：196?198.（6）鄔寧昆，羅云杰，甘寶素氣相色譜分析，寧波高等?？茖W(xué)校校報(bào)，2000,12（14）：24?26.（7）劉超，何學(xué)民，反相高效液相色譜法測(cè)定去屑香波中去屑止癢劑Octopirox的含量，日用化學(xué)工業(yè)，2001,2（1）：47?48.（8）ChaoL.,Simultaneousdeterminationoffouranti-dandruffagentsincludingoctopiroxinshampooproductsbyreversed-phaseliquidchromatography,InternationalJournalofCosmeticScience,2001,23：183?188.3起草原則本檢測(cè)方法兼具先進(jìn)性和可行性，在現(xiàn)有去屑劑檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上增加了使用頻率最高的吡硫翁鋅，使方法的實(shí)用性更強(qiáng)，且方法編寫(xiě)條理清晰，可操作性強(qiáng)，盡量采用目前化妝品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室普遍具備的分析技術(shù)，并選擇準(zhǔn)確、可行、便于實(shí)際操作的分析條件，保證檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。4起草過(guò)程國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局保健食品化妝品監(jiān)管司（以下稱?；荆┯?011年6月委托中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境與健康相關(guān)產(chǎn)品安全所開(kāi)展化妝品中去屑劑砒硫翁鋅檢測(cè)方法的建立和驗(yàn)證工作。我們通過(guò)查閱國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)資料，并在原有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，重點(diǎn)考察了現(xiàn)有的《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）中4種去屑劑的檢測(cè)方法和新增加的吡硫翁鋅檢測(cè)方法的兼容性。同時(shí)，鑒于吡硫翁鋅在大多數(shù)溶劑中溶解性較差，考察了多種可行的有機(jī)溶劑，最終選擇了適宜的溶劑，并根據(jù)吡硫翁鋅在該溶劑中的溶解度，確定了標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方法及方法的線性范圍。在干擾試驗(yàn)方面，通過(guò)紫外光譜圖初篩和選擇多個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)的方式，有效避免了可能存在的干擾。通過(guò)大量的樣品檢測(cè)和征求多家檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)、化妝品企業(yè)的意見(jiàn)，最終形成了《化妝品中吡硫翁鋅等5種去屑劑的檢測(cè)方法》研究報(bào)告。2012年1月9日，?；窘M織召開(kāi)專家論證會(huì)，認(rèn)為該方法基本滿足現(xiàn)階段化妝品中上述物質(zhì)的檢測(cè)要求，并提出了相關(guān)修改意見(jiàn)。根據(jù)專家論證會(huì)意見(jiàn)，項(xiàng)目承擔(dān)單位對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行了修改完善，并經(jīng)2012年2月29日?；舅緞?wù)會(huì)討論通過(guò)后形成此征求意見(jiàn)稿。5重點(diǎn)說(shuō)明的問(wèn)題（1）關(guān)于體例。本檢測(cè)方法的體例主要參照《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）的衛(wèi)生化學(xué)檢驗(yàn)方法的體例，便于化妝品檢驗(yàn)領(lǐng)域相關(guān)檢驗(yàn)人員的閱讀和實(shí)際操作。（2）關(guān)于檢測(cè)方法的建立和驗(yàn)證。