第二章組培基本條件

第二章組培基本條件第1頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

第一節(jié)培養(yǎng)基及其配制一、培養(yǎng)基的成分無(wú)機(jī)鹽（大量元素、微量元素）有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分（糖、維生素、氨基酸）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑天然有機(jī)添加物質(zhì)瓊脂活性炭第2頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月根據(jù)植物對(duì)元素的吸收量，分為：1、大量元素（大于0.5mmol/L）：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S；其中C、H、O為氣體元素，其余6種為礦質(zhì)元素。2、微量元素（小于0.5mmol/L）：Fe、B、Mn、Zn、Mo、Cu、Co、Cl（一）、無(wú)機(jī)鹽第3頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（一）無(wú)機(jī)鹽

1.大量元素（MS培養(yǎng)基為例）序號(hào)化學(xué)式用量（mg/L）1KNO319002NH4NO316503KH2PO41704MgSO4.7H2O3705CaCL2.4H2O440第4頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（一）無(wú)機(jī)鹽

2.微量元素（MS培養(yǎng)基）序號(hào)化學(xué)式用量（mg/L)1KI0.832H3BO36.23MnSO4.4H2O22.34ZnSO4.7H2O8.65Na2MoO4.2H2O0.256CuSO4.5H2O0.0257CoCl2.6H2O0.025第5頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分1、糖類(lèi)種類(lèi)：蔗糖、葡萄糖、果糖。其中以蔗糖最常用。作用：提供碳源、能量、保持培養(yǎng)基的滲透壓。用量：1%～5%。第6頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（二）有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分2、維生素類(lèi)

常用的有Vc、B1、B6、B12、煙酸、生物素等。第7頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（二）有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分3、氨基酸常用的有：甘氨酸、絲氨酸、酪氨酸等水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白（LH）是多種氨基酸的混合物，在培養(yǎng)基中也時(shí)常添加。第8頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)

用量很小，但對(duì)外植體的生長(zhǎng)和分化起著決定作用。影響最顯著的是生長(zhǎng)素類(lèi)和細(xì)胞分裂素類(lèi)。

第9頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1．生長(zhǎng)素類(lèi)種類(lèi)：2,4-D：2,4-二氯苯氧乙酸NAA：萘乙酸IAA：引哚乙酸IBA：引哚丁酸作用：誘導(dǎo)愈傷組織、胚狀體的產(chǎn)生，試管苗生根。第10頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.細(xì)胞分裂素類(lèi)種類(lèi)

KT：激動(dòng)素（6-糠基氨基嘌呤）

6-BA：6-芐基氨基嘌呤ZT：玉米素2-iP：2-異戊烯腺嘌呤。第11頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.細(xì)胞分裂素類(lèi)作用

促進(jìn)細(xì)胞分裂，由愈傷組織或器官上分化出不定芽，促進(jìn)芽的增殖。第12頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3、根和芽形成的激素控制特點(diǎn)

生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的比值和絕對(duì)含量，控制著植物組織的形態(tài)發(fā)生。

生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素比值高：有利于根的形成低：有利于芽的形成適中：維持原組織生長(zhǎng)而不分化第13頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第14頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）天然有機(jī)添加物常用種類(lèi)和濃度為：椰子乳10%酵母提取物0.5%番茄汁5%～10%香蕉泥100～200mg/L作用是提供微量營(yíng)養(yǎng)成分、生理活性物質(zhì)和生長(zhǎng)激素等。

第15頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（五）瓊脂

從海藻中提取的一種高分子碳水化合物，作為凝固劑，不參與代謝。用量：0.6%～1.0%。

第16頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（六）活性炭來(lái)源：用木炭粉碎加工形成。作用：吸附作用，減輕有害物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)物的毒害。吸附?jīng)]有選擇性，在吸附有害物質(zhì)的同時(shí)，也吸附有用物質(zhì)。使培養(yǎng)基變黑，有利于生根。用量：0.1％－0.5%。第17頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、培養(yǎng)基的種類(lèi)和選擇1、基本培養(yǎng)基和完全培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基：包括無(wú)機(jī)鹽、維生素、氨基酸、糖和水等。完全培養(yǎng)基：在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，根據(jù)培養(yǎng)目的，添加其它一些物質(zhì)。如：植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，天然有機(jī)物（椰乳、香蕉泥等）。

