細胞工程6-10章答案

第六章原生質體培養(yǎng)與誘變一、名詞解釋原生質體:除去植物細胞壁的裸露細胞，稱為原生質體。二、問答題原生質體具有哪些特點？答：（1）無細胞壁障礙，能攝取DNA、質粒、病毒、細菌、細胞器等外源物質,是植物細胞工程進行遺傳操作、基因轉移的良好材料。（2） 具有全能性，可再生細胞壁并再生成完整植株；（3） 原生質體適合進行融合形成雜種細胞。能克服不同種細胞的不親和障礙，培育新品種。試述原生質體的分離純化的方法。答：分離方法：機械分離法，酶解分離法純化方法：A、過濾-離心法采用40?100Mm的網(wǎng)篩過濾，在適當溶劑內低速離心使原生質體沉于離心管底部，反復3?4次。B、 漂浮法具有一定滲透壓（25%蔗糖）的溶液中漂浮，然后用吸管收集。C、 沉降法和漂浮法結合將原生質體酶解液低速離心，將沉降得到的原生質體重新懸浮于純化液（含21%蔗糖）中，吸收表面的原生質體，重新懸浮，洗滌，重復兩次以上。4.試述原生質體鑒定與活力測定方法。答：原生質體鑒定：低滲爆破法：原生質體低滲溶液顯微鏡觀察：無形、有形熒光染色法原生質體的活力測定：1）染色法：?用0.1%酚藏花紅染料法一一無色是活的,紅色是死的。?伊文思蘭染色法 無色是活的；藍色是死的。?用熒光素雙醋酸酯（FDA）染色法——在熒光顯微鏡下觀察到帶有熒光的是有活力的原生質體。2）胞質環(huán)流法：顯微鏡下觀察：有胞質環(huán)流的是有活力的。3）滲透壓變化：放入低滲透壓的溶液中，體積會膨脹。放入高滲透壓的溶液中體積會縮小，這樣的是有活力的原生質體，體積不變的死亡的。4）氧電極法：有活力的在光照下放出氧氣，在無光照下呼吸而耗氧。原生質體再生為完整植株的過程。細胞壁再生：-體積膨大，葉綠體重新排列，新的細胞壁開始合成，細胞由球形變成橢圓形°細胞分裂形成細胞團：-一般在培養(yǎng)2-3天后細胞質增加，細胞器增殖，DNA、蛋白質等合成增加，細胞分裂，形成小的細胞團，發(fā)育成愈傷組織或胚狀體。器官形成植株再生：-從愈傷組織誘導發(fā)生答-胚狀體發(fā)育再結合書答。4，如何獲得原生體，并通過原生質體培養(yǎng)獲得完整的再生植株？3..試述原生質體變異的途徑。答：自發(fā)突變原因：染色體結構變異或數(shù)目變異基因突變原生質體誘變結合書第七章細胞融合與體細胞雜交一、名詞解釋細胞融合：又稱細胞雜交（cellhybridizaion）：用人工的方法使兩個或兩個以上的細胞融合成一個細胞的技術。體細胞雜交：將不同來源的體細胞融合并使之分化再生、形成新品種的一種技術。同核體：基因型相同的細胞融合成的融合細胞。異核體：來自不同基因型的融合細胞。對稱融合：即兩個完整的細胞間的融合。不對稱融合：利用物理或化學方法使某親本的核或細胞質失活后再與另外一個完整的細胞進行融合。合核細胞：含有多個核的異核細胞合并后形成的單核細胞。嵌合細胞：發(fā)生了細胞質融合的融合細胞。嵌合植株二、問答題簡述細胞融合的步驟。（生物法、物理法）答：細胞融合的步驟：①兩原生質體或細胞互相靠近；質膜融合形成細胞橋；③胞質滲透；④細胞核融合。試述細胞融合的方法及各自的特點。答：①生物法 特點：要提前大量培養(yǎng)病毒，滅活后才能作為融合劑使用，操作繁瑣，滅活不充分的話，病毒還可能感染操作者與親本細胞。②化學法特點：融合成本低，不需特殊設備，產(chǎn)生的異核率較高，融合過程不受物種限制。但融合過程繁瑣，PEG可能對細胞有毒害。物理法——電融合法特點：融合效率高、操作簡便、易于控制、重復性強、對細胞傷害性小。試述化學法進行細胞融合常采用的誘導劑。答：NaN03誘導融合 高pH值的高Ca2+誘導融合聚乙二醇（PEG）誘導融合 高pH值、高Ca2+的PEG誘導融合試述PEG促使細胞融合的可能機制。答：PEG的作用機理：由于PEG分子具有輕微的負極性，故可以與具有正極性基團的水、蛋白質和碳水化合物等形成H鍵，從而在在質膜之間形成分子橋，其結果是使細胞質膜發(fā)生粘連進而促使質膜的融合；另外，PEG能增加類脂膜的流動性，也使細胞的核、細胞器發(fā)生融合成為可能。試述體細胞雜交的意義（作用）及過程。答：①可以避開生殖細胞的受精過程，從而在親緣關系較遠的物種間實現(xiàn)基因轉移，創(chuàng)造出自然界中沒有的新物種。②創(chuàng)造細胞質雜種。