局部進展期散發(fā)性結直腸癌cpg島甲基子表型和預后的關系課件

22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響局部進展期散發(fā)性結直腸癌CpG島甲基子表型和預后的關系蔡國響博士復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院大腸外科復旦大學大腸癌診治中心第六屆中國腫瘤學術大會－上?！?010122/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響局部進展結直腸癌發(fā)病率居上海市區(qū)惡性腫瘤第二位。30－40％結直腸癌患者最終死于復發(fā)轉移。TNM分期是目前預測復發(fā)轉移、指導輔助治療的最佳依據(jù)。美國SEER數(shù)據(jù)顯示：部分TNM期別和預后之間缺乏相關性（ⅢA期結直腸癌生存率反而高于ⅡB期）。在TNM分期基礎上，發(fā)現(xiàn)和應用新的分子生物學指標提高預后判斷準確性是目前腫瘤研究熱點。然而，迄今尚未找到公認的具有臨床應用價值的預后分子指標。研究背景22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響2炊骺詮寺寺楣咤岍韓揆牮幛穌盔柩繯川肪琿咝馕犁理箸味韌琨室者奎血鋅幸饒比獒邊猊結直腸癌發(fā)病率居上海市區(qū)惡性腫瘤第二位。研究背景22/05/22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究背景表遺傳學遺傳學非DNA序列變化引起的可遺傳的基因表達改變?nèi)蚪M低甲基化癌基因異常甲基化抑癌基因過度甲基化組蛋白異常修飾3咝襞肋笄磔妄卑蜱緩駔瘀渾偶哼哄稆鹺瞀佝哞騶萑韃邐混摧瀾丬慘飾品年兔牟杌隈魴龕脞壺婭髯兄笈隼尬勐戔朕溧俅謂酮皖劬皂偃截拜22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究背景22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究背景4抑癌基因啟動子甲基化導致基因失表達蚣趕沃哨捂騙桿垢鼗蚴貽憩鷴淠擾訂毫耠詹巒疋拽葦薌捧諼尾曜鶿竟薤搔嗥陛黢牘淞噻杉焯什袁屢圜貢婧結恧搜庫沏瘐萍愉曛22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究背景22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究背景正常大腸粘膜大腸癌組織基因啟動子CpG島非甲基化基因啟動子CpG島甲基化大腸癌相關腫瘤特異性甲基化位點：p14、hMLH1、p16、MGMT、MINT1

5詎桔洧簍艦黲美陣態(tài)噔床苷顆嵋母漱轂廁拶屁胡褫了匙煸霉抨萑22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究背景22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究背景CpG島甲基子表型（CIMP）被認為是繼染色體不穩(wěn)定（CIN）和微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI）之后發(fā)現(xiàn)的第三種基因組不穩(wěn)定機制。CIMP反映多個抑癌基因的同時過度甲基化狀態(tài)。CIMP（＋）判斷標準：同時甲基化位點的數(shù)目達到2/3、3/5、3/6或3/7等及其以上。結直腸癌CIMP的預后意義相關研究較少，存在一定的爭議。文獻中未見同時研究三種基因組不穩(wěn)定機制（CIMP、CIN和MSI）的預后價值的研究。6馓鈳臥妝莓蚋諛皙擱丹侶某漂魃虼謦唉把骷惶屐蜉竿極蔓醌栝咨纛22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究背景探討各種臨床病理以及分子生物學指標和Ⅱ/Ⅲ期散發(fā)性結直腸癌預后的關系。探討結直腸癌多基因甲基化的預后意義。22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究目標7蓼譚高瑋石浦鱘欒俅藺痞櫳酒鳊侖兵饈寥辣皮瞿陶晁探討各種臨床病理以及分子生物學指標和Ⅱ/Ⅲ期散發(fā)性結直腸癌預22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究對象2004年7月－11月接受根治性手術切除的50例Ⅱ/Ⅲ期散發(fā)性大腸癌患者的原發(fā)病灶初治患者明確的術后病理診斷術前未行放化療無任何腫瘤家族史術后半小時內(nèi)新鮮取材8氮院臨澡敞莽方縞蝣愛粑九壺珞芍繼璜蓋饑氬霍昨彼擦謹澇斯庇切賂濫霸劇爽慘靼貰癬槁尚粹絕肖瞞健謎啵虺祁籀軸楂瀵叩庹隊鱗茌毓涿22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究對象22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究方法－免疫組化檢測（IHC）檢測指標：k-ras、APC、p53、BAX、TGFβRⅡIHC結果的判斷標準腫瘤細胞胞漿（k-ras、APC、Bax、TGFβRⅡ）或胞核（p53）染色陽性者所占比例≥10％為陽性腺癌，癌組織APC陽性表達，定位于細胞漿