第18頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月MS培養(yǎng)基配方硝酸銨1650硫酸鋅8.6硝酸鉀1900氯化鈷0.025氯化鈣440硫酸銅0.025硫酸鎂

370鉬酸鈉0.25磷酸二氫鉀170碘化鉀0.83硫酸亞鐵27.8

肌醇

100

EDTA-Na237.3煙酸0.5硼酸6.2鹽酸吡哆素0.5硫酸錳22.3鹽酸硫胺素0.1甘氨酸2mg/L第19頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、基本培養(yǎng)基的種類(lèi)種類(lèi)：眾多，有幾百種，但較常用的僅一二十種。名稱(chēng)：多數(shù)以發(fā)明人的姓名來(lái)命名，如White培養(yǎng)基，Murashige和Skoog培養(yǎng)基(簡(jiǎn)稱(chēng)MS培養(yǎng)基)第20頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3、培養(yǎng)基的類(lèi)型3.1高鹽濃度培養(yǎng)基：MS、B5等。適用于多數(shù)營(yíng)養(yǎng)需求量較大的植物。3.2中等鹽濃度培養(yǎng)基：Nitsh、Miller等大量元素濃度約為MS的1/2。3.3低鹽培養(yǎng)基：WPM、White等。大量元素濃度約為MS的1/4。適用于木本植物的培養(yǎng)。第21頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4、培養(yǎng)基的選擇不同植物、培養(yǎng)部位和培養(yǎng)目的應(yīng)選擇不同的培養(yǎng)基。在建立一個(gè)新的實(shí)驗(yàn)體系時(shí)，一般先由一種已被廣泛采用的培養(yǎng)基開(kāi)始（如MS、N6、B5等）。第22頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、培養(yǎng)基的配制方法

（一）、流程圖

第23頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）母液配制（以MS培養(yǎng)基為例）氯化鈣鐵鹽大量元素微量元素有機(jī)物質(zhì)第24頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月配制MS培養(yǎng)基時(shí)母液的計(jì)算第25頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）、母液的配制擴(kuò)大倍數(shù)：10～100倍。意義：提高工作效率，減小稱(chēng)量誤差。藥品稱(chēng)量一次，就可以使用多次。第26頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1、母液配制原則

相同類(lèi)型的試劑混合；易沉淀的藥品分開(kāi)；母液濃度要適宜；用量要認(rèn)真計(jì)算和核對(duì)；藥品要準(zhǔn)確稱(chēng)量。

第27頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、大量元素母液（擴(kuò)大10倍）成分規(guī)定量(mg/L)稱(chēng)取量(mg)母液體積（ml)配1升培養(yǎng)基用量（ml)KNO3NH4NO3

MgSO4.7H2OKH2PO4190016503701701900016500370017001000100CaCl2.2H2O44044001000100第28頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

母液體積配1升培養(yǎng)基用量＝

擴(kuò)大倍數(shù)第29頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．微量元素母液鐵鹽容易形成Fe(OH)3沉淀硫酸亞鐵與Na2-EDTA混合，形成絡(luò)合物。其它微量元素分別充分溶解后混合定容為一瓶，擴(kuò)大倍數(shù)為100倍。

第30頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3、微量元素母液（擴(kuò)大100倍）成分規(guī)定量(mg/L)稱(chēng)取量(mg)母液體積（ml)配1升培養(yǎng)基用量（ml)MnSO4.4H20ZnSO4.7H2OH3BO3KINa2MoO4.2H2OCuSO4.5H2OCoCl2.6H2O22.308.606.200.830.250.0250.025223086062083252.52.5100010第31頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4、鐵鹽母液（擴(kuò)大100倍）成分規(guī)定量(mg/L)稱(chēng)取量(mg)母液體積（ml)配1升培養(yǎng)基用量（ml)Na2-EDTAFeSO4.4H2O37.3027.8037302780100010第32頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5、有機(jī)物母液（擴(kuò)大50倍）成分規(guī)定量(mg/L)稱(chēng)取量(mg)母液體積（ml)配1升培養(yǎng)基用量（ml)甘氨酸維生素b1維生素b6煙酸肌醇2.000.100.500.5010010052525500050010第33頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6．生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液不溶于水，先溶于助溶劑。NAA、IAA、IBA、2,4-D及赤霉素、玉米素等，先溶于少量95%酒精，再加水定容；KT和BA等，先溶于少量的1mol/L鹽酸中，再加水定容。第34頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6．生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液