在體細胞雜交中雙親的細胞質都有一定的貢獻。有可能通過細胞融合獲得細胞核、葉綠體、線粒體基因組的不同組合。體細胞雜交的過程（步驟）：?親本選擇；?原生質體制備；原生質體融合；融合細胞（雜種細胞）篩選；融合細胞（雜種細胞）的培養(yǎng)由愈傷組織再生植株；雜種植物鑒定。為什么體細胞雜交（融合）后要進行篩選？如何篩選雜種細胞？答：雜種細胞選擇的方法互補選擇法（遺傳和生理生化特性）：①抗藥性篩選法：利用細胞對藥物敏感性差異篩選融合細胞。營養(yǎng)互補篩選法：細胞在缺乏一種或幾種營養(yǎng)成分時不能生長繁殖，即屬于營養(yǎng)缺陷型細胞?？梢姌擞浄ǎ何锢硖匦院Y選法：利用細胞在形態(tài)、大小、顏色上的差別可以在倒置顯微鏡下用微管將融合細胞吸取挑選出來，也可以采用離心方法分離融合細胞。熒光標記法：采用不同的熒光染料分別標記兩個親本細胞，這樣融合細胞內存在兩種熒光標記，可以在熒光顯微鏡下挑選分離或用流式細胞儀分離。7．如何鑒定雜種植物。答：形態(tài)學鑒定：根據(jù)莖、葉、花等組織的形態(tài)、顏色來鑒別雜種。兩親本的親源關系較遠時，雜種植物的形態(tài)傾向于親本之一，但存在差異。細胞學鑒定：原生質體融合的親本材料一般為二倍體，雜種細胞的染色體應該為雙二倍體。如果親本的親源關系較遠，染色體差異會較大；同時，雜種細胞中一親本的染色體可能會受到另外一親本的排斥，可能會產(chǎn)生大量非整倍體。因此可以從雜種植物染色體的形態(tài)、大小和數(shù)目上鑒定是否是雜種植物。同工酶（isoenzyme）鑒定：原理：根據(jù)親本和雜種植物的同工酶譜的差異來鑒別雜種植物。雜種植物的同工酶譜是雙親本酶譜的總和，表現(xiàn)為條帶增多、酶帶顏色加深、寬度加大，有時還出現(xiàn)兩親本都不具有的新譜帶或者丟失部分親本酶帶。DNA分子標記鑒定DNA分子標記鑒定：是在分子水平對親本和雜種植物遺傳一、名詞解釋染色體工程:是人們按照一定的設計，有計劃地消減、添加或代換同種或異種染色體從而達到定向改變遺傳性狀和選育新品種的一種技術。多倍體單倍體同源多倍體：染色體組來源相同的多倍體多倍體異源多倍體：染色體組來源不同的多倍體二、問答題試述多倍體植物的特點。答：形態(tài)上的巨大性?育性差，結實率低一同源多倍體?抗逆性強：抗病、抗旱、耐寒 如三倍體甜菜比較耐寒?營養(yǎng)成分高：糖類、蛋白質及其它產(chǎn)物的含量也有所提高，如四倍體番茄的維生素C的含量比二倍體的品種幾乎增加了一倍。三倍體甜菜含糖量高。試述多倍體培育的方法。自然誘導答：途徑有性雜交答：途徑有性雜交物理誘導法：溫度驟變，機械創(chuàng)傷，電離和非電離輻射，離心力等化學誘導法：化學藥劑：秋水仙素；富民??；吲哚乙酸用秋水仙素培育多倍體植物時應注意哪些問題。答：①幼苗生長點的處理愈早，獲得四倍性細胞的數(shù)目就愈多，而處理時間晚,得到的多是嵌合體。植物組織經(jīng)秋水仙素處理后,生長上會受到一定影響,因而處理后應加強植株的培育和管理。誘導多倍體時,處理的數(shù)量宜多些,以便從中選擇有利變異個體。處理后要用清水沖洗,避免藥效殘留。秋水仙素的藥效可保持很久,且具較大毒性,尤其是干燥的粉劑,因而在配制和使用時,要注意安全,不能讓其粉末在空氣中飛揚,以免誤入呼吸道,也不可觸及皮膚,其水溶液用棕色瓶盛裝，放置于黑暗處。如何鑒定多倍體植物?答：間接法核體積測量、形態(tài)學檢查直接法 染色體計數(shù)、DNA含量測定外形鑒定多倍體幼根尖端膨大，胚軸肥厚。幼苗生長緩慢，拔節(jié)后生長旺盛。葉片寬大，色深綠，葉緣有皺褶?；ù蠖o湊，籽粒增大，千粒重增加，氣孔和花粉粒增大，莖葉產(chǎn)量高。核體積測量：二倍體/三倍體核體積之比為1:1.5，二倍體與四倍體的核體積之比為1:1.74染色體計數(shù)：是鑒定多倍性的一個準確的直接方法。觀察根尖細胞或花粉母細胞的染色體數(shù)DNA含量測定：流式細胞儀。試述單倍體植物的特點。試述培育單倍體植物的方法。答：花藥培養(yǎng)花粉培養(yǎng)——細胞培養(yǎng)試述鑒定單倍體植物的方法。從單倍體如何獲得純合二倍體植物。第九章植物離體受精一、名詞解釋植物離體受精二、問答題植物離體受精培育植物的意義。離體傳粉的步驟（過程）。試述精卵細胞的