結核分枝桿菌

一、生物學性狀形態(tài)與染色結核分枝桿菌為細長略帶彎曲的桿菌，大小1～4X0.4m。牛分枝桿菌則比較粗短。分枝桿菌屬的細菌細胞壁脂質含量較高，約占干重的60%，特別是有大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，可影響染料的穿入。1精選課件分群（Mitchson假說）A菌群：快速繁殖，巨噬細胞外和肺空洞干酪液化部分；B菌群：半靜止狀態(tài)，巨噬細胞內和空洞璧壞死組織中；C菌群：半靜止狀態(tài)，可突然間歇生長。D菌群：休眠狀態(tài)，不繁殖，數量很少。2精選課件染色分枝桿菌一般用齊尼（Ziehl-Neelsen)抗酸染色法，以5%石炭酸復紅加溫染色后可以染上，但用3%鹽酸乙醇不易脫色。若再加用美藍復染，則分枝桿菌呈紅色，而其他細菌和背景中的物質為藍色。3精選課件培養(yǎng)特性專性需氧。最適溫度為37℃，低于30℃不生長。結核分枝桿菌細胞壁的脂質含量較高，影響營養(yǎng)物質的吸收，故生長緩慢。在一般培養(yǎng)基中每分裂1代需時18～24h，營養(yǎng)豐富時只需5h。4精選課件常用的有羅氏（Lowenstein-Jensen）固體培養(yǎng)基，內含蛋黃、甘油、馬鈴薯、無機鹽和孔雀綠等?？兹妇G可抑制雜菌生長，便于分離和長期培養(yǎng)。蛋黃含脂質生長因子，能刺激生長。根據接種菌多少，一般2～4周可見菌落生長。菌落呈顆粒、結節(jié)或花菜狀，乳白色或米黃色，不透明。5精選課件抵抗力結核分枝桿菌細胞壁中含有脂質，故對乙醇敏感，在70%乙醇中2min死亡。此外，脂質可防止菌體水分丟失，故對干燥的抵抗力特別強。粘附在塵埃上保持傳染性8～10d，在干燥痰內可存活6～8個月。結核分枝桿菌對濕熱敏感，在液體中加熱62～63℃15min或煮沸即被殺死。結核分枝桿菌對紫外線敏感。直接日光照射數小時可被殺死，可用于結核患者衣服、書籍等的消毒。6精選課件耐藥性在固體培養(yǎng)基中對常用的含異煙肼1mg、鏈霉素10mg、利福平50mg能生長的結核分枝桿菌為耐藥菌。耐藥菌株毒力有所減弱。異煙肼可影響細胞壁中分枝菌酸的合成，誘導結核分枝桿菌成為L型,此可能是耐異煙肼的一種原因。藥物敏感試驗表明對異煙肼耐藥，而對利福平和鏈霉素大多仍敏感。7精選課件二、致病性結核分枝桿菌不產生內、外毒素。其致病性可能與細菌在組織細胞內大量繁殖引起的炎癥，菌體成分和代謝物質的毒性以及機體對菌體成分產生的免疫損傷有關。致病物質與莢膜、脂質和蛋白質有關。8精選課件莢膜莢膜的主要成分為多糖，部分脂質和蛋白質。其對結核分枝桿菌的作用有：①莢膜能與吞噬細胞表面的補體受體3結合，有助于結核分枝桿菌在宿主細胞上的粘附與入侵；②莢膜中有多種酶可降解宿主組織中的大分子物質，供入侵的結核分枝桿菌繁殖所需的營養(yǎng)；③莢膜能防止宿主的有害物質進入結核分枝桿菌，甚至如小分子NaOH也不易進入。9精選課件故結核標本用4%NaOH消化時，一般細菌很快殺死，但結核分枝桿菌可耐受數十分鐘。結核分枝桿菌入侵后莢膜還可抑制吞噬體與溶酶體的融合。10精選課件脂質據實驗研究細菌毒力可能與其所含復雜的脂質成分有關，特別是糖脂更為重要。①索狀因子：是分枝菌酸和海藻糖結合的一種糖脂。能使細菌在液體培養(yǎng)基中呈蜿蜒索狀排列。此因子與結核分枝桿菌毒力密切相關。它能破壞細胞線粒體膜，影響細胞呼吸，抑制白細胞游走和引起慢性肉芽腫。若將其從細菌中提出，則細菌喪失毒力。②磷脂：能促使單核細胞增生，并使炎癥灶中的巨噬細胞轉變?yōu)轭惿掀ぜ毎?，從而形成結核結節(jié)。11精選課件③硫酸腦苷脂：可抑制吞噬細胞中吞噬體與溶酶體的結合，使結核分枝桿菌能在吞噬細胞中長期存活。④蠟質D:是一種肽糖脂和分枝菌酸的復合物，可從有毒株或卡介苗中用甲醇提出，具有佐劑作用，可激發(fā)機體產生遲發(fā)型超敏反應。12精選課件蛋白質有抗原性，和蠟質D結合后能使機體發(fā)生超敏反應，引起組織壞死和全身中毒癥狀，并在形成結核結節(jié)中發(fā)揮一定作用。13精選課件免疫性免疫機制結核分枝桿菌是胞內感染菌，其免疫主要是以T細胞為主的細胞免疫。T細胞不能直接和胞內菌作用，必須先與感染細胞反應，導致細胞崩潰，釋放出結核分枝桿菌。機體對結核分枝桿菌雖能產生抗體，但抗體只能與釋出的細菌接觸起輔助作用。14精選課件結核分枝桿菌侵入呼吸道后，由于肺泡中80%～90%是巨噬細胞，10%是淋巴細胞（T細胞占多數）；原肺泡中未活化的巨噬細胞抗菌活性弱，不能防止所吞噬的結核分枝桿菌生長，反可將結核分枝桿菌帶到他處。但可遞呈抗原，使周圍T淋巴細胞致敏。15精選課件致敏淋巴細胞可產生多種淋巴因子，如IL-2、IL-6、INF-α，他們與TNF-α的共同作用可殺死病灶中的結核分枝桿菌。淋巴因子中INF-α是主要的，有多種細胞能產生INF-α，浸潤的先后為NK、Ts/Th和CD4+、CD8+α/βT細胞。上述細胞有的可直接殺傷靶細胞，有的產生淋巴因子激活巨噬細胞，使吞噬作用加強引起呼吸暴發(fā)，導致活性氧中介物和活性氮中介物的產生而將病菌殺死。