母液濃度：用量小，使用的濃度單位是mg/L，因此母液一般配制成0.1mg/ml，或1mg/ml；第35頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月7．瓊脂、蔗糖

用量大，不需要配制母液，隨稱(chēng)隨用。第36頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月8、母液標(biāo)簽注明母液名稱(chēng)、配制1升培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)取的數(shù)量。大量元素100ml/L第37頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月9、母液保存一般在2～4℃的冰箱中保存。生霉或沉淀，就不能再使用。第38頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(三)培養(yǎng)基的配制（按1L計(jì)）

1、確定配方MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L+3%蔗糖+0.8%瓊脂2、配方用量計(jì)算大量元素（擴(kuò)大10倍配1L）微量元素（擴(kuò)大100倍配1L）有機(jī)物（擴(kuò)大50倍配500ml）鐵鹽（擴(kuò)大100倍配1L）6-BA(1mg/ml)NAA(0.1mg/ml)蔗糖瓊脂100ml10ml10ml10ml1.5ml2ml30g8g第39頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

稱(chēng)8g瓊脂、30g蔗糖放在搪瓷杯里，加入約700ml蒸餾水，電爐上加熱溶化。3、瓊脂和蔗糖的溶化第40頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4．母液的量取和定容用移液管（不能混用）或量筒將母液依次加入燒杯中。再與已溶化的瓊脂、蔗糖混合、定容。第41頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5．pH值的調(diào)整A、不同植物對(duì)酸堿度的要求不同，多數(shù)培養(yǎng)基的pH值為5.6～6.0。B、常用1mol/L的NaOH和HCl調(diào)整pH值。C、pH影響培養(yǎng)基的硬度。pH＜5.0培養(yǎng)基不易凝固。D、滅菌后，培養(yǎng)基的pH會(huì)降低0.2－0.3。第42頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月種類(lèi)pH值杜鵑4.0月季5.8桃7.0不同植物的最適pH值

第43頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月酸和堿的配制1mol/LNaOH：稱(chēng)取4g的NaOH，溶解后定容至100ml。1mol/LHCl：量取8.4ml的濃HCl（12mol/L），定容至100ml。第44頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6．培養(yǎng)基的分裝分裝量：隨培養(yǎng)容器大小而異，約一指厚即可。注意：不要把培養(yǎng)基粘到瓶口上，以免染菌。封口：封好瓶口，準(zhǔn)備滅菌。第45頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）培養(yǎng)基的滅菌和保存1．消毒和滅菌的概念1.1消毒：指采用物理或化學(xué)方法殺死物體表面的微生物（不包括細(xì)菌的芽孢和真菌的孢子）。第46頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.2滅菌：指采用物理或化學(xué)方法殺死物體表面及其內(nèi)部的一切微生物（包括細(xì)菌的芽孢和真菌的孢子）。第47頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．高溫高壓濕熱滅菌

2.1滅菌條件

壓力0.105MPa，溫度121℃。2.2滅菌時(shí)間取決于待消毒液體容積的大小，15-30min.第48頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)基滅菌最少時(shí)間

液體容積（ml）121℃下，時(shí)間（min）

20～501575～15020250～50025100030第49頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月手提式高壓鍋滅菌步驟裝鍋加水蓋鍋蓋通電加熱排冷空氣升溫保壓斷電降壓出鍋冷卻第50頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.3滅菌操作

將培養(yǎng)瓶放入滅菌鍋，蓋好鍋蓋。壓力上升到0.05MPa時(shí)（111℃），打開(kāi)“放氣閥”將冷空氣排盡，關(guān)閉“放氣閥”。壓力達(dá)到0.105MPa時(shí)（121℃），維持足夠時(shí)間，關(guān)閉電源。待壓力回復(fù)到“0”時(shí)才可以開(kāi)啟滅菌鍋。第51頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.4排除冷空氣的重要性

