《淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在血液腫瘤中應(yīng)用的專家共識(shí)》（2023）要點(diǎn)

《淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在血液腫瘤中應(yīng)用的專家共識(shí)》《淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在血液腫瘤中應(yīng)用的專家共識(shí)》(2023)要點(diǎn)血液腫瘤是起源于造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，具有高度異質(zhì)性。2022版《造血與淋巴組織腫瘤WHO分類》根據(jù)腫瘤細(xì)胞的來源，將血液腫瘤主要分為髓系增殖和腫瘤、髓系/淋系腫瘤和其他譜系未定白血病、組織細(xì)胞/樹突狀細(xì)胞腫瘤、B淋巴細(xì)胞增殖性疾病和腫瘤、T淋巴細(xì)胞增殖性疾病和腫瘤、NK細(xì)胞腫瘤、淋巴組織間質(zhì)源性腫瘤、遺傳性腫瘤綜合征8個(gè)大類。血液腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸與其患者機(jī)體的免疫功能,尤其是細(xì)胞免疫功能摘要：血液腫瘤是起源于造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,環(huán)境因素、遺傳因素、免疫因素等都被認(rèn)為與疾病的發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)。淋巴細(xì)胞亞群中的T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷淋巴細(xì)胞及淋巴細(xì)胞功能亞群調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是細(xì)胞免疫檢測(cè)的常用指標(biāo)，廣泛用于血液腫瘤患者的免疫狀態(tài)評(píng)估、疾病復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)及治療指導(dǎo)等。為了更加深刻認(rèn)識(shí)淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在血液腫瘤中的作用，加強(qiáng)其檢測(cè)過程的質(zhì)量管理,促進(jìn)其規(guī)范地應(yīng)用于臨床，由中國(guó)醫(yī)藥質(zhì)量管理協(xié)會(huì)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量管理專業(yè)委員會(huì)牽頭組織國(guó)內(nèi)血液腫瘤和臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域多位專家,制定了該專家共識(shí)。該共識(shí)介紹了淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)方法，歸納總結(jié)了其對(duì)血液月中瘤篩查、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移預(yù)警及預(yù)后評(píng)估、合并感染風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警、造血干細(xì)胞移植后免疫重建監(jiān)測(cè)與移植物抗宿主病預(yù)防、嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫治療后監(jiān)測(cè)、用藥指導(dǎo)與療效監(jiān)測(cè)等方面的應(yīng)用，并對(duì)血液腫瘤患者的監(jiān)測(cè)方案與隨訪時(shí)機(jī)選擇做出了推薦。密切相關(guān)。隨著疾病的發(fā)生發(fā)展，密切相關(guān)。隨著疾病的發(fā)生發(fā)展，免疫微環(huán)境也隨之發(fā)生相應(yīng)變化，進(jìn)而引起外周血中各種免疫細(xì)胞的改變。淋巴細(xì)胞是構(gòu)成人體免疫系統(tǒng)的主要細(xì)胞，根據(jù)標(biāo)記物和功能的不同，可以分為許多群體。臨床上常用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)對(duì)外周血中的不同群體的淋巴細(xì)胞進(jìn)行鑒別和計(jì)數(shù)，包括CD3+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD4+輔助/誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞、CD3+CD8+抑制/殺傷T淋巴細(xì)胞、CD3-CD19+B淋巴細(xì)胞、CD3(CD16+CD56)+NK淋巴細(xì)胞,簡(jiǎn)稱為TBNK,以及CD3+CD4+CD25+CD127low/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)等。本共識(shí)中將TBNK和Treg統(tǒng)稱為淋巴細(xì)胞亞群。血液腫瘤作為造血干細(xì)胞異常的惡性腫瘤，疾病的多種因素會(huì)影響免疫細(xì)胞的產(chǎn)生、增殖及分化,使外周血的淋巴細(xì)胞數(shù)量與功能產(chǎn)生異常，導(dǎo)致免疫功能失調(diào)，因此對(duì)血液腫瘤患者進(jìn)行規(guī)范的淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)十分必要。正常情況下，免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞有監(jiān)視和清除作用，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。免疫功能異常可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞免疫和體液免疫失調(diào)，從而為腫瘤的發(fā)生和發(fā)展提供條件在病原體感染時(shí)免疫系統(tǒng)也會(huì)受到影響，當(dāng)免疫功能下降時(shí)腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)增加。