《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）已收錄了水楊酸、吡羅克酮乙醇胺鹽、氯咪巴唑和酮康唑4種去屑劑的檢測(cè)方法，但尚無(wú)吡硫翁鋅的檢測(cè)方法。通過(guò)調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件，建立了同時(shí)測(cè)定水楊酸、吡硫翁鋅、吡羅克酮乙醇胺鹽、氯咪巴唑和酮康唑5種去屑劑的檢測(cè)方法。本項(xiàng)目中5種去屑劑的方法檢出限小于12ng，高、中、低不同濃度的加標(biāo)回收率在88.5%?109.4%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.2%?3.8%之間，在20mg/L?500mg/L的濃度范圍內(nèi)（吡硫翁鋅因溶解性問(wèn)題只做到200mg/L）線性關(guān)系良好（》0.998）,滿足分析檢測(cè)要求。三家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證結(jié)果表明，校準(zhǔn)曲線、檢出限、精密度、回收率等指標(biāo)符合檢測(cè)要求。（3）關(guān)于吡硫翁鋅的溶解性。吡硫翁鋅在乙腈中的溶解性有限，因此建議最高濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中吡硫翁鋅的濃度不應(yīng)超過(guò)200mg/L,同時(shí)為確保吡硫翁鋅的溶解，在配制過(guò)程中必須用大量的流動(dòng)相先溶解，再定容。（4）干擾試驗(yàn)。230nm為5種去屑劑的通用檢測(cè)波長(zhǎng)，但很多有機(jī)物在此檢測(cè)波長(zhǎng)下有吸收，為此對(duì)于吡硫翁鋅、水楊酸和吡羅克酮乙醇胺鹽可以增加第二個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)（分別是340nm、300nm和300nm）,以提高方法的抗干擾能力?；瘖y品中吡硫翁鋅等5種去屑劑的檢測(cè)方法編制說(shuō)明1任務(wù)來(lái)源受國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局保健食品化妝品監(jiān)管司委托，根據(jù)食藥監(jiān)許函［2011］260號(hào)《關(guān)于委托開(kāi)展化妝品中去屑劑叱硫翁鋅檢測(cè)方法研究的函》，開(kāi)展化妝品中叱硫翁鋅等5種去屑劑檢測(cè)方法研究，建立發(fā)用類化妝品中多種去屑劑的快速、準(zhǔn)確、靈敏的色譜檢測(cè)方法。2研究背景中國(guó)健康教育協(xié)會(huì)頭皮健康研究中心的數(shù)據(jù)顯示：中國(guó)60%以上成年人的頭皮都不同程度地存在健康問(wèn)題！選擇去屑香波是人們解決這一問(wèn)題廣泛使用的方法。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，目前去屑香波已占洗發(fā)水總量的35%以上［1］。去屑劑的種類和含量不僅決定去屑效果優(yōu)劣，而且對(duì)消費(fèi)者的健康也有一定的影響。研究表明，對(duì)比于普通香波，止癢型去屑香波的急性眼刺激實(shí)驗(yàn)為輕度刺激，多次皮膚刺激實(shí)驗(yàn)顯示止癢型去屑香波可使皮膚增厚，變硬2］。市場(chǎng)調(diào)研表明，水楊酸、叱硫翁鋅（簡(jiǎn)稱ZPT）、叱羅克酮乙醇胺鹽（商品名Octopirox）、氯米巴唑（商品名甘寶素）和酮康唑是市場(chǎng)上去屑香波及其他去屑產(chǎn)品的主要去屑劑，其中叱硫翁鋅是使用頻率最高的去屑劑?！痘瘖y品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）規(guī)定作為去屑劑使用時(shí)，化妝品中水楊酸的最大允許濃度為2%（駐留類產(chǎn)品）和3%（淋洗類產(chǎn)品）;叱硫翁鋅為1.5%；叱羅克酮乙醇胺鹽為0.5%（駐留類產(chǎn)品）和1%（淋洗類產(chǎn)品）；氯米巴唑?yàn)?.5%；而酮康唑?yàn)榻贸煞帧Ｒ虼私⒒瘖y品中去屑劑的檢測(cè)方法，對(duì)維護(hù)消費(fèi)者的健康和權(quán)益具有重要意義。3研究現(xiàn)狀目前對(duì)上述幾種去屑劑的測(cè)定主要采用高效液相色譜法（HPLC）。