冷空氣使鍋內(nèi)溫度不一致，底層的溫度達(dá)不到121℃，導(dǎo)致培養(yǎng)基不能充分滅菌。第52頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月溫度與排氣的關(guān)系（0.105Mpa）

排氣量完全排除2/31/21/3未排除溫度/℃121115112109100第53頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．過(guò)濾除菌在高溫下易分解的試劑，如GA3、IAA、椰子汁等，用過(guò)濾除菌。濾膜孔徑為0.45μm。

第54頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．過(guò)濾除菌過(guò)濾器漏斗型：大量液體過(guò)濾注射器型：小量液體過(guò)濾為加速過(guò)濾，可在漏斗下安真空泵抽氣。需在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行，所有器皿事先需要滅菌。第55頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月A、漏斗型過(guò)濾除菌裝置B、注射器型過(guò)濾除菌裝置第56頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

過(guò)濾滅菌

濾膜?0.45um以下1.過(guò)濾器先滅菌，滅菌溫度不超過(guò)121℃。2.溶液先進(jìn)行初濾第57頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4．培養(yǎng)基的保存一般等培養(yǎng)基冷卻后即可使用。為保險(xiǎn)起見(jiàn)，也有在培養(yǎng)室中預(yù)培養(yǎng)2～3d，如果沒(méi)有出現(xiàn)雜菌污染才使用的。第58頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)

實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置選址：選擇采光良好、通風(fēng)、清潔的地方作實(shí)驗(yàn)室。規(guī)模：根據(jù)需要與可能性來(lái)安排，不可一概而論。可新建或舊房改造。第59頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)原則1、方便

規(guī)?；a(chǎn)的組培實(shí)驗(yàn)室，盡量將主要功能房間集中在同一層樓，方便操作。

第60頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、

無(wú)菌設(shè)一走道，先經(jīng)過(guò)走道再進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，保持清潔，減少污染。接種室外設(shè)一緩沖間，以便更換衣帽等。緩沖間及接種室內(nèi)均需安裝紫外燈，可隨時(shí)消毒。第61頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3、節(jié)能培養(yǎng)室應(yīng)設(shè)在房屋的南面，設(shè)大窗戶(hù)，盡量利用自然光照，減少照明費(fèi)用，降低成本。培養(yǎng)室房間不宜太大，門(mén)裝成滑門(mén)，便于保溫，節(jié)省能源。第62頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)室的大窗子第63頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4、安全

接種室處于密閉狀態(tài)，容易造成室內(nèi)空氣污濁，影響身體健康。安裝空氣循環(huán)過(guò)濾裝置，保持室內(nèi)空氣新鮮。第64頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月洗滌室配制室滅菌室接種室培養(yǎng)室組培實(shí)驗(yàn)室觀(guān)察室二、實(shí)驗(yàn)室設(shè)置儲(chǔ)存室第65頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月實(shí)驗(yàn)室平面圖一第66頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月配制室滅菌室觀(guān)察室貯藏室走廊

洗滌室培養(yǎng)室接種室培養(yǎng)室實(shí)驗(yàn)室平面圖二第67頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、實(shí)驗(yàn)室功能設(shè)置（一）貯藏室

貯存暫時(shí)不用的器皿、用具、藥品等，也可用作種質(zhì)保存。第68頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月功能：玻璃器具的清洗、干燥和貯存。

配備：上下水、水槽（二）洗滌室蒸餾水器放在這間，利用冷卻水洗滌，既暖和又提高了水的利用率。第69頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）配制室功能：培養(yǎng)基配制配備：藥品柜、天平、工作臺(tái)、冰箱等第70頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月配制室的設(shè)置及配備第71頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月藥品柜冰箱天平第72頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月配制室的設(shè)置及配備第73頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月功能：培養(yǎng)基滅菌

配備：高壓滅菌鍋（四）滅菌室第74頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月滅菌室的設(shè)置及配備第75頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（五）接種室功能：材料消毒、接種、轉(zhuǎn)移培養(yǎng)物。結(jié)構(gòu)：接種室+緩沖間(2m2)配備：超凈工作臺(tái)

面積：10－20m2

要求:墻壁光滑、配置梭門(mén)，門(mén)窗嚴(yán)密。第76頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月超凈工作臺(tái)電子滅菌器臭氧滅菌機(jī)第77頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月緩沖間第78頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月接種室第79頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月接種操作第80頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（六）培養(yǎng)室配備：培養(yǎng)架、照明、控溫設(shè)備面積：根據(jù)規(guī)模定