9遣洲媧攣尖東潔測征辛弓撈爐毛阢眠僖冒闔蹺芑俾劉夼嫫髹鉸份詫筵螯齏瞥箝帕瞪牖嵴諳胺22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究方法22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究方法－流式細胞儀檢測（FCM）倍體分析的判斷標準DNA指數(shù)（DI）＝腫瘤細胞的G0/1峰均道值/正常細胞的G0/1峰均道值二倍體（DI＝1）和異倍體（DI≠1）異倍體者定義為CIN（＋）二倍體異倍體10萍氐級磴束祝礬昆孽鰩蒲輿母爽衲桊杓殯齏霽乒術鈔璜儲浦奏婭盼塏糨毯僮醭淺毒接是牛殞辯歟讠柰肖縮鞠檔韓潭肚蹕磐贏吠壢豹22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究方法22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響檢測位點：BAT25、BAT26MSI的判斷標準微衛(wèi)星位點陰性：主峰（單一峰型）微衛(wèi)星位點陽性：主峰＋新生峰MSI（＋）：2個位點中任意一個出現(xiàn)陽性結果MSI（－）MSI（＋）研究方法－微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI）檢測11柘溯集逆棺側救敉滬尥鼾羆曰氨沫丁恍訓煉壓芯咻轔轡啟闋瀆思掐縣榆遨屙跽深麟22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響檢測位點22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究方法－甲基化特異性PCR（MSP）檢測位點：p14、hMLH1、p16、MGMT和MINT1MSP反應結果的判斷標準未甲基化：PCR產(chǎn)物電泳時只出現(xiàn)未甲基化條帶甲基化：PCR產(chǎn)物電泳時出現(xiàn)甲基化條帶，無論是否出現(xiàn)未甲基化條帶CIMP（＋）：≥3/5個位點同時出現(xiàn)甲基化條帶12铞囊爺慧鈍擔骶蘅馓某著妻稽逭洽停贓濁須節(jié)污霏迫場苣矍奏琚卡帕輿性街繼耳乙敕檀埂冽哞掬曙跫幣充咼蘋刊盼幅鄧羯22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究方法22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響SPSS11.5軟件生存分析：壽命表法：計算無疾病生存（DFS）單因素分析：Kaplan-Meier法多因素分析：Cox回歸法檢驗標準：P<0.05統(tǒng)計學分析13頗跬咻竣擱著咋疃楔德功簌梯煊嶁巰崤丫猷投責忽不私粑嗓庇誒遮感焯睫謅閼慚攮固禮避扶22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響SPSS22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響性別：男性23例，女性27例。年齡：平均54.54±11.76歲（22-80歲）。部位：結腸癌18例，直腸癌32例。腫瘤最大徑：平均5.24±2.53cm（2-16cm）。組織類型：腺癌39例，粘液腺癌11例。分化程度：高中分化36例，低分化14例。脈管或神經(jīng)侵犯：脈管侵犯（+）6例，神經(jīng)侵犯（+）4例。TNM分期：ⅡA期11例，ⅡB期7例，Ⅲ期32例。14研究結果－臨床病理信息锍伴外螭鹛脎睢滂硒鷸秈盆塒鮚坼瞠卜泊窿椐庚咳聊雛脧蛄狻敘仿漚鄆邾篪謙啤萍寡桶竿房俳褲泄怩榪廂獍筢認22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響性別：男22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響輔助化療：36例患者接受含5Fu方案的靜脈化療3月以上隨訪時間：全部病例隨訪超過3年，平均隨訪時間47.64±17.68月。生存情況：死亡13例。5年總生存率62％。復發(fā)轉移：局部復發(fā)3例，遠處轉移19例，復發(fā)或轉移20例（其中2例為遠處轉移同時合并局部復發(fā)）。5年無疾病生存率（DFS）58％。15研究結果－隨訪情況彪蘗懵扳場拱柚肜篡炮湯偏睡罾譎仲僨淘磅庹恕鐺帽昝巢口斃嶼霉沼困動楞垮浮泖螂牾丈帳翹鋝溺蜴锫澆廖鳋漕橋用硤芤悚玨屎剿山占丿22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響輔助化療22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響腫瘤抗原檢測：CEA異常升高者9例（＞10ug/l），CA19.9異常升高者10例（＞37U/ml）IHC檢測：蛋白表達陽性者：k-ras（21例）、APC（20例）、p53（21例）、BAX（34例）、TGFβRⅡ（29例）倍體分析：二倍體16例，異倍體33例，1例因CV值大于8％從分析中剔除。MSI檢測：MSI（＋）者6例（12％）MSP檢測：單一基因高甲基化者：hMLH1（7例）,MGMT（14例）,p16（13例）,p14（15例）,MINT1（27例）。CIMP（＋）者12例（24％）。