茶葉中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留測(cè)定的高效液相色譜方法

茶葉中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留測(cè)定的高效液相色譜方法

hplc-o和液相色譜-c-s的分離通常用于測(cè)定環(huán)境質(zhì)量中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留。在hplc中，對(duì)于精細(xì)的液相色譜（hplc）和液相色譜質(zhì)量分析的文獻(xiàn)經(jīng)常報(bào)告。hplc進(jìn)行了對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的剩余分離，分離條件相對(duì)平坦，但通常出現(xiàn)檢測(cè)器的低檢測(cè)性和選擇性問(wèn)題。因此，通常使用質(zhì)量分析檢測(cè)器或?qū)δ繕?biāo)物質(zhì)進(jìn)行模擬和分解。瓊斯基等人用二氯甲烷溶液、c18和黑市黑市小柱來(lái)提取、hplc-dad和hplc-ms進(jìn)行了8種藥物和部分分解產(chǎn)物。王惠立等人通過(guò)乙醚超聲提取、硅柱清潔、甲醇水乙腈作為流動(dòng)相、高效液相層析成像和紫外檢測(cè)器測(cè)定了西洋參中的六氧化鈦和硫磷等農(nóng)藥的殘留。張卓勇等人通過(guò)c18離子固相萃取、高效液相層析和紫外分光光度法進(jìn)行了檢測(cè)，并在環(huán)境中對(duì)三種有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行了分析。本工作的目的是建立液相色譜測(cè)定茶葉中水胺硫磷、亞胺硫磷、甲基對(duì)硫磷和伏殺硫磷殘留的方法,并對(duì)實(shí)際樣品中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行測(cè)定.1實(shí)驗(yàn)部分1.1標(biāo)準(zhǔn)樣品與試劑HP1100高效液相色譜儀(美國(guó)惠普公司),系統(tǒng)配置:HPG1312A二元泵,HPG1315ADAD檢測(cè)器,Rheodyne7725i進(jìn)樣器,20μL定量環(huán),HPChemStation色譜工作站.恒溫水浴振蕩器(金壇市富華儀器有限公司).Supelco固相萃取真空裝置(美國(guó)Supelco公司).水胺硫磷(100μg/mL)、亞胺硫磷(100μg/mL)、甲基對(duì)硫磷(100μg/mL)和伏殺硫磷(100μg/mL)購(gòu)于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所;上述農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品用乙酸乙酯-正己烷(1:1)混合液配制成10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液,使用時(shí)再稀釋至合適濃度.正己烷、乙酸乙酯和乙腈為色譜純(美國(guó)Tedia公司);水為樂(lè)百氏純凈水;活性炭為化學(xué)純,處理過(guò)程見(jiàn)文獻(xiàn).1.2活性炭質(zhì)化法茶葉樣品磨碎、過(guò)20目篩備用.樣品提取、凈化過(guò)程按照文獻(xiàn)進(jìn)行:稱取0.50g于50mL具塞三角燒瓶中,加入2.0mL乙酸乙酯-正己烷(1:1)混合提取液,置于溫度為45℃的搖床中振蕩30min.取1.0mL提取液移入用3mL乙酸乙酯-正己烷(1:1)混合液預(yù)淋洗的活性炭(約40mg)層析柱,用10mL乙酸乙酯-正己烷(6:1)混合液淋洗.收集全部洗脫液,氮?dú)獯蹈?乙腈定容至1.0mL,供高效液相色譜分析用.1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線及色譜圖EclipseXDB-C8高效液相色譜柱(150mm×4.6mm,5μm).流動(dòng)相為乙腈-水,梯度變化為:0.0～5.8min乙腈由55%線性升至80%,至8.0min后,乙腈開(kāi)始由80%線性下降,18.8min降至55%,流速1.2mL/min.進(jìn)樣量為20μL.DAD檢測(cè)器程序控制測(cè)定波長(zhǎng)為:198nm(0.0～3.6min),218nm(3.6～3.9min),198nm(3.9min～結(jié)束).上述色譜條件下,標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品分析的色譜圖見(jiàn)圖1.2結(jié)果與討論2.1流動(dòng)相和色譜柱的確定文獻(xiàn)中使用不同配比的甲醇-水作流動(dòng)相,但文獻(xiàn)使用乙腈-水作流動(dòng)相.