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細(xì)胞工程動物細(xì)胞融合與單克隆抗體知識回顧溫故知新1、列舉動、植物物細(xì)胞工程慣用技術(shù)伎倆。2、簡述植物體細(xì)胞雜交技術(shù)(流程、原理、意義等)。第1頁溫故知新植物體細(xì)胞雜交技術(shù)12月30日,一場籌備了之久“細(xì)胞太空婚禮”將在“神舟”四號飛船上舉行,其中一對“新人”是黃花煙草原生質(zhì)體和革新一號煙草原生質(zhì)體,在太空微重力條件下,細(xì)胞間配對與融合“親熱舉動”順利完成。思索:1、怎樣由煙草細(xì)胞制備其原生質(zhì)體?2、誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合方法有哪些?3、將雜種細(xì)胞培育成雜種植株依據(jù)原理及采取技術(shù)伎倆分別是什么?第2頁為何滅活病毒能誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合?喪失感染能力保留抗原活性

“太空婚禮”另一對“新人”是B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞。52頁“生物資料卡”第3頁一、動物細(xì)胞融合1.概念:動物細(xì)胞融合(cellfusion)也稱細(xì)胞雜交,是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞過程。融合后形成含有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳物質(zhì)單核細(xì)胞,稱為雜交細(xì)胞。2.原理:3.誘導(dǎo)融合方法:4.意義:第4頁植物細(xì)胞雜交與動物細(xì)胞融合比較比較項目植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合原理融合前處理誘導(dǎo)方法用途生物膜流動性植物細(xì)胞全能性生物膜流動性用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散物理法:離心、振動、電激化學(xué)法:聚乙二醇取得雜種植株主要用于制備單克隆抗體電激聚乙二醇滅活病毒第5頁我國首個含有全球知識產(chǎn)權(quán)單克隆抗體類藥品獲同意上市

近日,國家食品藥品監(jiān)督管理總局同意康柏西普眼用注射液用于治療黃斑變性眼疾,一滴無色透明“小水珠”,就能讓眼底病致盲者重見光明。據(jù)悉,該藥是高端生物藥,也是我國首個含有全球知識產(chǎn)權(quán)單克隆抗體類藥品。當(dāng)前全球銷售最好藥品中,前六位均為單克隆抗體類藥品。第6頁抗腫瘤——靶向藥品市場提速進入新世紀(jì)后,抗腫瘤藥品市場發(fā)生了重大改變,單克隆抗體靶向藥品異軍突起,帶動了整個生物技術(shù)市場迅猛發(fā)展??贵w是對其抗原有極強專一性“巡航導(dǎo)彈”據(jù)IMS數(shù)據(jù)顯示,當(dāng)前,單克隆抗體類靶向藥品銷售額已跨越500億美元大關(guān),預(yù)計將到達680億美元。“瞄準(zhǔn)裝置”+殺傷性“彈頭”第7頁1.抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生?有何作用?2.抗體主要分布在哪里?二、單克隆抗體抗體傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從血清中分離抗體漿細(xì)胞動物體內(nèi)抗體抗原傳統(tǒng)方法制備抗體特點產(chǎn)量低、純度低、特異性差第8頁怎樣大量制備化學(xué)性質(zhì)單一抗體?提醒1:僅利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)漿細(xì)胞可行嗎?

2:哪種細(xì)胞是能夠無限增殖?

3:能否使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體能力和腫瘤細(xì)胞無限增殖能力集合在一個細(xì)胞上?設(shè)計方案:漿細(xì)胞(一個)——只分泌一個特異性抗體瘤細(xì)胞——能無限增殖雜交細(xì)胞克隆化培養(yǎng)大量抗體第9頁設(shè)計方案:漿細(xì)胞——只分泌一個特異性抗體瘤細(xì)胞——能無限增殖雜交細(xì)胞請寫出設(shè)計方案實施過程,制備大量化學(xué)性質(zhì)單一抗體材料及用具:某抗原、健康小鼠(若干)、小鼠骨髓瘤細(xì)胞注射器、培養(yǎng)及培養(yǎng)器皿等所需一切條件克隆化培養(yǎng)大量抗體第10頁科勒米爾斯坦榮獲1984年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎第11頁1、抗體制備過程1、注射特定抗原蛋白目標(biāo)是什么?2、誘導(dǎo)融合方法有哪些?3、雜交細(xì)胞(只考慮兩兩融合)有幾個類型?怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞,每一個雜交瘤細(xì)胞有何特點?4、為何要進行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測?5、由單一雜交瘤細(xì)胞取得單抗方法?請結(jié)合圖2-24閱讀53頁-54頁內(nèi)容,回答以下問題既能快速大量繁殖,又能產(chǎn)生專一抗體第12頁?第13頁專一抗體檢測呈陽性多孔細(xì)胞培養(yǎng)板第14頁?克隆化培養(yǎng)專一抗體檢測選擇培養(yǎng)基雜交瘤細(xì)胞專一抗體檢測

雜交瘤細(xì)胞第15頁2、單克隆抗體概念特異性強、靈敏度高,可大量制備3、單克隆抗體優(yōu)點用單一雜交瘤細(xì)胞(漿細(xì)胞與瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生)進行克隆化培養(yǎng),得到細(xì)胞群產(chǎn)生抗體。第16頁4、單克隆抗體應(yīng)用第17頁4、單克隆抗體應(yīng)用(1)作為診療試劑——最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡易、快速同位素標(biāo)識單克隆抗體,可診療腫瘤、心血管畸形等第18頁(2)用于治療疾病和運載藥品生物導(dǎo)彈=單克隆抗體+藥品

制成生物導(dǎo)彈,將藥品定向帶到癌細(xì)胞所在位置,在原位殺死癌細(xì)胞,療效高、副作用小。第19頁甲流(H1N1)在世界各地大面積蔓延,有些國家還出現(xiàn)了死亡病例??茖W(xué)家已經(jīng)分離出H1N1病毒(一個RNA病毒)。某制藥廠依據(jù)下面流程圖生產(chǎn)預(yù)防和治療甲流抗體,請據(jù)圖回答相關(guān)問題:(1)若A細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞,則B細(xì)胞是取自感染病毒人體內(nèi)__________細(xì)胞,促進d過程慣用誘導(dǎo)劑是__________________。練一練B淋巴細(xì)胞聚乙二醇(滅活病毒)第20頁甲流(H1N1)在世界各地大面積蔓延,有些國家還出現(xiàn)了死亡病例??茖W(xué)家已經(jīng)分離出H1N1病毒(一個RNA病毒)。某制藥廠依據(jù)下面流程圖生產(chǎn)預(yù)防和治療甲流抗體,請據(jù)圖回答相關(guān)問題:(2)假設(shè)僅考慮某兩個細(xì)胞融合,則可形成____種類型C細(xì)胞,所以需用培養(yǎng)基篩選出______________________________(填特點)D細(xì)胞用于培養(yǎng)。D細(xì)胞名稱是______________。練一練3既能快速大量繁殖,又能產(chǎn)生專一抗體雜交瘤細(xì)胞第21頁甲流(H1N1)在世界各地大面積蔓延,有些國家還出現(xiàn)了死亡病例。科學(xué)家已經(jīng)分離出H1N1病毒(一個RNA病毒)。某制藥廠依據(jù)下面流程圖生產(chǎn)預(yù)防和治療甲流抗體,請據(jù)圖回答相關(guān)問題:

(3)不一樣種動物體細(xì)胞融合,相比誘變育種和雜交育種方法,含有___________________________________________________等突出優(yōu)點。(4)請說明單克隆抗體主要作用_________________________

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