功能：材料培養(yǎng)

第81頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)室第82頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1、溫度控制培養(yǎng)溫度：一般25±2℃。安裝空調(diào)；在不需要降溫的地區(qū)，可用“電爐+溫度指示控制儀”，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)控溫。

第83頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月溫度指示控制儀＋電爐第84頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、輔助光照光照強(qiáng)度：1000－6000Lux，除了開(kāi)設(shè)大窗戶(hù)，充分利用自然光外，還需安裝輔助光源。日光燈安裝在培養(yǎng)架上。第85頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第86頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、輔助光照每層培養(yǎng)架安裝2支日光燈，光強(qiáng)2000～3000Lux。安裝自動(dòng)計(jì)時(shí)器（微電腦時(shí)控開(kāi)關(guān)）控制光照時(shí)間，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)控制。第87頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月微電腦時(shí)控儀第88頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（六）觀(guān)察室功能：觀(guān)察培養(yǎng)材料的生長(zhǎng)分化情況。

配備：顯微鏡，切片機(jī)等。第89頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第90頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)常用儀器和用具

（一）天平1．藥物天平（粗天平）

稱(chēng)量精度為0.1g，稱(chēng)取蔗糖、瓊脂以及用量較大藥品。第91頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．分析天平

精度為0.1mg，稱(chēng)取微量元素和植物激素等。放置天平的地方，要平穩(wěn)、干燥，避免腐蝕性藥品和水氣。第92頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月藥物天平分析天平第93頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）高壓蒸汽滅菌鍋組培最基本的設(shè)備，用于培養(yǎng)基、器械等的滅菌。有大型臥式（200L）、中型立式（50L）、小型手提式（18L）等多種，可根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模和財(cái)力加以選用。大型的效率高，小型方便靈活。

第94頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月手提式滅菌鍋

第95頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月各種型號(hào)的高壓滅菌鍋第96頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月大型臥式滅菌鍋第97頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第98頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）烘箱玻璃器皿烘干：溫度80-100℃。干熱滅菌：溫度150～160℃，持續(xù)1～3小時(shí)。第99頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）冰箱

用于試劑和母液的保存。家用冰箱即可，宜選用冷藏室較大的型號(hào)。第100頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月冰箱第101頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（五）酸度計(jì)筆式酸度計(jì)較方便，在使用之前應(yīng)先進(jìn)行校正，使用之后將電極沖洗干凈，并將電極浸泡在蒸餾水中。也可用精密pH試紙（pH值5.4～7）來(lái)代替。測(cè)定pH值時(shí)，應(yīng)攪拌均勻后再測(cè)。第102頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（六）蒸餾水器

組培常用蒸餾水或無(wú)離子水，蒸餾水可用金屬蒸餾水器大批制備。

第103頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月蒸餾水器規(guī)格出水量（L/h）51020功率（千瓦）4.57.515第104頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（七）空調(diào)機(jī)

用于培養(yǎng)室恒溫控制，根據(jù)培養(yǎng)室大小，選裝不同功率的。第105頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（八）超凈工作臺(tái)用途：接種、轉(zhuǎn)苗的無(wú)菌工作臺(tái)面。型號(hào)：有單人、雙人及三人式的，有開(kāi)放和密封式的，有垂直送風(fēng)和水平送風(fēng)的類(lèi)型。

第106頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月超凈工作臺(tái)第107頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月超凈工作臺(tái)第108頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（八）超凈工作臺(tái)原理:將空氣過(guò)濾后流過(guò)工作臺(tái)面。維護(hù)：放在空氣干凈，地面清潔的地方。使用過(guò)久，引起堵塞時(shí)，需要清洗和更換過(guò)濾網(wǎng)。第109頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（九）解剖鏡用于培育脫毒苗時(shí)剝?nèi)∏o尖，以及隔瓶觀(guān)察培養(yǎng)物的生長(zhǎng)情況。第110頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月體視顯微鏡倒置顯微鏡第111頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月顯微鏡倒置顯微鏡第112頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（十）培養(yǎng)架架子用金屬、木材制作，隔板用玻璃、金屬篩網(wǎng)。一般設(shè)5層，最低一層離地10cm，其他層高30cm，培養(yǎng)架高1.7m左右，寬60cm。每層臺(tái)板上方安裝日光燈作輔助光源。第113頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)架第114頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)架第115頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)箱第116頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月光照培養(yǎng)箱第117頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（十一）馴化設(shè)備溫室大棚第118頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、必要的用具（一）玻璃器皿