文獻(xiàn)報(bào)道急性白血病、B細(xì)胞淋巴瘤等患者常見夕卜周血T細(xì)胞數(shù)量及CD4+/CD8+比值下降,并伴免疫功能紊亂。Treg的主要功能是抑制自身免疫應(yīng)答，維持免疫平衡,避免過度的炎癥反應(yīng)和自身1淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在血液腫瘤中的意義1.1血液腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、預(yù)后與免疫功能的關(guān)系免疫性疾病的發(fā)生,在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要的負(fù)向調(diào)控作用。在血液腫瘤中,Treg免疫性疾病的發(fā)生,在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要的負(fù)向調(diào)控作用。在血液腫瘤中,Treg一方面可以通過抑制對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)來促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)另一方面也可通過抑制炎癥和防止可能導(dǎo)致腫瘤發(fā)展的自身免疫反應(yīng)而發(fā)揮保護(hù)作用。研究發(fā)現(xiàn)，多種類型的血液腫瘤患者Treg數(shù)量呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸的發(fā)生。此外，一些淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素6、腫瘤壞死因子避，在血液腫瘤患者中異常表達(dá),進(jìn)一步說明了機(jī)體免疫功能異常和血液腫瘤之間關(guān)系密切。近年來,一些新型的免疫治療策略也在血液腫瘤的診療中發(fā)揮日益重要的作用，例如采用免疫檢查點(diǎn)抑制劑、嵌合抗原受體T細(xì)胞(CAR-T)治療、雙重特異性抗體治療等,這些治療手段主要是通過增強(qiáng)免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，來達(dá)到治療目的。淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在血液腫瘤中的臨床應(yīng)用主要包括以下方面。1.2淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在血液腫瘤中的臨床意義(1)部分血液腫瘤的篩查。血液腫瘤包括多種類型,其中一些類型可表現(xiàn)為特定淋巴細(xì)胞亞群的增殖和分化異常，通過淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)可以對(duì)這些類型的血液腫瘤進(jìn)行初篩。如急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)、慢性淋巴細(xì)胞增殖性疾病(CLPD)等。⑵腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移預(yù)警及預(yù)后評(píng)估。Treg在多種血液腫瘤中比例增加，可以通過抑制免疫細(xì)胞殺傷作用來幫助腫瘤細(xì)胞逃脫免疫監(jiān)視，并且與惡性(5)CAR-T治療患者的規(guī)范化管理和評(píng)估。(5)CAR-T治療患者的規(guī)范化管理和評(píng)估。(6)靶向藥物、免疫抑制劑和化療藥物的治療指導(dǎo)，療效監(jiān)測(cè)2.1夕卜周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)的主要方法TBNK檢測(cè)推薦的單抗為CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD16、CD56,Treg檢測(cè)的單抗為CD4、CD25、CD3、CD127。CD3T細(xì)胞標(biāo)記為CD3+,CD4+T細(xì)胞標(biāo)記為CD3+CD4+,CD8+T細(xì)胞標(biāo)記CD3+CD8+,B細(xì)胞標(biāo)記為CD3-CD19+,NK細(xì)胞標(biāo)記為CD3-(CD16+CD56)+Jreg細(xì)胞的標(biāo)記CD3+CD4+CD25+FoxP3+或CD3+CD4+CD25+CD127low/-。T細(xì)胞表面CD127的低表達(dá)與M胞質(zhì)內(nèi)FoxP3的高表達(dá)具有良好的相關(guān)性且以CD127為標(biāo)記的檢測(cè)方法2淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)的主要方法和結(jié)果報(bào)告(3)合并感染風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警。(4)造血干細(xì)胞移植治療患者的免疫重建評(píng)估與移植物抗宿主病(GVHD)預(yù)防。Treg可以作為急性和慢性GVHD的生物標(biāo)志物。程度、轉(zhuǎn)移傾向、復(fù)發(fā)率等預(yù)后指標(biāo)密切相關(guān)。明顯優(yōu)于以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)FoxP3為標(biāo)記的檢測(cè)方法，因此也可以使用CD1明顯優(yōu)于以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)FoxP3為標(biāo)記的檢測(cè)方法，因此也可以使用CD127替代FoxP3進(jìn)行Treg細(xì)胞的分析。