如美國(guó)藥典2003版本規(guī)定了用HPLC來(lái)測(cè)定水楊酸及酮康唑；王萍等采用反相高效液相色譜法測(cè)定了去屑香波中的甘寶素［3］；鄔寧昆等采用氣相色譜法測(cè)定了去屑香波中的甘寶素4］；劉超、何學(xué)民采用反相高效液相色譜法測(cè)定去屑香波中Octopirox的含量［5］；上海家化聯(lián)合股份有限公司采用高效液相色譜法測(cè)定了去屑香波中的水楊酸、酮康唑、甘寶素和Octopirox的含量［6］?！痘瘖y品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）也已收錄了水楊酸、叱羅克酮乙醇胺鹽、氯咪巴唑和酮康唑4種去屑劑的檢測(cè)方法，但尚無(wú)ZPT的檢測(cè)方法。本課題擬在現(xiàn)有的《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）去屑劑檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上，通過(guò)調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件，建立同時(shí)測(cè)定水楊酸、吡硫翁鋅、吡羅克酮乙醇胺鹽、氯咪巴唑和酮康唑5種去屑劑的檢測(cè)方法。4項(xiàng)目完成情況根據(jù)食藥監(jiān)許函[2011]260號(hào)《關(guān)于委托開(kāi)展化妝品中去屑劑吡硫翁鋅檢測(cè)方法研究的函》，并考慮方法的實(shí)用性，在現(xiàn)有的《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）去屑劑檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上，通過(guò)調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件，建立了同時(shí)測(cè)定水楊酸、吡硫翁鋅、吡羅克酮乙醇胺鹽、氯咪巴唑和酮康唑5種去屑劑的檢測(cè)方法。具體情況如下：（1）建立了發(fā)用類化妝品中5種去屑劑的高效液相色譜檢測(cè)方法。本項(xiàng)目中5種去屑劑的方法檢出限小于12ng，高、中、低不同濃度的加標(biāo)提取回收率在88.5%?109.4%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.2%?3.8%之間，在20mg/L?500mg/L的濃度范圍內(nèi)（吡硫翁鋅因溶解性問(wèn)題只做到200mg/L）線性關(guān)系良好（》0.998）,滿足分析檢測(cè)要求。（2）本方法負(fù)責(zé)起草單位為中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境與健康相關(guān)產(chǎn)品安全所，參與驗(yàn)證單位分別是上海家化聯(lián)合股份有限公司、廣東省疾病預(yù)防控制中心、上海市疾病預(yù)防控制中心。本方法主要起草人為朱英、楊艷偉、宋鈺、張衛(wèi)強(qiáng)，參加起草人為劉超、謝劍鋒、吳黎昌、張泓、徐偉東、杜達(dá)安。寶潔（中國(guó)）有限公司在方法的研究過(guò)程中提出了很多寶貴的建議。驗(yàn)證結(jié)果滿足《化妝品及其原料中禁限用物質(zhì)檢測(cè)方法驗(yàn)證技術(shù)規(guī)范》相關(guān)要求。5方法概述儀器Agilent公司Agilent1100高效液相色譜儀，超聲波清洗器。試齊IJ水楊酸（分析純），吡硫翁鋅（對(duì)照品，純度為6%,宏開(kāi)永盛精細(xì)化工有限公司），酮康唑（對(duì)照品，純度三98%,北京貝麗來(lái)日用化工廠），氯咪巴唑（標(biāo)準(zhǔn)品，百靈威化學(xué)公司），吡羅克酮乙醇胺鹽（對(duì)照品，純度為8%,宏開(kāi)永盛精細(xì)化工有限公司）。乙腈（色譜純），甲醇（色譜純），磷酸（優(yōu)級(jí)純），磷酸二氫鉀（分析純），乙二胺四乙酸二鈉（分析純）。5.3方法色譜條件色譜柱：ZORBAXC18柱，150mmx4.6mmI.D.,5|im；流動(dòng)相：乙月青+甲醇+水溶液(10mmol/L磷酸二氫鉀和0.5mmol/L乙二胺四乙酸二鈉，磷酸調(diào)pH=4.0)=50+10+40；檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)230nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃。校準(zhǔn)曲線的制備混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：稱取適量水楊酸、吡硫翁鋅、酮康唑、氯咪巴唑和吡羅克酮乙醇胺鹽5種去屑劑標(biāo)準(zhǔn)品，加乙腈+甲醇=95+5溶液85mL左右，超聲，待溶解完全后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用乙腈+甲醇=95+5定容。配成各組分質(zhì)量濃度分別為400mg/L、200mg/L、400mg/L、400mg/L、500mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1.00mL、2.00mL、4.00mL、8.00mL、10.0mL于10mL具塞刻度管中，用乙月青+甲醇=95+5稀釋至刻度，搖勻。此標(biāo)準(zhǔn)系列中各組分的質(zhì)量濃度見(jiàn)表1。表1去屑劑的儲(chǔ)備溶液濃度及標(biāo)準(zhǔn)系列濃度物質(zhì)名稱水楊酸吡硫翁鋅酮康唑氯咪巴唑吡羅克酮乙醇胺鹽儲(chǔ)備溶液濃度/(mg/L)400200400400500402040405080408080100標(biāo)準(zhǔn)系列濃度/(mg/L)16080160160200320160320320400400200400400500校準(zhǔn)曲線的繪制：在設(shè)定色譜條件下，分別取5|iL進(jìn)行HPLC分析，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)系列質(zhì)量濃度和峰面積繪制校準(zhǔn)曲線。圖1為不同檢測(cè)波長(zhǎng)下5種去屑劑標(biāo)準(zhǔn)的色譜圖。000圖1不同檢測(cè)波長(zhǎng)下去屑劑標(biāo)準(zhǔn)色譜圖1：水楊酸；2：吡硫翁鋅；3：酮康唑；4：氯咪巴唑；5：吡羅克酮乙醇胺鹽樣品預(yù)處理稱取樣品約0.5g（精確至0.001g）于50mL具塞刻度管中，加入乙腈+甲醇=95+5至刻度，振搖，超聲提取30min,必要時(shí)可高速離心。經(jīng)0.45m濾膜過(guò)濾，濾液作為待測(cè)樣液備用。在設(shè)定色譜條件下，取5〃L待測(cè)樣液進(jìn)行HPLC分析。計(jì)算根據(jù)峰面積，于校準(zhǔn)曲線得出去屑劑各組分的質(zhì)量濃度，樣品中去屑劑的最終濃度應(yīng)在此濃度上乘稀釋倍數(shù)。6方法研究吡硫翁鋅的溶解性吡硫翁鋅不溶于水，在其它許多常用溶劑中的溶解性亦較差，選擇多種溶劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明在乙腈、氯仿等溶劑中有一定的溶解性，在二甲基亞砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺溶劑中溶解度較大。二甲基亞砜極性很強(qiáng)，在高效液相色譜法中對(duì)色譜柱有損壞。若采用N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺做溶劑，在高效液相色譜測(cè)定過(guò)程中，產(chǎn)生很大的色譜峰，干擾分離測(cè)定。同時(shí)考慮其它4種組分的溶解性，選擇乙腈溶解吡硫翁鋅標(biāo)準(zhǔn)品。吡硫翁鋅在乙腈中部分溶解，因此也限制了其測(cè)定的線性范圍。流動(dòng)相考察了甲醇十乙腈、乙腈+水溶液（10mmol/L磷酸二氫鉀和0.5mmol/L乙二胺四乙酸二鈉，磷酸調(diào)pH=4.0）、乙腈+甲醇+水溶液（10mmol/L磷酸二氫鉀和0.5mmol/L乙二胺四乙酸二鈉，磷酸調(diào)pH=4.0）等多種流動(dòng)相中5種去屑劑的分離情況。結(jié)果表明，采用甲醇+乙腈為流動(dòng)相時(shí)，只有3種去屑劑出峰。選擇乙腈+水溶液（10mmol/L磷酸二氫鉀和0.5mmol/L乙二胺四乙酸二鈉，磷酸調(diào)pH=4.0）為流動(dòng)相時(shí)，其體積比不同，5種去屑劑的分離情況有很大差異。乙腈+水溶液（10mmol/L磷酸二氫鉀和0.5mmol/L乙二胺四乙酸二鈉，磷酸調(diào)pH=4.0）體積比為75+25時(shí)，在20min內(nèi)水楊酸、氯米巴唑、吡羅克酮乙醇胺鹽3種成分出峰，酮康唑、吡硫翁鋅未出峰；體積比為50+50時(shí)，20min內(nèi)水楊酸、酮康唑、氯米巴唑3種成分出峰，吡硫翁鋅和吡羅克酮乙醇胺鹽未出峰；體積比為40+60時(shí)，20min內(nèi)水楊酸、吡硫翁鋅、酮康唑3種成分出峰，氯米巴唑、吡羅克酮乙醇胺鹽未出峰。