16精選課件結核的免疫屬于感染免疫(infectionimmunity)，又稱有菌免疫，即只有當結核分枝桿菌或其組分存在體內時才有免疫力。一旦體內的結核分枝桿菌或其組分全部消失，免疫也隨之不存在。

隨著機體對結核分枝桿菌產生保護作用的同時，也可以看到有遲發(fā)型超敏反應的產生，二者均為T細胞介導。17精選課件近來研究表明結核分枝桿菌誘導機體產生免疫和超敏反應的物質不同。超敏反應主要由結核菌素蛋白和蠟質Ｄ共同引起，而免疫則由結核分枝桿菌核糖體RNA引起。二種不同抗原成分激活不同的T細胞亞群釋放出不同的淋巴因子所致。

18精選課件結核菌素試驗結核菌素試驗是應用結核菌素進行皮膚試驗來測定機體對結核分枝桿菌是否能引起超敏反應的一種試驗。

1.結核菌素試劑：舊結核菌素：系將結核分枝桿菌接種于甘油肉湯培養(yǎng)基，培養(yǎng)4～8周后加熱濃縮過濾制成。稀釋2000倍，每0.1ml含5u。目前都用純蛋白衍化物，PPD有二種：人結核分枝桿菌制成的PPD-C和卡介苗制成的BCG-PPD。每0.1ml含5u。

19精選課件2.試驗方法與意義：常規(guī)試驗分別取2種PPD5個單位注射兩前臂皮內，48～72h后:硬結≤4mm者為陰性；5-9mm為弱陽性；10-19mm為陽性；≥20mm或雖＜20mm，但局部出現水泡和淋巴管炎，為強陽性。若PPD-C側紅腫大于BCG-PPD側為感染。反之，BCG-PPD側大于PPD-C側，可能系卡介苗接種所致。20精選課件陰性反應表明未感染過結核分枝桿菌，但應考慮以下情況：①感染初期，因結核分枝桿菌感染后需4周以上才能出現超敏反應②老年人③嚴重結核患者或患有其他傳染病，如麻疹，水痘導致的細胞免疫低下④獲得性細胞免疫低下，如艾滋病或腫瘤等用過免疫抑制劑者。21精選課件涂片法抗酸桿菌（－）：連續(xù)觀察300視野未發(fā)現；抗酸桿菌（±）：連續(xù)觀察300視野發(fā)現1-3條;抗酸桿菌（1＋）：1-9條/100視野抗酸桿菌（2＋）：1-9條/10視野抗酸桿菌（3＋）：1-9條/1視野抗酸桿菌（4＋）：≥10條/1視野22精選課件濃縮集菌先集菌后檢查，可提高檢出率。培養(yǎng)與動物試驗也必須經集菌過程以除去雜菌。腦脊液和胸、腹水無雜菌，可直接離心沉淀集菌。痰、支氣管灌洗液、尿、糞等污染標本需經4%NaOH（痰和堿的比例為1:4,尿、支氣管灌洗液和堿的比例為1:1）處理15min，時間過長易使結核分枝桿菌L型與非結核分枝桿菌死亡。尿標本先加5%鞣酸、5%乙酸各0.5ml于錐形量筒內靜置，取沉淀物處理。處理后的材料再離心沉淀。取沉淀物作涂片染色鏡檢。若需進一步作培養(yǎng)或動物接種，應先用酸中和后再離心沉淀。

23精選課件培養(yǎng)羅氏培養(yǎng)基，一般需2-6周，陽性結果隨時報告，8周無菌生長，報為陰性結果，陽性結果按生長菌落占斜面1/4,1/2,3/4和全部劃分1+到4+24精選課件快速診斷一般涂片檢查菌數需5x103～4/ml,培養(yǎng)需1x102/ml,標本中菌數少于此數時不易獲得陽性結果，且培養(yǎng)需時較長。目前已將多聚酶鏈反應（PCR）擴增技術應用于結核分枝桿菌DNA鑒定，每ml中只需含幾個細菌即可獲得陽性，且1-2d得出結果。操作中需注意實驗器材的污染問題，以免出現假陽性。細菌L型由于缺壁并有代償性細胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶不能使細胞膜破裂釋出DNA，以致造成PCR假陰性。用組織磨碎器充分研磨使細胞破裂