2.2夕卜周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)的結(jié)果報(bào)告通常應(yīng)報(bào)告以下內(nèi)容：2.2.2外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)報(bào)告的審核和發(fā)布221外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)的參考區(qū)間3淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在血液腫瘤患者中的應(yīng)用3.1血液腫瘤的篩查當(dāng)出現(xiàn)以下情況：(1)B或NK淋巴細(xì)胞顯著增高(2)CD3+CD4+CD8+T淋巴細(xì)胞CD3+CD4-CD8-T淋巴細(xì)胞明顯增高(3)CD4+/CD8+比值大于101或小于110(4)CD3+%+CD19+%+(CD16+CD56)+%明顯大于或小于(100±5)%、CD4+%+CD8+%明顯大于或小于CD3+%(變化范圍為5%~10%),在排除標(biāo)本、儀器、設(shè)門、試劑及反應(yīng)性改變等因素后，需要考慮標(biāo)本中存在異常淋巴細(xì)胞，并結(jié)合臨床進(jìn)行血液腫瘤的篩查。血液腫瘤常見的淋巴細(xì)胞亞群改變見圖1,血液腫瘤淋巴細(xì)胞亞群篩查與隨訪路徑。3.2血液腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警及預(yù)后評(píng)估當(dāng)血液腫瘤患者外周血中出現(xiàn)CD4+T和CD8+T細(xì)胞減少,CD4+/CD8+3.3血液腫瘤合并感染風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警比值降低，3.3血液腫瘤合并感染風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警比值降低，而Treg細(xì)胞明顯增加時(shí)，提示腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)增加CD3+T、CD4+T、CD8+T細(xì)胞的數(shù)量和比例與患者的完全緩解(CR)率、無復(fù)發(fā)生存期(RFS)和總生存期(OS)呈正相關(guān)，而Treg的數(shù)量和比例與CR率、RFS和OS呈負(fù)相關(guān)。在急性髓系白血病(AML)患者中,NK細(xì)胞數(shù)量和比例與CR率、RFS、OS呈正相關(guān),NK細(xì)胞數(shù)量減少的AM和多發(fā)性骨髓瘤(MM)可能有更差的預(yù)后。感染是血液腫瘤患者的常見并發(fā)癥,CD4+T淋巴細(xì)胞在免疫防御中發(fā)揮關(guān)鍵作用。當(dāng)CD4+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)＜500個(gè)/|JL時(shí)，血液腫瘤患者機(jī)會(huì)性感染風(fēng)險(xiǎn)會(huì)大幅升高。CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量低下的淋巴瘤患者,化療后感染風(fēng)險(xiǎn)明顯升高。初診時(shí)Treg細(xì)胞比例升高的血液腫瘤患者,其住院期間感染率明顯增加。3.4造血干細(xì)胞移植后免疫重建監(jiān)測(cè)及GVHD預(yù)防3.4.1移植患者免疫重建監(jiān)測(cè)3.4.2移植患者GVHD預(yù)防3.5CAR-T治療患者的規(guī)范化管理和評(píng)估3.5.1CAR-T細(xì)胞增殖監(jiān)測(cè)3.5.2淋巴細(xì)胞亞群監(jiān)測(cè)3.5.2淋巴細(xì)胞亞群監(jiān)測(cè)3.6.1CD20單抗CD20單抗可靶向治療B淋巴細(xì)胞型非霍奇金淋巴瘤，單次輸注CD20單抗后3d內(nèi)，患者外周血B淋巴細(xì)胞可減少90%,多數(shù)患者這種劑量依賴性B細(xì)胞減少狀態(tài)將持續(xù)2~3個(gè)月，一般6個(gè)月后患者外周血B淋巴細(xì)胞恢復(fù)。3.6血液腫瘤患者藥物治療指導(dǎo)3.6.2免疫調(diào)節(jié)藥物（1）對(duì)于免疫功能嚴(yán)重受損的患者（經(jīng)過放化療治療或合并HIV感染等患者在治療過程中發(fā)生嚴(yán)重感染的頻率顯著增加。對(duì)于移植及個(gè)體化免疫治療患者，當(dāng)CD4+/CD8+細(xì)胞比值出現(xiàn)小于0.2時(shí),建議停用免疫抑制藥，而CD4+/CD8+細(xì)胞比值小于0.5時(shí)需謹(jǐn)慎用藥，并密切關(guān)注患者免疫功能狀態(tài)及感染情況。（3）對(duì)于治療期間合并感染的患者,NK細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值及比例較治療前明顯升高，提示可能伴有病毒感染，可為抗病毒藥使用提供參考。3.7.1建立基線，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)3.7.2初診時(shí)患者的淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)3.7動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)與隨訪時(shí)機(jī)的選擇4結(jié)語3.74結(jié)語3.7.3放化療、免疫治療及靶向治療患者的淋巴細(xì)胞亞群監(jiān)測(cè)與隨訪3.7.4造血干細(xì)胞移植患者的淋巴細(xì)胞亞群監(jiān)測(cè)與隨訪3.7.5CAR-T治療患者的淋巴細(xì)胞亞群監(jiān)測(cè)與隨訪機(jī)體免疫功能受年齡、藥物、感染、營(yíng)養(yǎng)、生理等眾多因素的影響,存在較大的個(gè)體差異。機(jī)體免疫功能是動(dòng)態(tài)變化的，同一患者的不同疾病狀態(tài)下淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果也可能出現(xiàn)較大的波動(dòng)。因此，淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在參考范圍的建立、報(bào)告結(jié)果解讀等方面依然存在挑戰(zhàn)。隨著流式細(xì)胞術(shù)的廣泛應(yīng)用，用于免疫功能評(píng)價(jià)的淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在臨床已廣泛開展，通過TBNK、Treg這些指標(biāo)，可以評(píng)估血液腫瘤患者免疫狀況,為疾病診斷、分型，治療方案的選擇、化療后感染預(yù)防，疾病轉(zhuǎn)歸預(yù)測(cè)等提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，以及為血液腫瘤患者的個(gè)性化治療提供參考。針對(duì)