指狀青菌的分離培養(yǎng)方法

、真菌的分離培養(yǎng)方法（―）平板劃線分離法取適合指狀青霉的瓊脂培養(yǎng)基融化，冷至45°C，注入無菌平皿中，每皿15?20ml,制成平板待用。如面包、水果、蔬菜等含碳水化合物多的食物上真菌的生長比較明顯，可用接種針挑取孢子后直接作劃線分離。取要分離的材料（如田土、混雜的或污染的真菌培養(yǎng)物、真菌）少許，投入盛無菌水的試管內(nèi)，振搖，【或放在三角瓶中，放幾顆玻璃珠，震蕩搖晃20分鐘】使分離菌懸浮于水中。將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌并冷卻后，蘸取上述菌懸浮液，進行平板劃線（同細菌的劃線法）。劃線完畢，置溫箱中培養(yǎng)2?5d，待長出菌落后，釣取可疑單個菌落先作制片檢查，若只有一種所需要的真菌生長，即可進行釣菌純培養(yǎng)。如有雜菌可從單個菌落中釣少許菌制成懸液，再作劃線分離培養(yǎng)，有時需反復多次，才得純種。另外，也可在放大鏡的觀察下，用無菌鑷子夾取一段待分離的真菌菌絲，直接放在平板上作分離培養(yǎng)，可獲得該種真菌的純培養(yǎng)。（二）稀釋分離法取盛有無菌水的試管5支（每管9ml或10ml），分別標記1、2、3、4、5號。取樣品（如田土等1g，水果真菌孢子），投入1號管內(nèi)，振搖，使懸浮均勻。用1ml滅菌吸管，按無菌操作法，從1號管中吸取1ml懸浮液注入2號管中，并搖勻；同樣由2號管取1ml至3號管，依此類推，直至5號管。注意每稀釋一管應更換一支滅菌吸管。用2支無菌吸管分別由4號、5號試管中各取1ml懸液，并分別注入2個滅菌培養(yǎng)皿中，再加入融化后冷至45°C的瓊脂培養(yǎng)基約15ml,輕輕在桌面上搖轉，靜置，使冷凝成平板。然后倒置溫箱中培養(yǎng)，2?5d后，從中挑選單個菌落，并移植于斜面上。二.指狀青霉培養(yǎng)性狀觀察指狀青霉\真菌界\無性型真菌門\半知菌綱(FungiImperficti)\殼霉目(Sphaeropsidales)\杯霉科(Discellaceae)'指狀青霉屬'指狀青霉指狀青霉在固體培養(yǎng)基上的生長表現(xiàn)：菌落：將不同霉菌在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)2?5d，可見霉菌菌落呈絨毛狀、絮狀、蜘蛛網(wǎng)狀等。菌落大小依種而異，有的能擴展到整個固體培養(yǎng)基，有的有一定的局限性(直徑1?2mm或更小)。很多霉菌的孢子能產(chǎn)生色素，致使菌落表面、背面甚至培養(yǎng)基呈現(xiàn)不同的顏色，如黃色、綠色、青色、黑色、橙色等。識別特征：菌落絨狀，暗黃綠色,后變橄欖灰，有特殊的香味;侵害柑橘果實，引起綠霉病。生殖特征：分生孢子梗短，帚狀枝大而不規(guī)則;產(chǎn)孢瓶體在不同的高度上形成；分生孢子卵形至圓柱形。三.指狀青霉的形態(tài)觀察（一）真菌水浸片的制備及觀察常用美蘭染色液制備真菌水浸片來觀察真菌的菌體形態(tài)，并且活細胞能還原美藍為無色，故可區(qū)別死細胞、活細胞。將美蘭染色液一滴滴加在干凈的載玻片中央，如不染色則加蒸餾水一滴，用解剖針挑取培養(yǎng)3~5天的少量菌絲體放在載玻片的液滴中，將玻片置于解剖鏡下，細心地用解剖針將菌絲體分散成自然狀態(tài)，并加蓋干凈蓋玻片。為避免產(chǎn)生氣泡，應先將其一邊接觸液滴，再慢慢放下蓋片，然后置于顯微鏡載物臺上進行觀察。觀察時注意它們的菌絲有無隔膜、孢子囊柄與分