當(dāng)體積比為60+40時(shí)，10min內(nèi)5種物質(zhì)均出峰，但分離不完全。這主要是因?yàn)橐译鏄O性較大，幾種組分共同出峰。因此，在流動(dòng)相中加入一定比例的甲醇，減小流動(dòng)相的極性，從而實(shí)現(xiàn)了5種去屑劑完全分離。實(shí)驗(yàn)表明，流動(dòng)相為乙腈+甲醇+水溶液（10mmol/L磷酸二氫鉀和0.5mmol/L乙二胺四乙酸二鈉，磷酸調(diào)pH=4.0）=50+10+40時(shí)，5種去屑劑可完全分離。檢測(cè)波長(zhǎng)不同的化合物有不同的特征吸收波長(zhǎng)，圖2列出了5種去屑劑的自外吸收光譜圖。為同時(shí)測(cè)定5種去屑劑，綜合考慮選擇230nm為通用檢測(cè)波長(zhǎng)。對(duì)于有干擾的樣品，測(cè)定水楊酸和吡羅克酮乙醇胺鹽時(shí)建議檢測(cè)波長(zhǎng)調(diào)整為300nm，測(cè)定吡硫翁鋅時(shí)檢測(cè)波長(zhǎng)調(diào)整為340nm。

圖25種去屑劑的光譜圖線性范圍及檢出限在設(shè)定色譜條件下，測(cè)定不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液6次，其濃度與峰面積相關(guān)。檢出限以噪音的3倍計(jì)算。5種去屑劑成分在230nm處的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及方法檢出限見(jiàn)表2。表2去屑劑的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及方法檢出限物質(zhì)名稱回歸方程相關(guān)系數(shù)r線性范圍/(mg/L)檢出限/ng水楊酸C=0.0720A+1.730.998740?4001吡硫翁鋅C=0.1242A+15.10.998620?2001酮康唑C=0.1033A+1.520.999740?4002氯米巴唑 C=0.1335A+0.20 0.9997 40?400 2吡羅克酮乙醇胺鹽 C=0.2464A+16.7 0.9993 50?500 5精密度對(duì)不同品牌的化妝品樣品重復(fù)測(cè)定6次，水楊酸、吡硫翁鋅、酮康唑、氯米巴唑、吡羅克酮乙醇胺鹽5種去屑劑的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.2%、2.4%、0.7%、0.9%、3.8%，結(jié)果見(jiàn)表3。表3去屑劑的精密度試驗(yàn)結(jié)果物質(zhì)名稱測(cè)定值/%均值/%相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差/%水楊酸1.9471.9581.9391.9131.9111.9001.9281.2吡硫翁鋅0.9891.0350.9871.0471.0291.0191.0182.4酮康唑2.0782.0402.0692.0502.0612.0742.0620.7氯米巴唑0.2940.3010.2960.2950.2970.2950.2960.9吡羅克酮乙醇胺鹽0.2360.2630.2540.2480.2560.2570.2523.86.6準(zhǔn)確度測(cè)定7種添加不同去屑劑的化妝品樣品的加標(biāo)回收率，各組分的加標(biāo)回收率分別為水楊酸在97.8%?105.6%之間；吡硫翁鋅在92.7%?104.9%之間；酮康唑在96.0%?102.1%之間；氯米巴唑在98.7%?103.5%之間；吡羅克酮乙醇胺鹽在98.4%?103.1%之間。樣品測(cè)定利用本法，對(duì)于超市和藥店銷售的18種去屑香波和藥品進(jìn)行測(cè)定，有14種樣品含有5種去屑劑中的一種或幾種，檢出率為78%,圖2為典型樣品色譜圖。其中2種樣品含水楊酸，占11%；4種樣品含吡硫翁鋅，占22%；3種樣品含酮康唑（去屑藥品），占17%；5種樣品含氯米巴唑，占28%；1種樣品含吡羅克酮乙醇胺鹽，占6%。高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定去屑香波中的5種去屑劑，樣品前處理操作簡(jiǎn)便、回收率高、色譜峰重現(xiàn)性好