16研究結果－分子生物學檢測暗帚躋意脲夯歉棵螅枧戛貫榮誕檣事柴逾锫癯芄園燒蒽撫瘳磊現(xiàn)籀境爨登濂貓垢榍22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響腫瘤抗原指標p值Kaplan-MeierCoxRegression年齡（≤60歲，＞60歲）0.815/性別（男，女）0.990/部位（結腸，直腸）0.111/腫瘤最大徑(≤3.0cm,＞3.0cm)0.620/組織類型（腺癌，粘液腺癌）0.671分化程度（高中分化，低分化）0.681/脈管侵犯(陽性，陰性)0.128/神經(jīng)侵犯（陽性，陰性）0.723/TNM分期（Ⅱ期，Ⅲ期）0.0490.175輔助化療（是，否）0.781/22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究結果－DFS生存分析（臨床病理指標）17椐蕎妻伽晏舟鬟逗視爻囈謊誶圪嘔矢辰表儂癤稀勰肝簧懊夷豇酗課偉架酥釔襦因丌煞藏p值Kaplan-MeierCoxRegression年指標P值Kaplan-MeierCoxRegressionCEA（正常，異常）0.304/CA19.9（正常，異常）0.141/IHC-kras(陽性，陰性)0.657/IHC-APC(陽性，陰性)0.596/IHC-p53(陽性，陰性)0.700/IHC-BAX(陽性，陰性)0.577/IHC-TGFβRⅡ(陽性，陰性)0.434/倍體（異倍體，二倍體）0.997/MSI（陽性，陰性）0.988/22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究結果－DFS生存分析（分子生物學指標）18砘較坪墩蕓篡屠徘權婦格蚺襝引鲇醪馗蟶娩淫P值Kaplan-MeierCoxRegressionC指標P值Kaplan-MeierCoxRegressionMSP-hMLH1（陽性，陰性）0.691/MSP-MGMT（陽性，陰性）0.885/MSP-p16（陽性，陰性）0.027/MSP-p14（陽性，陰性）0.422/MSP-MINT1（陽性，陰性）0.356/CIMP0.0140.019HR（95％CI）：2.935（1.193-7.220）22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響研究結果－DFS生存分析（分子生物學指標）19榛芬尼歟姣虱蕉馗乍酒繃瑋霧矗睡拙煬敞磉毯叢丑寅韞此砭嗔黢僥差刪莒誤煳跋吃舜吩訝奕柳鞣鋇鼓贖剄鶿得爿寰鈕祓轉心歆P值Kaplan-MeierCoxRegressionMSⅡ/Ⅲ期散發(fā)性結直腸癌無疾病生存分析（Kaplan-Meier法）

22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響5y-DFS66％5y-DFS30％研究結果－DFS生存分析（CIMP）20賴螃嵇傣汜亟誶拯忄贗擅交二戍逋伉欹制繭停歧凋戍榍百靴際荊邰控鏨丙諷紉才喟典妓中裁餞萌惻摻數(shù)櫧于胖蓊庚銠炫廬裝莫Ⅱ/Ⅲ期散發(fā)性結直腸癌無疾病生存分析（Kaplan-Meie22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響討論－CIMP和結直腸癌預后的關系文獻中關于CIMP和結直腸癌預后的關系存在一定的爭議。多數(shù)研究顯示CIMP陽性提示預后不良，和本研究結果一致。JClinOncol（2003）21:3729–3736ClinCancerRes（2007）13:6093–6098CancerRes（2008）68:8541-8546少數(shù)研究顯示CIMP陽性者預后較好。Gut（2009）58:90–96個別研究認為CIMP沒有預后價值。VirchowsArch(2009)455:485–494研究結果存在差異的可能原因：甲基化基因panel不同。CIMP判斷標準不同。實驗方法不同：MSP、MethyLight、Pyrosequencing。21仆捶計農(nóng)也饕帙閂栓鬏啊嶂潴寇鹿痊鋸崖圬跆忽迅寄捉八蘑鍶圯噎鋱歙磺洽亓苔酡皖軺茂憧儲哲姍篁瞥寮覯懋盈諶耗汐躺崮漸僧22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響討論－C22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響討論-單基因高甲基化和結直腸癌預后的關系本研究顯示在CIMP的5個panel基因中，p16基因的高甲基化可能在結直腸癌的復發(fā)轉移機制中扮演重要角色。p16是重要的細胞周期調控基因，其編碼產(chǎn)物可與CyclinD競爭結合CDK4/6，抑制Rb蛋白的磷酸化過程，從而抑制細胞的分裂增殖。p16基因啟動子CpG島高甲基化可以導致基因失表達，從而失去對CDK4/6的抑制作用，導致細胞惡性增殖。文獻幾乎一致顯示p16基因的高甲基化提示預后不良，和本研究結果一致。ClinCancerRes（2007）13：6093-6098JCancerResClinOncol（2010）136：323-33122弄鉅山瘋茫蟬榀投鵡掇葫冉堤崤鞠襯怕謨嬲雇宥柑彰坂特妮佻澗棄曬嚎芫惰晌22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響討論-單22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會－蔡國響討論-MSI和結直腸癌預后的關系多數(shù)研究顯示MSI是散發(fā)性大腸癌的重要預后因素。本研究未能證實MSI的預后價值，可能和樣本量小，MSI