由于水胺硫磷、亞胺硫磷、甲基對(duì)硫磷的保留行為較接近,而伏殺硫磷保留時(shí)間較長(zhǎng),實(shí)驗(yàn)中對(duì)流動(dòng)相中甲醇-水和乙腈-水的不同配比、不同流速等分離條件進(jìn)行了優(yōu)化,最后確定使用乙腈-水為流動(dòng)相,同時(shí)采用梯度洗脫程序以縮短分析時(shí)間.圖1的結(jié)果表明,即使在伏殺硫磷從色譜柱流出后,仍有茶葉基體中的干擾物質(zhì)從分離柱中流出,說(shuō)明建立的凈化方法還有待進(jìn)一步改進(jìn).優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下,4種有機(jī)磷農(nóng)藥的三維吸收光譜圖如圖2所示.4種農(nóng)藥分別在194nm有較強(qiáng)吸收,但由于194nm接近流動(dòng)相中乙腈的最大吸收,不宜作為檢測(cè)波長(zhǎng);水胺硫磷、亞胺硫磷、甲基對(duì)硫磷、伏殺硫磷在198nm也有較強(qiáng)吸收,而亞胺硫磷在218nm有較強(qiáng)吸收;雖然4種農(nóng)藥在237nm、274nm處都有吸收,但這兩處的吸收較弱.實(shí)驗(yàn)中選擇程序控制檢測(cè)波長(zhǎng)對(duì)不同農(nóng)藥組分進(jìn)行測(cè)定,除亞胺硫磷的檢測(cè)波長(zhǎng)為218nm外,其余3種農(nóng)藥組分的檢測(cè)波長(zhǎng)均為198nm.2.2凈化、回收率實(shí)驗(yàn)以下實(shí)驗(yàn)均按1.2、1.3中所述方法進(jìn)行.用標(biāo)準(zhǔn)添加濃度均為1.0μg/mL的4種有機(jī)磷農(nóng)藥提取液對(duì)6份不含待測(cè)組分的茶葉樣品中進(jìn)行提取、凈化、分離,計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)加入實(shí)驗(yàn)的回收率.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,水胺硫磷、亞胺硫磷、甲基對(duì)硫磷、伏殺硫磷的回收率分別為101.0%、104.0%、108.0%、89.0%.用標(biāo)準(zhǔn)添加濃度分別為0.0、0.1、0.3、0.5、1.0、1.0、5.0μg/mL4種有機(jī)磷農(nóng)藥提取液對(duì)7份不含待測(cè)組分的茶葉樣品進(jìn)行提取、凈化、分離,結(jié)果列于表1.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在0.0～5.0μg/mL的濃度范圍內(nèi),4種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)加入量和色譜分析結(jié)果(峰面積)之間呈線性關(guān)系,即在上述濃度范圍內(nèi)文中所述的樣品提取、凈化、測(cè)定等步驟能使待測(cè)目標(biāo)物以穩(wěn)定的回收率回收.2.3精密度和準(zhǔn)確度用標(biāo)準(zhǔn)添加濃度均為1.0μg/mL4種有機(jī)磷農(nóng)藥提取液對(duì)5份不含待測(cè)組分的茶葉樣品進(jìn)行提取、凈化、分離、測(cè)定,計(jì)算方法的精密度.結(jié)果表明,水胺硫磷、亞胺硫磷、甲基對(duì)硫磷、伏殺硫磷的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.96%、1.89%、2.30%、2.18%.2.4方法的定量檢出下限用標(biāo)準(zhǔn)添加濃度均為1.0μg/mL4種有機(jī)磷農(nóng)藥提取液對(duì)不含待測(cè)組分的茶葉樣品進(jìn)行提取、凈化、分離、測(cè)定,計(jì)算方法的檢出限.定義茶葉中各待測(cè)農(nóng)藥組分在預(yù)處理和分離測(cè)定后3倍信噪比(S/N=3)所對(duì)應(yīng)的濃度換算成干茶葉樣品中農(nóng)藥的含量為方法的定量檢出下限,即茶葉樣品重量0.50g、提取液體積2.0mL、固相萃取小柱凈化的樣品為1.0mL、凈化后的樣品1.0mL、進(jìn)樣量20.0μL.經(jīng)計(jì)算,水胺硫磷、亞胺硫磷、甲基對(duì)硫磷、伏殺硫磷的定量檢出下限分別為9.82、7.88、2.19、0.72μg/kg(dm).3甲胺硫磷和伏殺硫磷檢測(cè)用建立的方法對(duì)某茶葉公司提供的茶葉樣品進(jìn)行測(cè)定.結(jié)果表明,水胺硫磷在大多數(shù)的茶葉品種中沒(méi)有檢出,其余三種農(nóng)藥組分在所檢測(cè)的品種中均有檢出,甲基對(duì)硫磷的濃度較低一般在0.02mg/kg左右,亞胺硫磷和伏殺硫磷的檢出濃度在0.05～0.20mg/kg之間.4色譜條件優(yōu)化建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定茶葉中水胺硫磷、亞胺硫磷