1．計(jì)量器皿

①量筒②容量瓶

③吸管

2．燒杯3．試劑瓶

第119頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月計(jì)量器皿第120頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月對(duì)玻璃器皿要求：

1.耐腐蝕；耐高溫、高壓；

2.透明度好；

3.便于接種。第121頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4．培養(yǎng)瓶早期用試管、三角瓶，不好操作。現(xiàn)在一般是用果醬瓶(250ml、350ml)，瓶口大，操作方便。也有用其它培養(yǎng)容器的。第122頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第123頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5．酒精燈用于金屬器具的滅菌；及在火焰邊無(wú)菌操作。第124頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）金屬器械1．鑷子

16－25cm長(zhǎng)的槍狀鑷子，因其腰部彎曲，使用方便。

第125頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月鑷子第126頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月滅菌器推車(chē)第127頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．剪刀12～15cm長(zhǎng)的彎頭剪好用，特別適用于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)剪苗。

第128頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）封口材料小瓶口：常用棉塞，外面再包一層牛皮紙；也可用鋁箔包住。大瓶口：常用塑料瓶蓋、薄膜、雙層硫酸紙。第129頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

第四節(jié)環(huán)境條件一、溫度1、培養(yǎng)溫度

多數(shù)為25±2℃，并保持恒溫培養(yǎng)。

不同植物的溫度不同，如：百合20℃、月季25-27℃、番茄28℃。第130頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)溫度

喜溫植物培養(yǎng)溫度較高，26-28℃。如茄科、葫蘆科等。耐寒植物培養(yǎng)溫度較低，18-22℃。如百合科、十字花科、菊科等。

第131頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、低溫預(yù)處理在花藥培養(yǎng)中，通過(guò)低溫預(yù)處理，可以促進(jìn)細(xì)胞的脫分化和再分化。如：采用3℃預(yù)處理48小時(shí)，可使曼陀羅花粉的胚狀體誘導(dǎo)率提高33.6%。第132頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、光照1、光周期1.1愈傷組織誘導(dǎo)：暗培養(yǎng)較好。1.2器官發(fā)生：需要周期性光照，光照時(shí)間12－16h。第133頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、光照強(qiáng)度范圍1000-6000lx,常用3000-4000lx。采光好的培養(yǎng)室，自然光就可滿(mǎn)足；采光差的培養(yǎng)室，用日光燈為輔助光源。第134頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

三、通氣狀況固體培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)物不能埋入培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)時(shí)，則需進(jìn)行振蕩或淺層培養(yǎng)以保證氧氣供應(yīng)。第135頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第五節(jié)組培方案的篩選一、組培方案篩選步驟文獻(xiàn)檢索預(yù)備試驗(yàn)參觀(guān)咨詢(xún)最佳組培方案篩選正規(guī)試驗(yàn)第136頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、文獻(xiàn)檢索

◆植物的學(xué)名、品種名、商品名◆此種植物組培的相關(guān)報(bào)道第137頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、收集、分析的技術(shù)信息A、外植體類(lèi)型與取材時(shí)間；B、誘導(dǎo)、繼代、生根培養(yǎng)基配方；C、培養(yǎng)條件（溫度、光照、pH值等）；D、移栽馴化條件及基質(zhì)配比。第138頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四、預(yù)備試驗(yàn)

針對(duì)某些關(guān)鍵因素簡(jiǎn)單擬定試驗(yàn)方案，粗略判斷其是否有影響及影響程度、劑量的大致范圍。觀(guān)察。。。第139頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1、單因子試驗(yàn)2、多因子試驗(yàn)五、最佳組培方案的篩選第140頁(yè)，課件共152頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1、單因子試驗(yàn)

培養(yǎng)基的其它成分保持不變，只改變一種成分，從而篩選出最佳培養(yǎng)基